噬菌体.ppt

第七节噬菌体phage 江南大学生物工程学院 病毒virus Anyofvarioussimplesubmicroscopicparasitesofplants animals andbacteriathatoftencausediseaseandthatconsistessentiallyofacoreofRNAorDNAsurroundedbyaproteincoat Unabletoreplicatewithoutahostcell virusesaretypicallynotconsideredlivingorganisms 病毒的大小 非细胞生物 真病毒euvirus 至少含有核酸和蛋白质两种组分亚病毒subvirus类病毒viroid 只含具单独侵染性的RNA组分拟病毒virusoid 只含不具单独侵染性的RNA组分朊病毒prion 只含蛋白质一种组分 真病毒的定义 一类超显微的非细胞生物 每种病毒只含有一种核酸 它们只能在活细胞内营专性寄生 靠寄主代谢系统的协助来复制核酸 合成蛋白质等组分 然后进行装配而得以增殖 在离体条件下 它们能以无生命的化学大分子状态长期存在并保持其侵染活性 病毒的分类 依据宿主范围植物病毒动物病毒微生物病毒噬菌体是感染细菌和放线菌的病毒 痘病毒棒状病毒腮腺炎病毒 噬菌体疱疹病毒乳头状瘤病毒AIDS病毒 病毒的化学组成与构造 化学组成核酸 DNA或RNA 蛋白质构造基本构造核衣壳 核酸 衣壳非基本构造包膜 刺突 典型形态的病毒 1 螺旋对称TMV病毒 典型形态的病毒 2 二十面体对称腺病毒 典型形态的病毒 3 复合对称T偶数系列噬菌体 HIV病毒 第六节噬菌体Bacteriophage phage 噬菌体是一类感染细菌或放线菌的病毒 一 噬菌体的特点1 无细胞结构 仅含一种核酸 2 不能进行独立的代谢作用 3 严格的活细胞寄生 4 个体极小 能通过细菌滤器 二 噬菌体的形态与构造 1 形态噬菌体的基本形态有蝌蚪形 微球形和丝状三种 噬菌体的类型 2 构造E coliT4构造 头部 正二十面体 颈环尾鞘 尾髓基片 刺突 尾丝 T4Bacteriophage 3 大小T4 头部65 95nm 尾部20 95nmf2 f20 25nm 4 化学组成蛋白质核酸 dsDNA dsRNA ssDNA ssRNA T4Bacteriophage 三 噬菌体的生长和繁殖 1 吸附adsorption噬菌体的吸附器官与受体细胞的特殊位点的接触与结合吸附的专一性 寄主专一性 位点专一性 T3 T4 T7 脂多糖 T2 T6 脂蛋白 雄性专一噬菌体 性纤毛 过程 尾丝散开 刺突固着于特异性位点 T4吸附对于T类噬菌体的吸附器官是尾丝和刺突 尾丝首先触及寄主细胞表面 然后刺突固定 2 侵入penetration噬菌体核酸物质进入受体细胞T4 尾部的酶水解细菌细胞壁肽聚糖层产生一小孔 尾鞘收缩 尾髓伸入细胞中 头部的核酸被压进细菌细胞 蛋白质外壳留在细胞外 M13 f1 fd 其DNA自性纤毛中空管侵入寄主细胞 T4核酸的侵入过程 M13 3 增殖replication噬菌体核酸物质及蛋白质在寄主细胞内的合成早期及次早期的转录与转译作用细菌DNA被DNase破坏噬菌体核酸的复制后期的转录与转译作用 T4DNA复制的特点 一是由于T4DNA中的胞嘧啶被羟甲基胞嘧啶取代 所以在其DNA复制之前 必须由噬菌体编码的酶合成羟甲基胞嘧啶 并且在T4DNA合成后 羟甲基胞嘧啶被葡萄糖基化 以保护T4DNA免遭E coli核酸酶破坏 二是在T4DNA复制过程中 由6 8个拷贝结合形成非常长的DNA链 多连体 增殖过程 4 成熟maturity 装配 assembly 在增殖期合成的噬菌体的核酸和蛋白质按一定的顺序装配成噬菌体颗粒 5 释放release子代噬菌体脱离寄主细胞而得以释放 四 噬菌体一步生长曲线OneStepGrowthCurve T2 潜伏期latentphase从噬菌体吸附细菌细胞至细菌细胞释放出新的噬菌体的最短时间 裂解期risephase从被感染的第一个细胞裂解至最后一个细胞裂解完毕所经历的时间 平稳期plateau指被感染的宿主已全部裂解 溶液中噬菌体数达到最高点后的时期 裂解量burstsize每个被感染的细菌释放新的噬菌体的平均数不同的噬菌体的裂解量不同 T2为150左右 5 447 T4约100 fx174约1000 而f2则可高达10000 五 溶源性lysogeny 1 名词解释 1 敏感细菌sensitivebacteria 2 烈性噬菌体virulentphage 3 温和性噬菌体temperatephage 4 原噬菌体prophage 5 溶源性细菌lysogenicbacteria E coliB l 6 溶源化lysogenization 2 溶源性细菌的基本特征 1 具有遗传性 2 能自发裂解 3 能被诱发裂解 4 具免疫性 5 可以复愈 6 可获得新的生理特性 3 温和性噬菌体的存在状态 1 游离态 游离的具有感染性的噬菌体粒子 2 整合态 整合或附着在细菌染色体上处于原噬菌体的状态 3 营养态 在寄主细胞内处于复制和装配的状态 六 噬菌体的生活史 1 烈性噬菌体的生活周期 lyticlifecycle 2 温和性噬菌体的生活周期lyticandlysogeniclifecycle 七 噬菌体的分离检查 分离样品的制备根据感染特征 选择所需采集的标本的种类除去杂菌 离心或过滤 诱导噬菌体的产生 uv或丝裂霉素C 样品接种噬菌体标本可接种于生长在培养液或营养琼脂平板中的细菌培养物 噬菌体存在的表现细菌培养液变清或细菌平板上出现噬菌斑 1 噬菌斑 plaque 在细菌菌苔平板上 由于噬菌体感染 使寄主细胞不断裂解而形成的肉眼可见的空斑 空斑中的细菌被全部或部分裂解 噬菌斑形成 噬菌体宿主细胞培养基 一些噬菌斑的形状 2 噬菌体效价测定方法效价 titer 每毫升试样中所含有的具侵染性的噬菌体粒子数 又称噬菌斑形成单位 plaque formingunit PFU 1 双层琼脂法 方法 底层 2 营养琼脂 上层 3 4ml1 营养琼脂 0 2ml宿主菌液 0 1ml样品液 培养16 24hrs后观察 优点 定量性好 结果清晰 缺点 费时 麻烦 2 单层琼脂法 3 载片快速法 八 噬菌体的污染与防治 污染现象污染原因预防措施 1 严格控制活菌体排放 使噬菌体在环境中得不到繁殖 2 选育和使用抗噬菌体的菌种 3 几株亲缘不同的菌种定期轮换使用 4 药物防治4 污染后的补救 九 酵母的病毒 Killer因子 1 杀伤因子 Saccharomycescerevisiaekiller是