实验二 细菌的染色实验.ppt

本次实验的内容 实验五细菌的简单染色法实验六细菌的革兰氏染色法实验七细菌的芽胞染色法实验八细菌的荚膜染色法 微生物染色的基本知识 一微生物染色的意义1进行微生物研究的基本技术 2微生物形态特征观察的基本方法 3不同形态微生物鉴别的基本技能 二微生物染色的染料 碱性染料 basicdye 电离后为带正电荷的阳离子 可与细胞中带负电的组分结合 如Crystalviolet Safranin Methyleneblue malachitegreen等 酸性染料 Aciddye 电离后为带负电荷的阴离子 可与细胞中带正电的组分结合 如Eosin Congored Acidfuchsin等 脂溶性染料 如Sudanblack 细菌染色的方法 实验五细菌的简单染色法 一目的与要求1掌握细菌的简单染色法2初步认识细菌的形态3巩固油镜的使用方法二基本原理碱性染料电离后带正电能与带负电荷的细菌结合合 使其着色 三主要器材1枯草芽胞杆菌 12 18h培养物 2吕氏碱性美兰染色液3仪器与用具 略 染色方法见下图 涂片 干燥 固定 染色2min 水洗 吸干 镜检 实验五细菌简单染色的操作步骤 沾取菌样 五染色结果 六注意事项1菌龄合适 2注意涂片均匀 不宜过厚 枯草芽胞杆菌示意图 实验六细菌的革兰氏染色法 一目的与要求1掌握细菌的革兰氏染色法2了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性二基本原理革兰氏染色法基本步骤 涂片固定结晶紫初染色碘液媒染乙醇脱色番红复染革兰氏阳性菌 G 和革兰氏阴性 G 表现出不同染色反应的根本原因在于它们的细胞壁结构存在差异 革兰氏阳性菌 紫色 革兰氏阴性菌 红色 StructureofaGram PositiveCellWallStructureofaGram NegativeCellWall 革兰氏阳性 阴性菌细胞壁结构的差异 实验六细菌的革兰氏染色法 三主要器材1金黄色葡萄球 大肠杆菌 约24培养物 2结晶紫 番红染色液染色方法 结晶紫初染2min 碘液媒染1min 乙醇脱色30sec 番红复染2min 涂片固定 涂片制作 水洗 水洗 水洗 五染色结果 革兰氏阳性菌 紫色革兰氏阴性菌 红色 六注意事项1菌龄合适 2注意涂片均匀 不宜过厚 3注意控制好脱色程度 实验七细菌的芽胞染色法 一目的与要求1掌握细菌芽孢染色的方法及原理2初步了解芽孢杆菌的形态特征二基本原理芽胞的简介 芽孢染色的原理 三主要器材1枯草芽胞杆菌 约2d的培养物 25 孔雀绿 0 5 番红染色液四实验操作步骤 改良的Schaeffer Fulton染色法 1菌液制备 取2滴生理盐水或蒸馏水于EP管中 沾取菌苔2环在水中混匀 2染色 EP管中加入5 孔雀绿3滴混匀 将在沸水浴中加热15 20min 3涂片固定 过火焰固定 4脱色 水洗至无绿色 5复染 0 5 番红染色3min 6镜检 油镜观察 绘出显微镜下观察到的结果 五染色结果 六注意事项1注意掌握供试验菌种的培养时间 2制备菌液时 取菌量适宜 兰绿色部分为芽胞 红色部分为菌体和孢囊 实验八细菌的荚膜染色法 一目的与要求掌握细菌荚膜染色的方法及原理二基本原理荚膜不易着色 且易被水洗 采用衬托染色使菌体和前景着色 荚膜在菌体周围形成一透明圈 三主要器材1胶质芽胞杆菌 Bacillusmucilaginosus 俗称 钾细菌 无氮培养基约2d的培养物 2绘图墨水 用滤纸过滤后的绘图墨水稀释1倍使用 四实验操作步骤 湿墨水法 1制菌液 加1滴墨水于洁净的载玻片上 挑少量菌体与其充分混合均匀 2加盖玻片 放一清洁盖玻片于混合液上 然后在盖玻片上放一张滤纸 向下轻压 吸去多余的菌液 3镜检 先用低倍镜 再用高倍