有菌条件下的创新植物组培技术简介.doc

有菌条件下的创新植物组培技术简介一、有菌环境组培的概念在有菌环境条件下，取植物体的一部分，接种在人工制造的抑菌培养基上，在人工控制的环境条件下培养，使其按照人们的意志方向发展，不断增殖，生根，形成完整植株的生产过程，称为有菌环境下组培技术，简称有菌环境组培。二、有菌环境组培的特点1、设备简化、投资少传统组培设备的配套，一切都围绕着“无菌”二字，要求用品高压灭菌，无菌操作接种和无菌环境培养，而要达到“无菌”，设备投资大，技术要求严。创新有菌环境组培，由于在培养基中添加了安全高效抗菌剂，可在有菌环境条件下，接种、培养，省去了投资比例较大的高压灭菌锅和超净工作台。由于培养基不需要高压灭菌，所以培养瓶选择范围很宽，如利用一次性口杯做培养瓶，每瓶仅需0.1元左右。2、操作简便、效率高有菌环境组培操作，从外植体至生根苗出瓶采用不同的安全高效抗菌剂，完成培养瓶消毒、抗菌培养基制作，外植体消毒，有菌环境条件下接种、培养，操作简便，工作效率提高34倍。3、工艺简单、易推广在传统的组织培养中，严格的无菌环境、无菌操作、无菌培养成为必备条件，也使该技术成为投资大、成本高、难以普及的主要原因。创新有菌环境组培目标是面向广大农村和农民，所以把复杂繁琐的传统组培过程简化为：清洗培养瓶-浸泡瓶灭菌-配制培养基分装冷凝- -外植体消毒、接种、继代、生根培养室培养养瓶苗移栽-管理炼苗;三、有菌环境组培药品及设备配置1、药品大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物生长调节剂、安全高效抗菌剂S105、S106、S107，75%酒精、盐酸、氢氧化钠、自来水、白糖、琼脂等。2、设备普通房间、塑料筒、塑料盆、各种类型洗瓶刷、小瓷盘或不锈钢盘、药棉、垃圾桶、普通桌椅、电饭煲、简易接种箱、空调机、培养架、1天平、医用解剖剪、手术刀、镊子、塑料刻度量杯、0.110ml系列移液管、洗耳球、250ml磨口广口瓶、带塑料盖玻璃或塑料口杯或培养瓶等。四 有菌环境组培应用前景1.用于组培快繁农业园艺种苗，降低生产成本；2.用于传统组培污染瓶苗的利用，降低瓶苗废弃率；3.用于各类学校和家庭开展组培工作，有利于技术普及。有菌条件下的创新植物组培技术操作规范WYG/ZP99-09-20本标准规范了在有菌环境条件下工厂化育苗过程中无性系材料的选取、培养基的配制、有菌环境条件下操作技术、外植体的培养、组培苗的育苗技术等。本标准适用于国营、集体和个体的工厂化育苗。工艺流程: 洗-浸-配-装-消-种-养-栽-管1洗-培养瓶洗涤。 先将其中培养基冲干净,然后在清水中浸泡1小时,刷洗瓶内污物,泡入1%的洗衣粉溶解液中,再进行刷洗,尤其是瓶口处也要认真刷洗.刷洗完后于水龙头下以流水冲洗干净.最后倒置于洁净的器皿篮中,以便沥干水分.2浸-培养瓶浸泡。 培养瓶常规洗净后，浸入每升自来水加0.15 ml的S105溶液中1.5-2小时，以浸没培养瓶为度。用时捞起培养瓶及瓶盖倒扣滤干水即可。3配-培养基配制。 依照所设计的培养基配方，按比例吸取母液注入容量瓶内，加水定容，倒进不锈钢锅内加S106抗菌剂凝固剂和糖。边加热边搅拌以免煮糊，使凝固剂和糖完全溶解。用盐酸或氢氧化钠溶液调整pH值，煮沸。 4装-培养基分装。 分装前甩干水滴， 将培养基趁热均匀分装到塑料口杯或培养瓶内，三十分钟内盖好瓶盖。 把培养瓶放平，凝固后可进行接种.5.消-外植体消毒。将外植体用自来水冲洗干净。材料（茎尖、茎段、叶片、花蕾等）首先用70%酒精消毒8-30秒，自来水冲洗2次。再用0.1%HgCl2溶液加“吐温-80”两滴，浸没材料，轻微摇动，消毒5-12分钟，再用自来水冲洗4-5次。最后浸泡在100ml的消毒液（100ml自来水中加入1mlB0.5ml S106）中3060分钟。6种-组培苗接种。包括外植体接种、继代接种和生根接种。1)、工作环境：可选择干净整洁的房间，一张合适的桌子、一把椅子，准备好一个不锈钢小托盘或一块清洁的玻璃，两把手术剪刀、两把手术刀、两把镊子、一个装有适量70%酒精的广口瓶（高度适当低些，便于接种工具浸入、取出），一包药棉和一个废纸篓。2)、接种过程：接种前；工作人员必须肥皂洗手，继代、生根瓶苗用干净的纱布在浸泡灭菌的盆内擦洗掉培养瓶外的尘土。将培养瓶、瓶苗、手术刀、镊子、70%酒精广口瓶、药棉、工具架、无菌垫板等，整齐合理地摆放在桌子上。将瓶苗取出，放在经70%酒精消毒的无菌垫板上，进行接种材料的切割，每接种完一瓶，把残渣倒入废纸篓，用蘸有70%酒精的药棉擦拭数遍，不留盲区，板面酒精稍干后，进行下一瓶接种材料的切割。切割材料的刀、剪、镊子等，每接种完一瓶，用药棉擦干净叶碎片、琼脂，浸泡在70%的酒精中。接完后盖紧瓶盖.7。养-组培苗培养。培养室内的温度控制在27（2）。 光照强度为20003000Lx，光照时间每天1012小时。8。栽-组培苗移栽。移苗基质为草炭土、珍珠岩、蛭石，三者体积比为1：1：1。将50穴的育苗穴盘中装好基质后，在移栽前2天用30004000倍的悪霉灵或8001000倍的多菌灵溶液淋透消毒.移苗前洗干净粘附在生根苗根上的培养基，不要损伤组培苗的幼根。移苗在炼苗荫棚中进行，移植时，把根放进预先打好的小孔中，使根系舒展，填满土充分压实，使根土密接，要防止栽植过深、窝根或露根，每个容器内移苗一株，移植后随即浇透水。9管-移植后管理 栽植后放入育苗床用无纺布作小拱盖好小苗保湿，遮荫70%左右。经常喷雾，保持无纺布湿润，使空气湿度为80%95%。为防止发生病害，移苗后当天喷防病药剂一次，以后每星期喷药一次，常用药剂和施用方法参照GB 6001-85。三周后打开小拱两头的无纺布，以后逐渐打开小拱两边的无纺布，25天后全部打开。移植成活后，喷雾可改为用洒花淋水。每710天淋施3g/L的尿素或复合肥的水溶液，施肥后淋一次清水冲洗叶面。生长弱的植株，适当增加喷施3g/L的尿素或磷酸二氢钾溶液。 赞同0| 评论 2011-12-9 10:08 不离丑丑 | 三级 基本设备 灭菌锅可以高压锅代替，无菌室（在家里的话可以弄个大纸壳箱子，里面按一盏紫外灯，用之前开灯灭菌半个小时），酒精灯，培养皿，三角瓶，镊子，烧杯等（玻璃仪器可以从简）试剂 牛肉膏， 蛋白胨， Na k 等微量元