有机酸检测方法.doc

甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、苯乙酸、阿魏酸甲酸、乙酸、丙酸、 柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、仪器与设备waters2695 Alliance SeparationsModule高效液相色谱仪;waters2996 PhatadiodeArray二极管阵列检测器;Heraeus离心机;HORIBApH计。色谱分析(1)混标配置。分别准确称取适量上述10种有机酸并用超纯水溶解或稀释,以孔径0. 45m的微孔滤膜过滤,转移至50mL容量瓶中,定容,配制浓度为100mg/L的储备液,保存于4冰箱中。(2)标准曲线绘制。有机酸标准液的配置:根据紫外吸收灵敏度,将草酸、酒石酸、苹果酸、甲酸、丙二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸、丙酸按照0. 22. 55552. 55555的比例配制混标,逐级稀释,配制成A、B、C、D、E五个浓度级别的标准溶液,以绘制标准曲线。其中A级别标准溶液浓度为0. 2; 2. 5, 5, 5, 5, 2. 5, 5, 5, 5, 5(g/mL);B、C、D分别为上一个级别浓度的5倍稀释,E级为D级的2倍稀释。并将这10中有机酸编号为:OA01-OA10。(3)色谱条件。反相C18柱CAPCellPAK C18MG 4. 6mm250mm, 5um, pH范围: 210,流动相: 0. 1%H3PO4的去离子水和乙腈(V/V)982;检测器波长: 210nm;流速: 1mL/min;进样量: 20u;l柱温: 35;(4)流动相配置。取1mLH3PO4用超纯水稀释至1000mL,经孔径为0. 45m的微孔滤膜过滤,超声脱气后备用。乙腈(色谱纯)超声脱气备用。阿魏酸阿魏酸的测定:称取风干样品1.0000g置50ml量瓶中，加入乙酸乙酯约45ml，超声处理30min并静置过夜，加乙酸乙酯到刻度，摇匀，过滤，吸取滤液25ml水浴蒸干，残渣加甲酸溶解并移入10ml容量瓶，定容之后用荧光分析仪测定。实验仪器KQ-360DE型数控超声波清洗器、玻璃仪器烘干器、TDI5-WS多管架自动离心机、电子天平、RF-540荧光分光光度计。实验药品乙醇、乙酸乙酯、1%碳酸氢钠、2%碳酸钠等试剂均为分析纯,水为亚沸高纯去离子水,阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号: 0773-9910)。激发波长和发射波长的选择精密称取阿魏酸对照品12. 00 mg,置100 mL容量瓶中,加2%碳酸钠溶解,室温下对不同浓度的阿魏酸对照溶液在200-600 nm波长范围内进行激发波长扫描,阿魏酸的最大激发波长(ex)为343 nm,固定该激发波长,扫描得发射谱图,得到其发射波长(em)为463 nm,且随着阿魏酸浓度的增加其波长没有偏移,荧光强度随着阿魏酸浓度的增加而增大,因此,选择该最大激发波长和最大发射波长(即ex/em为343 nm/463 nm)作为后继测定的工作条件。标准曲线精密量取适量的阿魏酸对照品溶液,分别稀释成浓度为0. 3、0. 6、1. 2、1. 8、2. 4、3g/mL标准溶液,选定激发波长和发射波长条件下,测定其荧光强度,以阿魏酸对照品溶液的浓度为横标轴(x),以荧光强度为纵坐标轴(y),得回归方程为y=19.469x +4805 8,r=0.997,结果表明进样量在0. 3-3g/mL范围内线性关系良好。样品测定精密称取当归药材0. 5 g,置具塞三角瓶中,加1%碳酸氢钠25mL,超声提取30min,离心10min,取上清,加稀盐酸调pH值至2-3,用乙酸乙酯10 mL萃取3次,取上清液合并为30 mL乙酸乙酯液,再加2%碳酸钠20 mL,萃取3次4。取下层溶液用2%碳酸钠定容至100 mL,微孔滤膜滤过液取1 mL,加2%碳酸钠溶液稀释至10 mL。即作为供试品溶液高效液相色谱法测定阿魏酸的含量潘成学 贾欣 申小静郑州大学药学院郑州市450052 23 摘要 目的建立妇科调经片q-阿魏酸含量测定方法：方法 采用HPLC法，使用C。 柱，流动相为甲醇一01 磷酸溶液(30：70)，流速10 mlmin，紫外检测波长313 nm。结果 阿魏酸线性范围0038803104 tzg，平均回收率9716 ：结论所建立的方法稳定可靠、灵敏、准确、简便，可用于该制剂的质量控制。关键词 妇科调经片 阿魏酸HPLC中图分类号：119272 文献标识码：A 文章编号：16723422(2005)18-0023-02Determination of Content of Ferulic Acid by HPLCPAN Chengxue，JIA Xin。SHEN XiaojingSchool of Pharmacy，Zhengzhou Universit)，Zhengzhou，450052，ChinaABSTRACT Objective To establish a RPHPLC method for determinating content of ferulicacid in Fuketiaojing tabletMethods The content was determined by HPLCThe analysis was carriedon C 1 8 column，the mobile phase was consisted of methanol一01 phosphoric acid(30：70)withthe flow rate at 1Omlmin and the UV detection wavelength was at 3 1 3 nmResults The linear regression for Fuketiaojing tablet was over the range of 0038803104 Ixg(r=09999)The averagerecovery rate of Fuketiaojing tablet was 9716(RSD =017 n：5)Conclusion This methodwas sensitive，accurate，reproducible and exclusiveKEY WoRDS Fuketiaojing tablet：Ferulic acid：HPLC已有文献 采用高效液相色谱法对妇科调经颗粒中芍药苷的含量测定的报道；对于妇科调经片，文献一 采用HPLC方法对阿魏酸进行了含量测定，但采用的流动相为甲醇一1 冰醋酸(30：70)。我们采用高效液相色谱法，对妇科调经片及其中的药材当归、川I芎中阿魏酸进行含量测定。1 仪器与试药11 仪器高效液相色谱仪(P200II，大连依利特科学仪器有限公司生产)，UV200 11紫外可见波长检测器，ODS C。 色谱柱，Echrom98色谱工作站。12 试药阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：7739202)；妇科调经片(河南仲景保健药业有限公司)；甲醇为色谱纯；水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。2 方法与结果21 色谱条件与系统适用性试验 ODS C。 色1 河南省人口和计划生育科学技术研究院郑州市450002谱柱(46 mm 250 mm，5 m)；流动相：甲醇一01磷酸溶液(30：70)；流速10 mlmin，柱温40 ，检测波长313 nm；进样量10 l。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000。22 线性关系考察精密取阿魏酸对照品，分别制成浓度为388 gml、7761xgml、1552txgml、2328 gml、31041xgml的样品，进样量101xl，测定阿魏酸峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，阿魏酸的进样量(x)为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，Y=003126255X一02889704：(r=09999，n =5)，表明阿魏酸在00388031041xg之问呈良好的线性关系。23 精密度试验精密吸取同一对照品溶液10 ，重复进样5次，测定其峰面积积分值，结果其色谱峰的相对标准差为072 ，表明其精密度良好。24 样品含量测定241 对照品溶液制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每125oeml的溶液，即得。242 供试品溶液的制备取装量差异项下本品同批次(040428)10片，除去包衣，研细，混匀，取约l g，精密称定，分别置5O ml具塞锥形瓶中，精密加甲醇l5 ml，密塞，称定重量，超声处理60 rain，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，续滤液用微孔滤膜滤过，即得。243 阳性对照品溶液的制备依据处方中的比例，按供试品溶液的制备方法制备缺当归和川芎的阳性对照溶液。结果经进样证明阴性无干扰。244 样品含量测定分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各l0 l，进样，由峰面积计算阿魏酸的含量，同法制备并测定l0批中试产品，计算阿魏酸的含量，测定结果见表l。表1 样品含量测定结果245 稳定性试验精密吸取对照品溶液lO l，注入液相色谱仪，按0、2、4、6、8 h各测定1次阿魏酸峰面积，并计算阿魏酸含量，RSD=050 。246 重现性试验取批号为040428的样品，按供试品溶液制备方法制备5份供试液，测定分别测定阿魏酸含量，其RSD=046 。247 回收率试验 取批号为040428的样品(阿魏酸含量81841zg片)20片，精密称定重量：医药论坛杂志2005年9月 第26卷 第18期70346g，平均片重03517g片，研细，取05g，精密称定，共取5份，分别加入阿魏酸对照品适量，进样量l0 l，测定阿魏酸峰面积，计算阿魏酸含量，计算回收率，测定结果见表2。表2 回收率测定结果取样量(g)样品中含量加入量测得值回收率平均回收率RSD( )【 g ( g ( g) ( ) ( )0498l ll59 l200 23234 97 03050I