SOP标准操作程序-CKMB.doc

SOP标准操作程序CKMB 肌酸激酶同功酶（货号：OSR6153）实验原理：测定CKMB（EC 2.7.3.2）用于心肌梗塞的诊断和治疗以及肌性疾病，例如：杜兴肌营养不良症。CK是由两分子聚合物，由M和B两个亚基组成，同功酶分为CKMM、CKMB和CKBB三种。在心肌梗塞时CKMM的高峰主要出现于胸痛后的18到30小时，升高很像总CK活性。可是CKMB的高峰出现于胸痛后的12小时，比总CK活性和CKMM要早。在心肌梗塞中测定CK与CKMB活性的重要性远远大于总CK。方法学：Olympus公司CKMB的测定方法采用的是改良Szasz法，试剂1中含有M亚基的抗体，这样就抑制了M亚基的活性。B亚基的活性在加入R2后表现出来。CK能使磷酸肌酸和ADP中的磷酸键转移生成肌酸和ATP。ATP与葡萄糖在HK已糖激酶与镁离子的作用下生成6-磷酸-葡萄糖。6-磷酸-葡萄糖与NADP在6-磷酸-葡萄糖脱氢酶作用下生在6-磷酸-葡萄糖酸和NADPH。在340/380nm下测定NADPH形成的速率来测定CKMB的活性。 CK磷酸肌酸+ADP-肌酸+ATP HKATP+葡萄糖-ADP+6-磷酸葡萄糖 G-6-PDH6-磷酸葡萄糖+NADP-6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H标本：病人准备：无特殊要求。类型：无溶血的血清或肝素化的血浆。标本凝集后尽快分离血清，轻微的溶血会被红细胞中的ADK污染。不可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐血浆。标本准备：避光保存可以保持最的稳定性。CK可以在2025稳定4小时，28稳定812小时，20可以稳定一个月。仪器与材料:仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪材料：奥林巴斯AU640肌酸激酶同功酶（CKMB）参与反应成份的最终浓度：咪唑缓冲液（PH 6.7） 0.1 mmol/LHK 2.5kU/LNADP 2.0 mmol/L醋酸镁 10mmol/LG-6-PDH 1.5kU/LADP 2.0mmol/LAMP 5mmol/LDiadenosine pentaphosphate 0.01mmol/LEDTA 2.0mmol/L葡萄糖 20mmol/L磷酸肌酸 30mmol/LN-乙酰半胱氨酸 20mmol/LCK-M亚基的抗体 变化的其中含有稳定剂与保护剂。注意：1.此试剂为体外诊断用。2.不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，如果排向下水道请用大量的水冲洗。试验用试管的直径在1216mm。试剂准备：试剂1：红盖的的全部酶试剂必须缓冲液溶解。试剂2：绿盖的的全部酶试剂必须缓冲液溶解。执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯AU640 CKMB试剂已经建立的程序。重复性：重复性的评估是根据NCCLS推荐的典型方法，AU640批内重复性小于5%或SD2U/L，总不精密度小于10%或SD4U/L。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。N=60批 内精 密 度总 精密 度平均值（U/L）SDCV%SDCV%21.70.371.750.622.85202.20.860.421.310.651290.24.760.376.760.52方法学比较：奥林巴斯AU640 CKMB（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做62个病人标本。相关系数达到0.99，回归方程如下：CKMB方法1=（CKMB方法20.939）0.64病人结果数值分布：10.01750U/L试剂的贮存：1.当保存于28，不开盖情况下至标签的失效期。2.开盖后放于仪器中可以稳定5天。变质指示：当试剂有浊度时，不能继续使用。校准：标准液的准备：这个实验不需要标准液。校准程序：CKMB的校准中基于NADPH的摩尔消光系数，在340/380nm为4960。质控：在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控（DR0061&62）做为未知标本进行分析，也可以用CKMB三种水平的质控血清。操作程序（逐步地）：AU640开机1.认两瓶清洗剂有足够的量。2.打开蒸馏水供应系统的阀门。3.如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的POWER ON键。4.确认打印机为开机并处于联机状态。5.在Start Condition屏幕，输入所需信息，并按F2退出。6.如果有需要请进入password。7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1N HCL的样品针清洗液。开始分析:1.把定标、质控、和标本架放在仪器的Rack Feed上。2.用鼠标点击在屏幕最上方开始分析图标。3.点击F2退出键退到主屏幕。分析参数样品体积 5微升 吐水量 0微升试剂I体积 125微升 吐水量 0微升试剂II体积 25微升 吐水量 40微升波长 340/380 方法 Rate读点 17/25 温度 37完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。计算：无需手工计算，结果为在37自动以U/L打印。报告结果:参考范围： 025U/L参考值会因年龄、性别、饮食及地域的不同而不同。根根据一个好的实验室的经验最好建立自已实验室的参考值。不正常结果的处理程序：根据仪器参数的正常值会打印异常标志。报告格式：自动的打印37U/L的报告。操作过程注意事项：操作过程的限制性：OlympusAU640 CKMB的线性范围是102000U/L。样品浓度超过线性范围应稀释重做。在AU640中应用自动重做功能，标本重做后会自动乘以稀释倍数。超范围的标本也可以手工加一份血清4份生理盐水，轻轻地混匀，在AU640上当常规标本，结果乘以5。干扰物质：CKMB受以下物质干扰：乳糜 乳糜达到200mg/dL时影响小于10%胆红素 胆红素达到40mg/dL时影响小于3%溶血 *红细胞中含有大量腺苷酸激酸（ADK），与试剂的组成成份反应，这样的标本不能用于测定。Olympus的研究结果是根据现时发表的文献，Olympus美国公司正在进行准确性的研究，对于其它物质的干扰，请参看Young发表的文献。参考文献：1. Tietz,N.W.(Ed),Fundamentals of Clinical Chemistry,3rd Edition，（1987）,383pp.2. Christenson,R.H.,Ohman,E.M.Topol,E.J.,Hanesian,M.A.,et al.Creatine Kinase MM and MB Isoforms in Patients Receiving Thrombolytic Therapy and Acute Angiography.Clin Chem 1995;41(6)844-852.3. Adams,J.E.,Abendschein,D.R.,Jaffe A.S.,Biochemical markers of myocardial injury:is MB creatine kinase the choice for the 19904. Szasz,G.,Gruber,W. and Bernt,E.,Clin Chem.22:650,19765. Szasz,G.,Gerhardt,W. and Gruber, W.,Clin Chem,23:1888,19776. In house data available on request.7. NCCLS,Interference Testing in Clincial Chemistry,EP7-P,1986.8. Tietz,N.W.(Ed),Clincial Guide to Laboratory