培养基营养性试验.doc

培养基营养性试验验证方案方案编号：起草人: 部门：姓名： 年 月 日审核人： 部门：姓名：年 月 日部门：姓名：年 月 日批准人： 部门：QA：姓名：姓名： 年 月 日年 月 日培养基营养性试验验证方案目录1. 概述2. 目的3. 范围4. 职责5. 培养基营养性试验1 概述 我公司生产主要品种为药用碳酸钙，微生物主要控制项目为细菌总数、霉菌、酵母菌及大肠杆菌，在建立微生物测试方法前需进行培养基营养性试验。2. 目的：制定培养基营养性试验验证方案，以文件化的证据确认：l 培养基营养性满足菌种生长要求；3范围本方案适用于药用碳酸钙微生物限度检测中培养基营养性试验的验证。4职责 为了微生物测试方法验证的有效执行，相关部门和人员职责分工见表1。表1 职责分工 职 责负责部门负责人起草验证方案上海碳酸钙厂QC 微生物分析员 起草验证报告上海碳酸钙厂QC 微生物分析员实施验证上海碳酸钙厂QC 审核验证方案上海碳酸钙厂QC 主管 审核验证报告上海碳酸钙厂QC 主管批准验证方案上海碳酸钙厂QA 经理批准验证报告 上海碳酸钙厂QA 经理5 培养基营养试验5.1 资料确认 表2 资料确认项目编号确认人/日期复核人/日期微生物检测标准操作规程培养基配制标准操作程序无菌室操作标准操作规程菌种管理规程5.2 仪器确认 表3 仪器确认设备名称编号验证报告编号确认人/日期复核人/日期热空气消毒箱高压蒸汽灭菌器恒温培养箱霉菌培养箱恒温培养箱（控制菌）净化工作台空调系统5.3 菌种确认表4 菌种确认菌种名称代数批号有效期确认人/日期复核人/日期铜绿假单胞菌CMCC(B) 10 104金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26 003枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63 501白色念珠菌CMCC(B) 98 0015.4 营养试验培养基的配制与灭菌 表5-1培养基名称批号有效期配制人/日期复核人/日期营养肉汤培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基表5-2培养基名称批号有效期配制人/日期复核人/日期营养肉汤培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基 表5-3培养基名称批号有效期配制人/日期复核人/日期营养肉汤培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基5.5 操作步骤5.5.1 菌液制备 接种铜绿假单胞菌CMCC(B) 10 104、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养1824小时；黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基，培养57天。用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌10100cfu的菌悬液。5.5.2 制作平板从上述菌悬液中分别吸取1ml到两个空白碟子中，浇制两个平板，铜绿假单胞菌CMCC(B) 10 104、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌用营养琼脂培养基浇制，白色念珠菌、黑曲霉用玫瑰红钠琼脂培养基浇制，每个培养皿浇制15-20ml培养基。5.5.3 培养条件铜绿假单胞菌CMCC(B) 10 104、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌倒置于30-35培养48小时，白色念珠菌、黑曲霉倒置于23-28培养72小时，必要时培养57天。5.5.4 阴性对照试验 分别吸取1ml 0.9%的无菌氯化钠溶液至两只空白碟子中，分别用营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基浇制，营养琼脂培养基倒置于30-35培养48小时，玫瑰红钠琼脂培养基倒置于23-28培养72小时，必要时培养57天。5.6 结果记录 表6-1培养基名称/编号批号配置日期制备批号失效期菌种编号菌种名称传代批号稀释倍数接种量结果均值培养温度结果判断铜绿假单胞菌CMCC(B) 10 104金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26 003枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63 501白色念珠菌CMCC(B) 98 001培养基名称批号有效期阴性对照结果营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基试验人： 日期：复核人： 日期：表6-2培养基名称/编号批号配置日期制备批号失效期菌种编号菌种名称传代批号稀释倍数接种量结果均值培养温度结果判断铜绿假单胞菌CMCC(B) 10 104金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26 003枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63 501白色念珠菌CMCC(B) 98 001培养基名称批号有效期阴性对照结果营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基试验人： 日期：复核人： 日期：表6-3培养基名称/编号批号配置日期制备批号失效期菌种编号菌种名称传代批号稀释倍数接种量结果均值培养温度结果判断铜绿假单胞菌CMCC(B) 10 104金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26 003枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63 501白色念珠菌CMCC(B) 98 001培养基名称批号有效期阴性对照结果营养琼脂培养基玫瑰