尼氏染色步骤.doc

小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？ 焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g蒸馏水/99ml1%冰醋酸1ml冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟；95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。 mickeyzq wrote:焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g蒸馏水/99ml1%冰醋酸1ml冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟；95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。你的没有经过复染，对比也可以这么鲜明啊我用的是1的甲苯胺蓝，具体步骤是：常规石蜡切片，二甲苯透明，酒精梯度复水，入1甲苯胺蓝室温下染3min，自来水冲洗，95酒精分化，0.5伊红复染1s，水洗，透明封片，但是结果不好，伊红复染后颜色很深，原来的蓝色被覆盖的很严重，不知道该怎么改进 换焦油紫看看,焦油紫着色比较深.（二）神经细胞尼氏体染色 正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化，它们主要分布于神经细胞的浆中，形状有大有小，如三角形，有的为椭圆形。这些物质能被大部分的蓝色染料所染色，这些染料如焦油坚牢紫（Cresyl fast violet）亚甲蓝（methylene blue）甲苯胺蓝（toluidine blue）硫董（thionin）等钭其染为蓝色。但是，当神经细胞受伤后，胞质内的尼氏体更可发生变化，严重的可消失。 焦油坚牢紫显示尼氏体 焦油坚牢紫 1g 蒸馏水 100ml *作方法： 1、切片脱蜡至水 2、用焦油坚牢紫水溶液浸染20-30分钟 3、水洗 4、用95%酒精分化 5、无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶 结果：神经细胞单位：紫-蓝色 细胞核：紫-蓝色 尼氏体：紫-深蓝色 注意：1、应用酒精分化切片，要迅速，防止过度分化，将切片上的颜色全部脱掉。 神经纤维染色使用说明： 1. 样品处理 a) 对于石蜡切片： 二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。 无水乙醇5分钟。 90%乙醇2分钟。 70%乙醇2分钟。 蒸馏水2分钟2. 尼氏(Nissl)染色 对于上述处理好的样品： 尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀）。 蒸馏水洗涤2次(每次数秒钟即可)。 95%乙醇约5秒。 此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。 注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行尼氏(Nissl)染色。3. 脱水、透明、封片或进行其它染色 a) 脱水、透明、封片： 95%乙醇脱水2分钟。 换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。 二甲苯透明5分钟。 换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。 用中性树胶或其它封片剂封片。 显微镜下观察，细胞呈现斑驳的蓝紫色染色。 b) 进行其它染色： 如果进行免疫荧光染色，或进行Hoechst等荧光染料的染色，在Nissl染色液染色后： 70乙醇洗涤2次，每次2分钟。 PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。 然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。1. 石蜡切片厚8-10微米，切片脱蜡至水2. 蒸馏水洗3. 硫堇水溶液染色（