免疫细胞功能检测技术.ppt

第15章免疫细胞功能检测技术 医大一院检验科 本章内容 免疫细胞 一 T细胞功能的检测 二 B细胞功能检测 三 NK细胞活性测定 淋巴细胞 T细胞 NK和K细胞 B细胞 细胞免疫功能 非特异性免疫作用 体液免疫功能 淋巴细胞功能测定 间接了解淋巴细胞对抗原 半抗原或有丝分裂原的应答反应 体内实验 主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应 细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定 体外实验 4 T细胞增殖试验 1 2 3 T细胞介导的细胞毒试验 T细胞分泌功能测定 体内试验 一 T细胞功能的检测 一 T细胞增殖试验 DNA合成 刺激 分化 有丝分裂原 抗原 淋巴细胞 淋巴母细胞 检测方法 1 形态学检查法 2 3H TdR掺入法 优点 简便易行缺点 重复性和准确性差 刺激物PHAConA 优点 敏感性高 客观性强重复性好缺点 设备条件放射性核素污染 淋巴细胞 4 6天 母细胞化 淋巴细胞DNA合成期3HTdR掺入测定细胞内的3H 3 MTT比色法 优点 操作简便 无放射性污染缺点 敏感性低于3H TdR掺入法 培养终止前加入MTT测定溶解的甲臜 二 T细胞分泌功能测 体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后 分泌各种细胞因子 可借助免疫学 细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量 生物学活性或基因表达水平 以反映T细胞功能 三 T细胞介导的细胞毒试验 靶细胞抗原 靶细胞杀伤活力 T细胞 致敏CTL 检测方法 1 形态学方法 2 51Cr释放法 CTL 淋巴细胞 肿瘤细胞计数残留肿瘤细胞 淋巴细胞 含51Cr的肿瘤细胞测定 射线 肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力 判断预后 观察疗效 四 体内试验 Pleasewritedownaboutdetailsofintroducingyourcompany Vision duties andcustomerserviceofcompany Addyourvisioninhere 特异性抗原皮试结核白色念珠菌皮肤毛癣菌素腮腺炎病毒等 迟发型超敏反应 4 B细胞增殖能力的试验 1 2 3 B细胞抗体形成功能的检测 溶血空斑试验 体内试验 二 B细胞功能的检测 一 B细胞增殖试验 DNA合成 刺激 分化 有丝分裂原 抗原 淋巴细胞 淋巴母细胞 检测方法 1 形态学检查法 2 3H TdR掺入法 优点 简便易行缺点 重复性和准确性差 刺激物SPA 抗IgM 人 LPS 鼠 优点 敏感性高 客观性强重复性好缺点 设备条件放射性核素污染 淋巴细胞 4 6天 母细胞化 淋巴细胞DNA合成期3HTdR掺入测定细胞内的3H 3 MTT比色法 优点 操作简便 无放射性污染缺点 敏感性低于3H TdR掺入法 培养终止前加入MTT测定溶解的甲 二 溶血空斑试验 经典溶血空斑试验 被动溶血空斑试验 检测抗体 抗RBC抗体 检测抗体 抗SRBC吸附抗原的抗体 用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力 三 B细胞抗体形成功能的检测 酶联免疫斑点法 可检测抗体分泌细胞 又可检测抗体分泌量 优点 稳定 特异 抗原用量少 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌 并可定量 可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞 四 体内试验 体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素 破伤风类毒素 多价肺炎链球菌菌苗等 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫 并于免疫前及免疫后1周 2周 3周分别采血 分离血清 测定受检者免疫前后相应抗体的效价 判断受检者体内B细胞的功能 三 NK细胞活性测定 三 NK细胞活性测定 形态法 酶释放法 放射性核素释放法 化学发光 测CPM值 染色计数 上清LDH或AKP 测发光强度 杀伤肿瘤细胞K562 方法学评价 简便有主观性 方法学评价 经济 快速 简便 可定量敏感性较低 方法学评价 敏感性高 客观精确设备要求 核素污染 方法学评价 快速 简便 样品量少 敏感 可定量 一 中性粒细胞功能检测技术 二 巨噬细胞功能检测技术 细胞趋化功能的检测 1 2 吞噬和杀菌功能的检测 一 中性粒细胞功能的检测 一 趋化功能检测 原理 方法 滤膜渗透法 琼脂糖平板法 微生物细胞成分及代谢产物补体活性片段细胞因子等 中性粒细胞 趋化运动 二 吞噬和杀菌功能测定 显微镜检查法 溶菌法 NBT还原试验 二 巨噬细胞功能的检测 4 炭粒廓清试验 1 2 3 5 巨噬细胞溶酶体酶测定 吞噬功能检测 细胞毒作用测定 巨噬细胞促凝血活性测定 给小鼠定量静脉注射印度墨汁 炭粒悬液 间隔一定时间反复取静脉血 测定血中炭粒的浓度 用鸡红细胞 白色念珠菌 酵母细胞等作为吞噬颗粒 用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞 1 酸性磷酸酶的测定2 非特异性酯酶的测定 用IFN 激活小鼠巨噬细胞 观察其对125I UdR标记DBA 2小鼠肥大细胞瘤P815的杀伤活性 取已经37 预温