CD146在结直肠癌中的表达及其临床意义.doc

CD146在结直肠癌中的表达及其临床意义秦皇岛市第四医院病理科：康文喜 岳秀杰 韩胜春摘要目的 探讨血管内皮标志物CD146在结直肠癌中的表达及临床意义。方法 用免疫组织化学染色（SP三步法）和流式细胞仪检测法联合检测200例结直肠癌组织CD146的表达情况，分析结直肠癌不同分期、不同分化程度以及与转移和判断预后的关系。结果 免疫组化法：CD146在结直肠癌组织中的表达呈强（+），MVD计数：结直肠癌组织CD146 为30.737.15，正常结直肠组织CD146 为2.880.50（P0.05）；流式细胞术检测法： CD146+在结直肠癌组织中表达为21.374.79%，正常结直肠组织中表达为5.731.99 P0.05，两种检测方法均显示，结直肠癌组织中的CD146的表达明显高于正常大肠组织，而且在结直肠癌不同的Dukes分期、不同分化程度中，CD146的表达亦有显著差异，（P0.01），结果有统计学意义。结论 免疫组化法和流式细胞仪检测法联合检测结直肠癌患者组织中CD146的表达可能是判断结直肠癌患者转移及预后的重要指标。关键词： CD146 流式细胞仪 结直肠癌 免疫组化SP法肿瘤的生长和扩散转移与肿瘤本身微血管的生成和数量增加密切相关。无论是原发肿瘤还是继发或转移性肿瘤，在生长扩散过程中都依赖于自身的血管。CD146参与肿瘤新生血管的生成，为肿瘤的生长和转移提供必要的物质基础。CD146配体能和肿瘤细胞结合，粘附于血管内皮，并介导肿瘤细胞穿过血管向周围组织侵犯。因此，CD146是一种新发现的研究肿瘤的重要抗体。本文收集结直肠癌200例，利用CD146标记癌组织内的血管内皮细胞，观察癌组织内新生血管的变化并计算MVD值，利用流式细胞检测仪检测癌细胞悬液CD146的表达情况，研究CD146在结直肠癌发生、发展及预后判断中的重要价值。1.资料和方法：1.1 临床资料 本文收集我院2008年3月-2010年12月外科手术切除结直肠癌标本200例。其中男性146例，女性54例，年龄2779岁，平均年龄49岁。200例中，结肠98例、直肠102例，同时取同源的正常大肠组织作对照。巨检：200例中，隆起型36例、溃疡型75例、浸润型46例、胶样型43例。每例标本取组织块10-15块不等。组织学分型：高分化腺癌 115例，中分化腺癌65例，低分化腺癌20例。有淋巴结转移者124例，无淋巴结转移者76例。Dukes分期：Dukes期13例、 Dukes期63例、 Dukes期124例。1.2 主要试剂 流式细胞检测所用的鼠抗人CD105-FITC、CD146-PE 、 CD45-PC5单克隆抗体购自美国贝克曼公司。免疫组化SP试剂盒均购自北京中杉公司。14 方法 所有组织块均采用10%福尔马林固定，常规石蜡切片，HE、免疫组化染色，普通光学显微镜观察。免疫组化采用SP三部法，在血管内皮细胞膜或胞浆中表达阳性呈棕黄色颗粒。MVD 计数方法参照 Weidener 校正方法并作修改【2】。阳性显色的单个内皮细胞或细胞团, 不管有没有形成管腔, 只要与周围的微血管、肿瘤细胞和其它连接组织有一个清楚的界限, 都认为是一个可计数的微血管，而有平滑肌壁及管腔直径约 8 个红细胞直径的血管需排除在外。在微血管最多的区域计数3个不同高倍镜视野下微血管数取其平均值，微血管数3个判断为阳性。流式细胞仪检测：取手术后大肠癌组织和同源的正常组织分别制备成单细胞悬液，调节细胞数为1X106，分别加入CD105-FITC、CD146-PE各10ul避光孵育15min，加入2mlPBS1500转离心沉淀5min洗2次，弃上清，混均后加入适量PBS上机检测。1.5统计学处理 所有数据均采用SPSS13.0 差异0.05有统计学意义。2.结果：2.1 CD146在结直肠癌组织及正常肠壁组织中均有表达，但结直肠癌组织中表达数量增多，阳性表达的血管内皮细胞可为单个细胞，亦可几个细胞连接成条索状或团状，大部分阳性表达的血管结构不完整，管腔不规则，少数区域可见圆形或椭圆形血管腔。正常肠壁组织中血管表达数量少，血管结构大多数较完整，呈圆形、长条形，不规则形。结直肠癌中MVD值： CD146 30.737.15，正常肠组织 CD146 2.880.50 。流式细胞检测值：结直肠癌组织 21.374.79、正常肠组织5.731.99。 表 结直肠癌组织与正常肠组织免疫组化与流式细胞检测结果的比较 组 别 免 疫 组化 流式细胞检测 CD146 CD105+ CD146+ 结直肠癌组织 30.737.15 21.374.79 正常肠组织 2.880.50 5.731.99注：与正常组比较，t=17.39, P0.0 5; 与正常组比较，t=13.48, P0.0 5表 免疫组化与流式细胞检测在大肠癌不同分化程度中的比较 组 别 免 疫 组化 流式细胞检测 CD146 CD105+CD146+ 高分化腺癌 28.527.47 18.158.97中分化腺癌 37.341.32 23.475.36低分化腺癌 49.216.08 37.548.67注：P0.012.2 结直肠癌患者组织细胞悬液中的CD146较正常组织增高，P0.01结果符合文献报道。表 免疫组化、流式细胞检测与Dukes分期的关系 组 别 免 疫 组化 流式细胞检测 CD146 CD105+CD146+ Dukes 26.284.34 20.865.38Dukes 36.177.25 26.477.65Dukes 47.332.43 39.545.24注：P0.05图1 正常结肠组织CD146 图2:结肠高分化腺癌CD146 3. 随访 本组病例通过门诊随访、信访和电话随访，2例术后一年零三个月内死亡，3例术后存活三年，49例术后存活年以上。4例目前正在治疗中。4.讨 论CD146是阎锡蕴研究组在肿瘤血管内皮上发现的一个新靶分子，并证明该分子在新生血管中选择性高表达，参与血管生成过程。CD146又称黑色素瘤细胞粘附分子，是一种单链的膜贯通性糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族 (immunoglobulin superfamily, Igsf)的成员。CD146作为Ca2+非依赖性细胞粘附分子（CAM），参与细胞间与细胞-细胞外基质黏附作用，促进肿瘤生长、血行转移，与肿瘤侵袭和转移关系密切，被认为是肿瘤侵袭与转移的相关标志物1-3。在正常状态下，血管生成处于稳定状态。而在肿瘤微环境下，这种平衡状态被打破，微血管生成增加，肿瘤生长速度加快。CD146参与新血管的生成，为肿瘤的生长和转移提供必要的营养物质。Kang等4研究证明，CD146促进内皮细胞的黏附、增殖、迁移，提示其在血管生成过程中可能起重要作用。Zheng等5研究发现，CD146参与肿瘤的血管新生过程，不仅作为细胞黏附分子，而且作为膜信号转导分子。CD146阳性的肿瘤血管内皮与肿瘤细胞上的CD146配体结合，并能相互作用引起肿瘤细胞粘附堆积，形成瘤栓，使血管堵塞，继而粘附于血管内皮，使肿瘤细胞进一步穿过血管壁侵入周围组织3，6。CD146调节肿瘤血管生成的可能机制是激活基质金属蛋白酶2（MMP-2），基质金属蛋白酶2能降解基底膜和细胞外基质，激活生长因子，主要是血管内皮细胞生长因子（VEGF），这种作用有利于肿瘤血管生成和肿瘤转移7。 CD146的表达强度与肿瘤肿瘤的侵袭、转移能力及肿瘤的恶性发展成正相关。大量研究表明，CD146可能是一个重要的“促癌因子”，与恶性肿瘤的发展及转移有密切关系8。本文研究结果，CD146在结直肠癌中的表达为30.737.15； 在正常结肠粘膜中的表达为2.880.50。流式细胞仪检测， CD146+在结直肠癌的表达为21.374.79，在正常结肠粘膜中的表达为5.731.99，在结直肠癌中的表达明显高于正常结肠组织，在不同分化程度的结直肠癌组织中， D146的表达亦有明显的差异，高分化腺癌中CD146为28.527.47，CD146+为18.158.97；在低分化腺癌中CD146为37.341.32，CD146+为37.548.67，两者相比，低分化癌CD146的表达明显高于高分化腺癌。在不同Dukes分期的病例中，Dukes期CD146为26.284.34，CD146+为20.865.38； Dukes期CD146为39.545.24， CD146+为39.545.24 。以上结果表明，CD146在分化程度低和恶性程度高的结直肠组织中表达显著增高，证明在结直肠癌组织中有新生血管形成，这些新生血管在结直肠癌的发生、发展和血道转移的过程中起重要作用。CD146的表达与肿瘤的分化程度及Dukes分期有关，而后者与肿瘤的预后密切相关，提示CD146的表达在结直肠癌浸润、转移和预后判断中可能有重要意义。可能是判断结直肠癌患者预后及转移的重要指标。目前有关CD146的研究文献报道较少，许多问题还未完全弄清，有待今后不断深入研究。参 考 文 献1 Shih M.The role of CD146(Mel-CAM)in biology and pathologyJ.J Pathol,1999,89(1):4-11.2 Yan X,Lin Y,YangD,etal.A novel antiCD146 monoclonalantibody,AA98,inhibits angiogenesis and tum or growthJ.Blood,2003,102(1):184-191.3 WuGJ,VarmaVA,WuMW,etal.Expression of a human cell adhesionmolecule,MUC18,in prostate cancercell lines and tis suesJ.Prostate,2001,48(4):305-315.4 Kang Y, Wang F,Feng J,etal Knockdown of CD146 reduces the migration and proliferation of human endothelial cellsJ.CellRes 2006,16(3):313-318.5 Zheng C Qiu Y.ZengQ,etal EndothelialCD146 is required for in vitro lunorinduced angiogenesis The role of a disulhde bond in signaling and dimerizationJ.Int JBiochem CellBiol,2009,41(11):2163-2172.6 Satyamoorthy K, M uyrers J,M eierF,etal Mel-CAM-specific genetic suppressor