载脂蛋白A1(APOA1) 免疫比浊法.doc

项 目载脂蛋白A1（APOA1）方 法免疫比浊法目 录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理APO A-1与特异的抗血清反应形成不溶性的复合物，可在340nm测定该不溶性复合物的浊度。通过测定标准品，建立一个吸光度对APO A-1浓度的标准曲线就可以测定出样品中的APO A-1浓度。2标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后3个月检验才能反应其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3 抗凝剂：血浆使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。2.4 标本处理：血标本室温放置30min45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8保存。3试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司APOA1试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：组 成混合后的浓度R1: 聚乙二醇4%氯化钠106mmol/LTris/HCL 缓冲液15mmol/LR2: 抗人APO A-1抗体表面活性剂3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。3.3 试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。试剂储存在18-22稳定28天，试剂应避免污染。试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。项血脂类标准液或APOA/B标准液在2-8储存至标签所示失效日期，复溶后-20保存，可稳定一个月，2-8储存可稳定一周，参见校准血清说明书。4仪器KONELAB 30型号仪器。性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。5操作样品为血清。本法为终点法。参数见后附，附录A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。6计算A测定C = C0A标准式中：c 测定血清载脂蛋白A1浓度，g/L；A测定 标本管吸光度；A标准 标准管吸光度；CO 校准血清中载脂蛋白浓度，g /L；A A2A17操作性能7.1 精密度：批内CV 1.78，批间CV 3.65。7.2 准确度：检测结果的相对不准确度10%。7.3 灵敏度：载脂蛋白A1浓度为：1.1g/L时，浊度吸光度A340nm约1.1511.256。7.4 可报告范围：血清与试剂用量之比为2:260:65时，测定上限为2.4g/L。7.5 特异性：测量值在给定值的90%-110范围内。7.6 干扰：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。8参考值1.2-1.8 g/L9临床意义载脂蛋白A1 测定试剂盒用于定量测定血清中载脂蛋白A1的含量。ApoA可分为ApoA，A, A。ApoA和A大部分分布在HDL中，是HDL的主要载脂蛋白。ApoA主要存在于HDL中，在HDL3中ApoA占载脂蛋白的65，在HDL2中ApoA占载脂蛋白的62，在CM、VLDL和LDL中也有少量存在。血浆中呈现迁移率的一种-HDL，其内80为ApoA。ApoA的生理功能有：组成载脂蛋白并维持其结构的稳定性与完整性。实验表明，纯化的ApoA在水溶液中可以自发地和脂类结合。用CNBr法将ApoA裂解成四个肽段，发现仅有羧基末端的肽段可自发和磷脂结合。后来进一步确认这一段是ApoA224-242段，这一段既可维持双性螺旋的结构，又可以维持和脂质结合所具备的疏水性。ApoA可以激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）的活性。已经证实，ApoA是通过激活LCAT，再催化胆固醇酯化。ApoA肽段（肽段116-151）是激活作