真菌形态的几种观察方法.pdf

真菌形态的几种观察方法 刘士旺 徐州师范大学生物系221009 真菌作为一种实验材料 在微生物实验室中的应用 是相当普遍的 正确的培养观察方法 能够如实地反映 其本质特征 下面介绍实验室中真菌形态的几种观察方 法 1 载片培养法 载片培养方法是实验室观察真菌形态的基本方法 此法的基本步骤是 在无菌条件下 用无菌吸管吸取融 化的培养真菌的固体培养基 快速地滴一滴于无菌的载 玻片上 待其冷却以后 用接种环沾取少许孢子或者挑 取一点菌丝段于凝固的培养基上 上面放上无菌的盖玻 片 然后 将此片子放入干净的培养皿中 培养皿底部放 入潮湿的吸水滤纸 或者将培养皿底放入一些水 中间 用玻璃棒隆起 将做好的培养片子搭放在上面 合适温 度下培养 将培养好的片子取出 用小镊子轻轻地取下 上面的盖玻片 把盖玻片转放于另一干净的载玻片上 待自然干燥后 两边用透明胶固定 用棉蓝染色液染色 载片培养法还可以这样进行 将厚度约0 5mm的 平板培养基用小刀切成大小0 5cm 2 的小块 挑取一小 块培养基放于干净的载玻片上 同样的方法接种 培养 观察 还可以用刀片将培养好的载玻片上的多余培养基 割去 自然干燥后 用大一点的盖玻片盖上菌丝 用同样 方法两边固定 染色观察 这种方法特别适用于产生无 性孢子的真菌的形态观察 该方法要注意以下几点 滴 的培养基不能太多 接种物不能太多 防止污染 2 插片培养法 插片培养法是实验室观察真菌形态的另一种基本 方法 这种方法的基本步骤是 将菌丝块接种于固体平 板的中间 假如是以孢子接种 则将孢子稀释液涂布于 固体平板上 然后 用小镊子夹起一块无菌的盖玻片 以 45度角的角度斜插入培养基中 不要插入培养基太深 让菌丝爬上盖玻片 培养好了以后 再用小镊子将盖玻 片取出 自然干燥以后 将盖玻片转移到一干净的载玻 片上 用同样的方法两边固定 染色观察 该方法要注 意 插片的角度要掌握好 不能太直或太平 当两面都有 菌丝时 擦去背对中心的那面的菌丝 以避免干扰 3 粘片法 粘片法是用透明胶粘贴菌丝或者孢子进行观察的 方法 用剪刀剪取一小段透明胶 用小镊子夹住一个角 轻轻地粘一些菌丝或者孢子 然后将其放入一干净的载 玻片上 在载玻片上滴一滴染色液 可以染色观察 此法 要注意 粘贴时 不要用力粘的太多 粘上菌丝或者孢子 的透明胶放入载玻片上 不要移动 要一次放好 4 平板观察法 平板观察法是在平板上直接观察真菌的方法 对菌 丝生长得比较稀疏的真菌和观察基内菌丝 此法比较直 接真实地反映菌丝的形态特征 观察时将平板的上盖拿 开 倒置于显微镜的载物台上 这种方法可以消除由于 培养体变干或者放在菌丝表面的盖玻片等可能出现的 影响 此方法要注意不要倒太多的培养基 直径10cm 的平皿倒10m l的培养基就可以了 5 玻璃纸观察法 玻璃纸观察法是一种观察真菌生长特性的一种特 殊方法 这种方法一般用于下列情况 研究菌丝生长的 促进和阻碍作用 将无菌的玻璃纸放入刚倒好的平板 中 用L型玻璃棒将玻璃纸表面铺平 然后用小刀将玻 璃纸和培养基一起切成从中心向外辐射的2 4个区 域 将菌丝块接入平板中心 此时用小针头的注射器滴 一滴抑制或促进生长的营养液 例如不同浓度的CuSO4 或者2 42二硝基苯 于玻璃纸下面的各个区域中 培养 一定时间待菌丝生长到滴加液部位时 切下玻璃纸和培 养基小块于载玻片上 观察菌丝的生长情况 此法要注 意以下几点 玻璃纸一定要铺平 不能使其中间打折 用 小刀切块时 要使各个区域间分开 避免不同浓度的抑 制剂或营养剂的相互干扰 平板不能倒得太厚 观察时 要找一带分支的菌丝尖端 定时 5m in 观察 6 真菌的染色液 真菌的菌丝一般是无色的 因此 在观察其形态时 要用染色液进行染色观察 一般的染色液如结晶紫染色 液不适合用来进行真菌染色观察 在这些染色液中 真 菌菌丝容易集结成团 不易分开 影响观察 而且菌丝收 缩 影响观察结果 常用的真菌染色液包括以下2种 1 乳酸酚酸性复红 苯酚10g 乳酸10g 甘油 20g 蒸馏水10m l 酸性复红0 5g 将水与酚混合直到溶 解 然后加入乳酸和甘油 最