实验四血乳酸.doc

实验四 血乳酸的定量测定（对羟基联苯法或杨氏改良法）储存在肌肉中的糖原和葡萄糖，在无氧的条件下分解，终产物是乳酸。乳酸经扩散进入血液，称为血乳酸。糖酵解释放能量不多，在生命活动过程中，其意义不大，然而在剧烈活动时，例如速度耐力训练或比赛时，由于机体明显缺氧，有氧供能系统提供的能量不能满足活动时的需要，故糖酵解供能系统就成为供能的主要途径。导致大量乳酸生成，血乳酸的浓度随之增加。 据研究证明，血液乳酸的含量与运动强度关系密切，血乳酸可作为评定运动强度的生化指标，而且高乳酸的训练有利于提高运动员的速度耐力素质，增强运动员的耐酸能力。因此，血乳酸含量的测定，对于从事体育工作的人来说是很重要的。安静时血乳酸的正常值为小于2mmol/L一、 实验目的1、学会测定血乳酸的操作方法及理解其作用原理。2、进一步巩固移液管、试管实验、分光光度剂及离心机的操作技术。二、实验原理用三氯醋酸沉淀血液中的蛋白质，离心制取无蛋白清液，在无蛋白清液的乳酸能被浓硫酸（H2SO4）分解成乙醛（CH3CHO）,在铜离子（Cu2+）存在时,乙醛与显色剂对羟基联苯（Phydroxydiphenyl）反应，生成紫红色复合物。其显色的深浅程度与乙醛的量成正比。再与经同样处理的标准液比色，即可求出血乳酸的含量。三、实验试剂及仪器（一）、实验试剂1、1%氟化钠（NaF）溶液。2、10%三氯醋酸(CL,CCOOH)溶液。3、 浓硫酸（H2SO4用G.P或A.R）。4、4%硫酸铜（CuSO4.5H2O）溶液：取硫酸铜4克，加蒸馏水50ml，可加热助溶后冷却，加蒸馏水稀释至100ml均匀即是。5、乳酸标准储备液（0.05mg/ml）:取无水乳酸锂106.5mg,溶于10ml蒸馏水中，加浓硫酸2滴，移至100ml容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，均匀。（此液含乳酸1mg/ml）,置于冰箱中可长期保存。6、乳酸标准应用液(0.05mg/ml):临时称取标准储备液5ml, 移至100ml容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度。7、1.5%对羟基联苯: 称取对羟基联苯1.5g, 溶于10ml5%的氢氧化钠溶液中，加热约80助溶后冷却，加蒸馏水稀释至100ml，储存于棕色瓶中。（二）、实验仪器水浴箱、离心机、分光光度计、采血针、吸血管、消毒棉球及干棉球、移液管、试管和洗耳球四、实验操作步骤测定管（离心管）0.48ml1%氟化钠 F1新鲜血液0.02ml加1.5ml10%三氯醋酸,混匀后离心10分钟 F2取0.5ml上清液于带塞刻度试管 F3加0.03ml4%硫酸铜溶液 加浓硫酸3ml(在冰水中边加边摇) 沸水浴5分钟,然后冰水浴中冷却至15C以下加0.05ml对羟基联苯,摇匀 37C水浴保温15分钟,每5分钟摇一次沸水浴90秒,冷却至室温560nm比色,空白管调零读取胜测定管光密度值(OD测)五、计算血乳酸的百分含量血乳酸（mg%）= OD测/OD标25单位转换：mg%/9=mmol/L其中OD标值预先测得为0.165六、注意事项1、运动后血乳酸浓度高时可减少血量，若取血0.01ml，则计算结果再乘以2即可。2、必须严格