区带毛细管电泳法测定潮汕凉果中的添加剂含量及硝酸根亚硝酸根实验.doc

实验一 区带毛细管电泳法测定潮汕凉果中的添加剂含量一、实验目的1.初步掌握毛细管电泳法的原理2.掌握毛细管电泳仪和超声波辅助萃取装置的使用方法3.掌握潮汕凉果中添加剂定量分析的基本过程及方法二、实验原理毛细管电泳（capillary electrophoresis, CE），又称高效毛细管电泳（HPCE），CE统指以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间的淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术（见左图）。毛细管电泳的突出特点是：毛细管电泳的仪器简单，操作简便，容易实现自动化分析速度快，分离效率很高；操作模式多，分析方法开发容易；实验成本低，消耗少；应用范围广。三、仪器与试剂1.仪器P/ACE MDQ 毛细管电泳系统、二极管阵列检测器（美国Beckman），毛细管总长度：60.2cm，有效长度：50 cm，内径：75m；pHS3C型精密pH计（上海精密科学仪器有限公司）；0.22m水系滤膜（北京九鼎高科过滤设备有限公司）、KQ250型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；JG300型食物搅拌机（佛山市顺德区华硕五金电器有限公司）；LD5型电动离心机（金坛市荣华仪器制造有限公司）Human Power纯水器(韩国，普析代理)。2.试剂磷酸二氢钾、NaOH、山梨酸、苯甲酸、糖精均为分析纯，样品为潮汕凉果（如咸金枣、柠檬、甘草梅肉、香草榄等），水为超纯水。四、参考实验步骤1.样品溶液的制备称取5.000 g 经食物搅拌机捣碎的样品于50mL比色管中，加入50mL水浸泡过夜，次日，于超声波清洗器中萃取20min，先滤纸过滤再经0.22m水系滤膜过滤，将滤液收集合并，保留大约4mL溶液，冷冻保存，即为待测液。2.毛细管电泳仪的操作要领开机预热20min，设定工作温度为30oC。每天在毛细管使用前须在20pis压力下依次用H2O冲洗2min甲醇冲洗2minH2O冲洗2min0.1mol/L HCl冲洗2minH2O冲洗2min1mol/L NaOH冲洗10min H2O冲洗2min20mmol/L( pH = 7.40) 磷酸盐缓冲液冲洗2min。样液、标液、缓冲液一定要进行过滤及超声处理。本实验的电泳条件以磷酸盐20mmol/L( pH = 7.40)为电泳缓冲液，在12kV恒压下进行电泳分析，分离温度30oC，设置192nm、202nm、254nm三个检测通道同时检测，采用压力进样，进样压力0.5pis，进样时间5.0 s；每次测定前用1mol/LnaOH冲洗15min，水、电泳缓冲液各冲洗3min。3. 潮汕凉果中的山梨酸钾、苯甲酸、糖精钠含量的测定称取5.000 g经食物搅拌机捣碎的潮汕凉果于50mL比色管中，加入50mL水浸泡过夜，次日，于超声波清洗器中萃取20min，先滤纸过滤再经0.22m水系滤膜过滤，该滤液即为电泳仪可检测的样品溶液。照前述电泳操作条件测定该样品溶液，得到谱图保存并打印。4. 山梨酸钾、苯甲酸、糖精钠的标准曲线参照国标法，准确称取山梨酸、苯甲酸、糖精。分别溶解、定容，使其质量浓度均为1000.0mg/L，以0.22m滤膜过滤；然后，控制山梨酸在0.250 100mg/L、苯甲酸在0.100 50.0mg/L、糖精在0.100 50.0mg/L范围内配制系列混合标准液。五、数据处理根据山梨酸、苯甲酸、糖精混合标准液的电泳谱图，得到在此电泳条件下山梨酸、苯甲酸、糖精的保留时间，同时从谱图上可计算出山梨酸、苯甲酸、糖精的峰面积。由于山梨酸、苯甲酸、糖精的面积与山梨酸、苯甲酸、糖精的浓度存在对应的关系，绘制峰面积浓度标准曲线。从待测样品谱图中，根据峰保留时间确定山梨酸、苯甲酸、糖精，记录这些峰的峰面积，从标准曲线上查得对应的浓度值。经过计算得出潮汕凉果中山梨酸、苯甲酸、糖精的质量分数。六、问题与思考1.简要说明毛细管电泳法(CE)与液相色谱法(LC)的区别与联系。2.进入毛细管电泳仪的溶液，为什么必须经过超声脱气这一步骤？如果没有脱气，将会对实验结果产生什么样的影响？参考文献1. 李辉. 食品中金属离子的微波消解高效毛细管电泳法测定J. 分析测试学报，2002，21（2）:9496.2. 胡美珍，王文铮，张燕琴. 毛细管电泳法分离测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精J. 上海师范大学学报(自然科学版)，2004，33（3）:6366.3. 陈义编著. 毛细管电泳技术及应用M. 北京：化学工业出版社，2000，9.附.毛细管电泳系统操作规程及注意事项1.毛细管电泳系统特别怕潮气、灰尘和震动，仪器应处在干燥、清洁、无震动的环境中。2. 实验所用的所有溶液都必须预先经孔径为0.45m以下的滤膜过滤，以免堵塞毛细管。3.实验时先打开主机前面板确认冷却管中有冷冻液，然后再打开前盖板，放入样品及缓冲液。4.打开仪器电源，进入操作软件并设置相关的工作条件，预热30分钟。5.按操作要求进行标准曲线和未知样品的测试。6.测试完成后，先用二次纯净水清洗毛细管2分钟；然后点击load，打开主机前盖板（应将前盖板推至最高处，让冷冻液流下），关上盖板，关计算机和主机；最后，将样品及缓冲液从托盘中取出，严禁样品及缓冲液放在托盘上过夜。7. 定期清洗仪器灰尘。仪器长期不使用，至少每周开机1小时。 （衷明华）区带毛细管反向电泳法测定水中NO3-、NO2-一、实验目的1.初步掌握毛细管电泳法的原理及仪器使用方法2. 掌握水质中NO3-、NO2-定量分析的基本过程及方法二、实验原理毛细管电泳（capillary electrophoresis, CE），又称高效毛细管电泳（HPCE），CE统指以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间的淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术（见右图）。毛细管电泳的突出特点是：1. 毛细管电泳的仪器简单，操作简便，容易实现自动化2. 分析速度快，分离效率很高；3. 操作模式多，分析方法开发容易；4. 实验成本低，消耗少；5. 应用范围广。三、仪器与试剂1.仪器P/ACE MDQ 毛细管电泳系统、二极管阵列检测器（美国Beckman），毛细管总长度：60.2cm，有效长度：50 cm，内径：75m；pHS3C型精密pH计（上海精密科学仪器有限公司）；0.45m水系滤膜（北京九鼎高科过滤设备有限公司）；Human Power纯水器(韩国，普析代理)。2.试剂1.0000 mgmL-1 NO-3标准储备液、1.0000 mgmL-1 NO-2标准储备液, 20 mmol/L NaAc-HCl (pH = 3.00)电泳缓冲液，样品为东丽湖水样，水为超纯水。四、参考实验步骤1.样品溶液的制备直接取水样若干先用滤纸过滤，再用0.45m水系滤膜过滤，待上机分析。2.毛细管电泳仪的操作要领开机预热20 min，设定工作温度为30 oC。每天在毛细管使用前须在20 pis压力下依次用H2O冲洗2 min 甲醇冲洗2 min H2O冲洗2 min 0.1 mol/L HCl冲洗2 min H2O冲洗2 min 1 mol/L NaOH冲洗10 min H2O冲洗2 min 20 mmol/L (pH = 3.00) 醋酸盐缓冲液冲洗2 min。样品溶液、标准溶液、电泳缓冲液一定要进行过滤及超声处理。本实验的电泳条件以醋酸盐20mmol/L(pH = 3.00)为电泳缓冲液，在20KV恒压下进行电泳分析，分离温度30oC，在215 nm波长处检测，采用压力进样，进样压力0.5 pis，进样时间5.0 s；每次测定前用1mol/L NaOH冲洗5 min，水、电泳缓冲液各冲洗2 min。3. NO3-、NO2-的标准曲线及样品溶液的测定取NO3-、NO2-标准储备液，配制的混合标准液控制NO3-在0.150 100 mg/L、NO2-在0.35 200 mg/L范围内按毛细管电泳仪的操作要领自动测定。过滤后的样品溶液也同样处理。五、数据处理根据NO3-、NO2-混合标准液的电泳谱图，得到在此电泳条件下NO3-、NO2-的保留时间，同时从谱图上可计算出NO3-、NO2-的峰面积。由于NO3-、NO2-的面积与NO3-、NO2-的浓度存在对应的关系，绘制峰面积浓度标准