硫酸软骨素生产工艺.doc

第 5 页 共 5 页硫酸软骨素生产工艺动物软骨中均含有酸软骨素，大家畜的鼻中隔及喉头骨中含量较多，据报道，猪鼻中隔含有41%左右。药物硫酸软骨素是从软骨中提取的硫梳软骨素A和硫酸软骨素C等各种硫酸软骨素的混合物。有的商品称康得灵。本品用于因链、霉素所引起的听觉障碍症的预防和冶疗，如偏头痛、神经痛、风湿痛、肝炎等症。性状：硫酸软骨素是一种白色粉末，吸水性强，易溶于水而成粘稠液体，不溶于乙醇、丙酮和乙醚等有机溶剂中，其盐类对热较稳定上。制法：硫酸软骨的制剂和片剂，它的生产工艺主要有稀碱和浓碱和浓碱提取两种，下面各介绍两种。一、稀碱提取工艺之一工艺流程：猪喉（鼻）软骨，浸出氢氧化钠过滤，浸出液，酶水解盐酸、胰酶5354，水解液，吸附活性白土、活性炭，沉淀氯化钠、乙醇，PH值6.37，沉淀物，干燥无水乙醇6065，干品，制剂氯化钠P值5.5，注射液。操作过程：浸出：将2%氢氧化钠250千克置浸泡罐内，加入洁白干燥软骨40千克，在室温下每隔半小时缓缓搅拌1次，待浸出液比重达波美5.0（20）度时出料。用纱布过滤。骨渣再用适量蒸镏水浸泡20分钟，过滤。二次过滤液合并，使滤液总体积为200升。酶解：将上述滤液置消化罐中，搅拌下缓缓加入1：1盐酸并调PH值8.89.0，用循环水浴加热。罐内温度达50时加入相当于1：25倍胰酶1300克（宜使用高倍的胰酶）继续升温，控制消化温度为5354，不得超过50循环水浴温度5557保持，水解7小时。在水解过程中，由于氨基酸的增加，PH值会有下降，需用10%的氢氧化钠随时调整PH值至8.89.0，在水解过程后期，取反应液少许，用滤纸自然过滤到比色管中，10毫升滤液滴加10%三氯醋酸12滴。若仅微显浑浊，说明消化情况良好，否则可酌情增加适量胰酶。吸附：使内温5354保持，用1：2盐酸调节PH值至10%氢氧化风俗溶液调PH值至6.0，并加入与滤液体积等同的1%氯化钠溶液。溶解后过滤，滤液在搅拌下缓缓加入伍0%乙醇，使醇含量为75%，每隔30分钟搅拌一次，共搅拌46次，使细小颗粒增大而沉降。静置8小时以下，虹吸出上清液。硫酸软骨素沉淀用无水乙醇充分脱水，洗涤2次，抽干，6065干燥或真空干燥。制剂：硫酸软骨素注射液配制配方：硫酸软骨素40克（以纯品计）氧化钠17克注射用水加至3000毫升按配方称取标示量107%的硫酸软骨素粉，撒入注射用水中，使其膨胀，搅拌溶解。再加入氯化钠，调整PH值5.5左右，加热煮沸，用布氏漏斗趁热过滤，滤液迅速冷却，于05处放置过夜。次日过，滤液加入0.30.5%活性炭迅速加热至微沸，保持15分钟，用砂滤包扎滤纸，乘药液微沸时真空抽滤，滤液迅速冷却至室温，补加水稀释至全量，过滤至澄明，灌封，常压灭菌。硫酸软骨素溶液易繁殖微生物，必要时可在处方中加入2%（V/V）的苯甲醇。说明与讨论：本品以含硫量计可达到5%以上，相当于硫酸软骨素或硫酸软骨素钠的百分含量，分别为71.64%及75.07%。用胰酶水解，可同时作用于蛋白质和糖元。为了避免水解反应局部过热而影响酶的活力，工艺中采用循环水浴加热装置。软骨浸泡时间长，蛋白质含量则相应增多，从而会影响到成品的纯度。为些规定浸出液比重的限度为波美5度。浸出的速度与室温有关。由于此工敢的酶水解不可能完全彻底，而胰酶本身即为一种蛋白质，使用活性白土作为吸附剂，除剩余的蛋白质和多肽是有效的。活性白土的表面随着PH值的升高而增大，PH值5以上粒子显著变细，因而活性白土在中性时吸附性能较好。但由于中性时粒子过细无法通过滤器，所以在过滤前将PH值调至5.4，使过淽比较顺利。活性白土尚可吸附组织胺，与活性炭配合应用还有脱色与去热原的作用。酶水解及吸附过程温度控制在5354，不仞是酶反应的需要，且能阻止微生物生长，从过滤开始至乙醇沉淀以前，操作要迅速，避免腐败。本工艺所用活性白土的处理方法：取100千克活性白土，加常水70千克、盐酸10升搅匀，通入蒸汽煮沸1小时，冷却。用常水洗至PH值4.4，再用蒸镏水反复洗至PH值5.1。吊滤后压干，置盘中105烘干粉碎，200活化3小时后置密封容器内保存备用。二、稀碱提取工艺之二软骨（绞碎），提取2%氢氧化钠，碱性提取物，酶水解盐酸、胰酶PH值8.59.0、5356。67小时，水解液，盐酸PH值7.0，浓缩液，沉淀乙醇，沉淀物，干燥，粗制粉，精制水，盐酸PH值3.0过滤，滤液，水解氢氧化钠、胰酶PH值8.59.0、5356，4小时，二次水解液，盐酸，过滤PH值6.07.0、100滤液，乙醇，沉淀干燥。精制粉，制剂，成品。工艺过程：提取 ：将除净脂肪芨其他结缔组织的软骨绞碎，加入4倍量2%氢氧化钠溶液浸提24小时。过滤。弃去滤渣，滤液合并。酶水解：用1：1盐酸 调PH值为8.59.0，加入0.4%量的胰酶，在5356条件下不断搅拌消化67小时，速冷至30以下，再用1：1盐调PH值至7.0放置过夜(须防止腐)。虹吸上清液，沉淀用布袋吊滤。沉淀：所得滤液在60以下减雨衣缩至原体积的1/2。过滤。滤液加入95%乙醇，使醇浓度下降至65%70%，放置过夜。过滤，沉淀物用95%乙醇洗涤3次，在60以下干燥，取得粗制粉。可供口剂用。精制取上述粗制粉，加入20倍量蒸镏水溶解，用1：1盐到调PH值至3.0，冷库内放置过夜。过滤，滤液用20%氢氧化钠溶液调PH值至8.59.0，加入0.4%量的胰酶，于5356搅拌消化4小时，放冷至30以下，调PH值6.07.0，加热到100保持20分钟，立即冷却。过滤滤液加入95%乙醇，使乙醇浓度下降至70%左右，放置4小时以下。过滤。以乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀物。减压干燥，得精制粉。制剂：A康得灵注射液配方：硫酸软骨素粉撒入注射用水中，使之溶解，加入苯甲醇，最后补加注射用水足量，用盐酸或氢氧化钠溶液液调PH值6.07.0，过滤，灌封，常压灭菌即得。B康得灵糖衣片配方：硫酸软骨素粉0.12克淀粉0.125克硬脂酸镁0.005克片重0.25克取湿淀粉制粒，干燥后按配方混入乙过80100目筛的硫酸软骨素粉和硬脂酸镁压片，包衣，即得。说明与讨论：有的工艺用稀碱提取后，滤液用盐酸调节PH值至2.83.0，加热至60，过滤的溶液用氢氧化钠溶液调PH值至7.07.5，加热至70，过滤后乙醇沉淀得粗品，精制时用A、R、3942霉菌蛋白酶进行水解，效果也好。提取前的确小时应间歇搅拌；消化后要立即冷却以防腐败；浓缩工序可浓缩至原体积的1/5左右，以减少乙醇用量；精制工序中在酶水解并调PH值6.07.0后。可加23%针剂炭再加热至100。本工艺制得的硫酸软骨素制粉，含量为65%左右。所以在注射液配方中所规定硫酸软骨素量并不是实际称量的值，而是应按精粉的实际百分含量进行折算。实际上要加30克左右。软骨每千克用2%氯化钠溶液4800毫升和2%氢氧化钠溶液1200毫升的混合液提取24小时，残渣再用2%氯化钠3200毫升和2%氢氧化钠800毫升的混合液提取1次，所得提取液经胰酶水解，加热除去蛋白质后，通过乙醇沉淀等工序，能得到较纯的硫酸软骨素。三、浓碱提工艺之一工艺路线：猪喉头软骨（绞碎），水解提取浓氢氧化钠40，2小时，碱性提取物，盐酸PH值7.07.2提取液，去糖元淀粉酶，甲苯PH值7.07.2、3.840，1小时，水解液，去酸性蛋白盐酸，滑石粉PH值2.83.0，65，滤液，去酸性蛋白质氢氧化钠，滑石粉PH值7.37.5清液，沉淀乙醇，沉淀物，干燥，成品（片剂原料）。工艺过程：原料处理：将猪头洗净，在80以下蒸煮约2小时，除去脂肪结缔组织，用水洗净，10贮藏2周以上，备用。水解提取：将冷冻软骨解冻，绞碎。于水解锅加入333升波美20度氢氧化钠溶液。在搅拌下加入软骨100千克，加热至40，提取2小时。加盐酸调PH值至7.07.2，加淀粉酶8000单位（先用提取液调成粥状）和甲苯50毫升，3840水解1小时，取小样过滤，将滤液装入5毫升试管中，滴入碘试液2滴，停止水解。去蛋白质：A、去酸性蛋白质：用盐酸调节上述水解液PH值至2.83.0，加滑石粉0.75千克，加热到65后，迅速冷却至室温（必要时锅内加冷水），静置4小时以上，用折迭帆布滤器反复过滤，至滤液澄清为止。B、去碱性蛋白质：将上述溶液用氢氧化钠溶液调PH值至7.07.5，加放0.75千克，加热到75后，迅速冷却至室温，静置4小时以上。用折迭帆布滤器过滤，滤液要求澄清。沉淀、干燥：将滤液加2.5倍体积90%以上的乙醇，边加边激烈搅拌，沉淀12小时，等上面乙醇液不浑浊后，将上清液吸出进行回收。沉淀物抽干后取出，放在65%68%乙醇20000毫升中搅拌30分钟，放置过夜。次日，吸取上清液回收乙醇，沉淀物帛干手用95%乙醇20000毫升处理2次，每次1小时，抽干。然后摊于清洁的盘中，置烘箱中70烘干，为硫酸软骨素片原料。制剂：本品每片原料含量如下：硫酸软骨素钠盐0.125克滑分0.005克淀粉颗粒0.135克片得0.268克说明与讨论：加入淀粉酶的目的是除去糖元（即动物淀粉）。根据不同种类和不同效价的淀粉酶，应掌握其最适温度和最适PH值，并注意调整用量，但如果只作为片剂原料，可不必除去糖元。四、浓碱提取工艺之二工艺路线：软骨（绞碎），提取氢氧化钠40，3小时，提取液，盐酸PH值7.2滤液，酶水解，胰酶PH值7.2，40，3小时，水解液，乙醇沉淀，洗活70%乙醇，脱盐沉淀物，脱水90%乙醇脱水沉物，干燥70，成品（片剂原料）。工艺过程：提取：取除去脂肪及结缔组织的浆软骨，经解冻后绞碎，称重，置不锈钢夹层锅中，加入原料重量1/2的波美1520度氢氧化钠溶液（即每100千克碎软骨加60千克），然后搅拌加入碎软骨。加热至液温40，保温经提取3小时后，冷却。缓缓加入工业盐酸调PH值至7.2，纱布过滤，滤渣挤干后废弃。去糖无限元和蛋白质：将过滤液置夹层锅中，保温40，调PH值至2，加入3942蛋白酶（每千克原料15万单位）和胰酶（适量），同时加入甲苯100毫升，搅拌水解3小时，水解结束时取小样过滤，滤液分别用碘试液及10%三氯醋酸测定合格后，加热至70，加入适量滑石粉（约为原料的1%），保温10分钟左右，然后迅速冷却至40以下，过夜。沉淀：次日，将冷却的液体用折布过滤，滤液必须澄清，对碘试液和三氯醋酸试液反应均显阴性。将滤液放于缸内，在激烈搅拌下加入约2.5倍量的90%以上乙醇，使滤液的醇浓度下降至6570%，停止搅拌，静置沉淀。洗涤、干燥：待乙醇液加收。沉淀物用布氏漏斗抽干后取出，加入20升70%的乙醇，搅拌均匀，然后放置。待沉淀后，吸去上清液，沉淀物抽干，再加入20升95%乙醇，如上法洗涤2次。抽干后，摊于清洁的盘中，置烘箱中70以下烘干。即可作为制剂原料。说明和讨论：实践证明，本工艺与上面另一浓碱提取工艺对比，得率较高，但含量较低。有工艺用浓碱提取水化后，即缓缓用盐酸调PH值约为2.8过滤。滤液用氢氧化钠调PH值约为6.7，静置沉淀得品，再经胰酶水解，精制得精品。浓碱工艺所用氢氧化钠溶液浓度都在10%以上，有的甚至达40%以上。虽然较用稀氢氧化钠的工艺操作简便，提取时间短，但浓碱也有可能使硫酸软同膆降解和影响疗效。无论哪种工艺，原料处理很重要。可将软骨在水是煮沸10分钟左右，除去脂肪和其他结束结缔组织，然后与带棱角的石子置一转筒中放置，以磨去残留肌肉，也可用胰酶处理，即每100千克原料，加入胰酶粉约8克，在温水（不超过50）中消化约20分钟，用水洗净后即可投料。如用生产药用胰酶后的粗酶，则每100千克原料加约1千克。用量不宜过多，时间不宜过长，否则会使有效成分损失。五、产品质量检验方法目前硫酸软骨素地方标准较多，尚统一。仅以上海、河南、湖南、山东、江西和四川等省、市药品标准来比较：分子式有按硫酸软骨素（C14H21O14NS）计算，也有按其钠盐（C14H20O14NSNa）计算的。因而，即使标示量彼此相同，但实际硫酸软骨素剂量并一一致。还有以含氨基葡萄糖的限量作为纯度标准的，但标示量并未规定按照什么标准计算。标准规定量方法因各地情况不同而分为重量法和比色