烟草及烟草制品中总植物碱的测定.doc

BRAN LUEBBE 方法方法 No G 264 01 Rev 0 MT24 烟草及烟草制品中总植物碱的测定烟草及烟草制品中总植物碱的测定 Coresta ISO 方法 测量范围 0 200 至 0 1600 mg L 以烟碱计 原原 理理 本方法应用于烟草及烟草制品中 用水萃取烟草样品 萃取液中的总植物碱 以烟碱计 与对氨基苯磺酸和氯化氰反应生成棕色产物用比色计在 460nm 比色测定 其中氯化氰是由氯 化钾和氯胺 T 在线反应产生 见附录 1 此方法的多功能测试模块可同时用于测定氯 氨和硝酸盐 硬硬 件 件 12 英吋透析器 37 加热池 7 7ml 泵管 泵管 9 试剂 2 空气 1 进样器冲洗 使使 用用 标标 准准 水水 和和 AA3 比比 色色 计计 的的 特特 性性 数数 据 据 0 1600mg L 样品速率50 hr 样品 清洗比3 1 试剂吸收0 04 0 08 灵敏度 吸光度 1600mg L 0 5 变异系数 半峰高重复 10 次1 4 合并标准偏差 50 个随机样品 5 级校准 4 1mg L 相关系数 线性 5 点 0 9998 注 以上性能数据需使用 Bran Luebbe 公司的零部件和消耗品 参考文献 参考文献 1 CORESTA 建议方法 No 35 2 ISO 方法 No 15153 原料表原料表 除非特殊说明 所有试剂应为分析纯或同等纯度 水应为蒸馏水或同等纯度的水 安全分类 1 Brij 35 30 溶液 Bran Luebbe 备件号 T21 0110 06 2 柠檬酸 C6H8O7 H2O 3 氯胺 T C7H7ClNNaO2S 3H2O 有害 4 硫酸亚铁 FeSO4 7H2O 有害 5 酒石酸氢烟碱 C10H14N2 C4H6O6 2H2O 毒 6 氰化钾 KCN 剧毒 7 碳酸钠 Na2CO3 刺激性 8 氯化钠 NaCl 9 磷酸氢二钠 Na2HPO4 10 硼砂 Na2B4O7 10H2O 11 对氨基苯磺酸 C6H7NO3S 试试 剂剂 配配 制制 缓冲溶液缓冲溶液 A 氯化钠 2 35g 硼砂 7 6g 蒸馏水 至1000ml Brij 35 30 1ml 将 2 35g 氯化钠和 7 6g 硼砂溶于约 400ml 蒸馏水中 转移至 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容 混合均匀 再加入 1mL 30 Brij 35 溶液 混合均匀 溶液保持清澈透明即可使用 缓冲溶液缓冲溶液 B 磷酸氢二钠 26g 柠檬酸 10 4g 对氨基苯磺酸 7g 蒸馏水 至1000ml Brij 35 30 1ml 将 26g 磷酸氢二钠 10 4g 柠檬酸和 7g 对氨基苯磺酸溶于约 500ml 蒸馏水中 转移至 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容 加入 1ml 30 Brij 35 溶液 若溶液混浊须过滤 溶液保持清澈透明 即可使用 氯胺氯胺 T 溶液溶液 氯胺T 8 65g 蒸馏水 至500ml 将 8 65g 氯胺 T 溶于约 200ml 蒸馏水中 转移至 500ml 容量瓶中用蒸馏水定容 混合均匀 使 用前须用 whatman 40 号 或同等 滤纸过滤 溶液储存于冰箱中 保质期 5 天 氰化物解毒液氰化物解毒液 A 柠檬酸 1g 硫酸亚铁 10g 蒸馏水 至1000ml 将 1g 柠檬酸和 10g 硫酸亚铁溶于 400ml 蒸馏水中 转移至 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容 混 合均匀 氰化物解毒液氰化物解毒液 B 碳酸钠 10g 蒸馏水 至1000ml 将 10g 碳酸钠溶于 600ml 蒸馏水中 转移至 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容 混合均匀 氰化钾溶液氰化钾溶液 警告 氰化钾有剧毒 见安全防护措施 警告 氰化钾有剧毒 见安全防护措施 氰化钾 2g 蒸馏水 至500mL 在通风橱中 称量 2g 氰化钾置于一 1000ml 烧杯中 加入 500ml 蒸馏水并搅拌至固体溶解 磁 力搅拌 储存于棕色瓶中 萃取液 萃取液 5 冰醋酸 50ml 蒸馏水 至1000ml 将 50mL 冰醋酸溶于约 600mL 蒸馏水中 转移至 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容 混合均匀 取样器清洗液取样器清洗液 采用萃取液作为取样器清洗液 系统清洗液系统清洗液 Brij 35 30 1ml 蒸馏水 至1000ml 将 1mL 30 Brij 35 溶液加入一升蒸馏水中混合均匀 标准溶液标准溶液 按照 CORESTA 建议方法 No 39 检验酒石酸氢烟碱的纯度 本方法也可用已知纯度的烟碱或 烟碱盐来校准 实际使用过程中的酒石酸氢烟碱用量须按校准结果进行换算 如果用 5 的醋酸作萃取液 则配制标准溶液时也应使用 5 的醋酸 取样器清洗液也与此相 同 标准稀释液标准稀释液 采用 5 醋酸溶液或 0 04mol L 的硫酸溶液 样品萃取液 取样器清洗液和标准稀释液必须相 同 标准储备液 标准储备液 1 6g L 烟碱烟碱 酒石酸氢烟碱 1 3g 标准稀释液 至250mL 将经准确称量 精确至 0 0001g 的酒石酸氢烟碱 1 3g 溶于蒸馏水 转移至 250mL 容量瓶中定容 此溶液烟碱浓度约为 1 6mg mL 溶液储存于冰箱中 保质期 1 月 标准工作溶液标准工作溶液 按需要准备标准工作溶液 见操作注意事项 5 按酒石酸氢烟碱的纯度计算标准溶液中其准 确含量 溶液储存于冰箱中 保质期 2 周 操作注意事项操作注意事项 1 安全措施安全措施 氰化钾有剧毒并有刺激性 因此处理该物质时必须遵守所有的安全措施 溶液须由指定专人配 制 在整个溶液配制及接触试剂瓶的过程中均应佩戴手套和防护眼镜 为防止气体逸入实验室 试剂瓶进气口应安装碱石灰管 见图 2 氰化物解毒液 A 和 B 依流程图泵入并混合于一升布氏烧瓶中用磁力搅拌 见图 3 所有含氯 化氰的废液均应流入此瓶中并在此转化为普鲁士蓝 布氏烧瓶中的混合液可倒入一储藏瓶中 将储藏瓶置于通风橱中过夜后可将其作为废物处理 2 AA3 3 比色计用附加设定参数比色计用附加设定参数 带过 1 4 延迟时间 12 min 3 AA 比色计用附加设定参数 比色计用附加设定参数 15 mm 流动池 流动池 由于流动池路径长度不同 AA 型与 AA 型的某些参数有所不同 现列入下 灵敏度 0 7 0 8 试剂吸收 0 05 0 10 4 标准稀释液和取样器清洗液应与样品具有相同的基体 因此 如用 5 醋酸作为烟草样品 的萃取液 则标准稀释液和取样器清洗液也应使用 5 醋酸 5 每天工作结束时 用系统清洗液冲洗系统至少 15 分钟 每周用 0 1mol L HCl 10 分钟冲洗 然后用蒸馏水冲洗 20 分钟 烟草样品的分析烟草样品的分析 1 待测烟草样品经粉碎 全部可通过 1mm 筛 及测定水分 若烟样太潮难于粉碎 可 于 40 以下烘干 2 将经准确称量 精确至 0 0001g 的烟样约 250mg 置于一 50ml 干燥锥形瓶中 加入 25ml 蒸馏水 或 5 醋酸 盖上塞子 震荡 30 分钟 3 萃取液用 Whatman 40 号滤纸过滤 弃去开始流出的数毫升滤液 其余滤液收集于样 品杯中 4 按正常方式将样品和标准溶液在系统中运行 若样品液浓度超出标准溶液的范围 则 将样品稀释后再与标准溶液一起重新运行 计算计算 烟样 干重 中烟碱的百分含量按下式计算 总植物碱 c 样品中总植物碱的仪器观测值 以 mg ml 计 v 萃取液体积 通常为 25 ml 以 ml 计 m 样品重量 以 mg 计 M 烟样中的水分含量 以质量百分含量计 已知水分含量和样品重量 通过使用 AACE 软件的数据库和虚拟通道即可获得正 确的结果 重复性和再现性重复性和再现性 1993 年用 3 个单等级烟草样品进行了有 12 个实验室参与的国际合作研究 用本方法 进行分析 获得了重复性值 r 和再现性值 R 在正常操作条件下正确使用本方法时 同一操作者使用同一台仪器 在一较短时间 间隔内 分析 40 个样品杯的时间 未对仪器重新校准 由两种不同的萃取液所得到的 结果的差值超出重复性值 r 的情况 平均每 20 次不超过 1 次 在正常操作条件下正确使用本方法时 两个实验室所得到的两个结果超出再现性值 R 的情况 平均每 20 次不超过 1 次 数据分析结果见表 1 和表 2 表 1 水萃取 烟草类型平均烟碱含量 重复性值 r再现性值 R 香料烟 烤烟 白肋烟 1 17 2 90 3 97 0 05 0 08 0 12 0 19 0 41 0 55 表 2 5 醋酸萃取 烟草类型平均烟碱含量 重复性值 r再现性值 R 香料烟 烤烟 白肋烟 1 17 2 90 3 97 0 07 0 11 0 13 0 21 0 67 0 97 计算 r 和 R 时 1 个测定结果是指 1 个萃取液分析一次所得结果 附录附录 1 CORESTA 铁别工作组在 1989 1990 年进行的几项共同实验研究表明 其他两种方法也 可得到与本推荐方法相同的结果 在使用这两种方法之前应注意 氯化氰也可由硫氰酸钾与次氯酸钠在线反应生成 为使该反应有效进行 次氯酸钠的 有效氯含量应为 10 14 m m 但这样的次氯酸钠一般不易得到 溴化氰与苯胺的反应也可用于总植物碱的测定 由于溴化氰有毒 一些国家在进口和 使用时已经出现过问题 易耗品易耗品 以下估计以每天 8 小时 每年 250 天使用计算 名称图上标记配件号估计一年消耗 橙 绿 0 10 ml min 116 0549 04 2 包 橙 白 0 23 ml min 116 0549 06 3 包 黑 黑 0 32 ml min 116 0549 07 2 包 白 白 0 60 ml min 116 0549 09 1 包 红 红 0 80 ml min 116 0549 10 1 包 灰 灰 1 00 ml min 116 0549 11 1 包 黄 蓝 1 40 ml min 116 0549 19 1 包 硅树脂空气管 116 0543 01 2 米 聚乙烯管 内径 0 015 吋 562 2002 01 1 米 聚乙烯管 内径 0 03 吋 562 2015 01 1 米 聚乙烯管 116 0536 11 1 米 聚乙烯管 116 0536 16 1 米 配件推荐持有 AA 流动池 1 5 15mm 199 B018 01 1 只 AA 流动池 1 0 10mm 169 B040 10 1 只 AA 滤光片 460nm 170 B070 34 2 片 AA 滤光片 460nm 165 B044 46 1 片 AA 比色计灯 169 B143 01 1 只 AA HB 25 100 C 玻璃螺旋管 7 7ml 157 B973 32 1 只 AA 温度控制器 170 B900 01 1 只 AA 加热槽 169 B410 01 1 只 AA 玻璃螺旋管 7 7ml 169 B440 01 1 只 AA 控制器 115v 230v 169 B430 01 02 1 套 温度计 32 42 157 0283 01 1 只 渗析器 上块 12 吋 177 B010 01 1 只 渗析器 下块 12 吋 177 B009 01 1 只 渗析膜 12 吋 24 吋 170 0472 02 12 包 注射器接头 3 pt a 116 0489 01 1 只 注射器接头 2 pt b 116 0492 01 1 只 玻璃螺旋管 5 匝右旋 5TR 1