HP-111有机残留检测方法学验证方案一.doc

CAL-MVP 盐酸厄洛替尼有机残留检测方法验证方案第 16 页 共 16 页1目的确保盐酸厄洛替尼有机残留检测方法准确、重现并耐用，为建立检验操作程序提供依据。2范围盐酸厄洛替尼有机残留检测方法方法学验证。3验证小组成员及职责成员姓名部门职务工作分工负责人刘晓红分管质量副总批准验证方案审核张加明QAQA科长负责对方案及报告进行型式审核组长邓福英QCQC科长组织协调和实施验证工作组员QC检验员检测验证的分析工作组员QC检验员检测验证的分析工作4验证依据ICH Q2 QC-SMP0145验证内容5.1验证可接受标准项目指标方法专属性稀释剂空白实验不干扰样品测试溶剂混合实验分离度大于1.5系统适用性理论塔板数大于10000重复进样各溶剂峰面积的RSD%小于10.0%对称因子0.8-1.2分离度大于1.5检测限符合S/N=3(+ 1)：1定量限符合S/N=10(+ 1)：1线性测定相关系数大于0.99方法耐用性色谱条件略有变化情况下测试，各溶剂峰分离度大于1.5重复性(RSD%)小于10.0%加入实验符合S/N=3(+ 1)：1方法准确度（回收率）90.0%110.0%中间精密度小于10.0%5.2测试方法的验证5.2.1色谱条件仪器：Agilent 7890气相色谱仪（带Agilent 7694顶空进样器）QC-097色谱柱：DB-624 (30m0.53 mm3m）柱温：初温40，维持5分钟，以每分钟20升温至220，维持3分钟。汽化室温度：200 检测器温度：300检测器：FID 流速：3.0ml/分钟分流比：1：1 进样量：3.0mlAgilent 7694顶空进样器时间参数：平衡时间30分钟，加压时间0.5分钟，充环时间0.2分钟，压力平衡时间0.2分钟，进样时间1分钟。温度参数：平衡温度80，定量环120，输送管温度130。5.2.2验证内容5.2.2.1工艺中用到的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、一氯甲烷、二氯甲烷、异丙醇、正己烷、苯、二甲基甲酰胺、甲苯和三乙胺。三乙胺为原料M2可能残留的有机溶剂，因中间体Z2的后处理过程经过多次水洗，且成品制备过程中加入盐酸成盐，系统pH值约为2左右，故关键起始原料M2中可能残留的三乙胺在成品中没有存在的可能性。故我们对关键起始原料中除三乙胺以外的类溶剂、中间体及成品制备过程中用到的所有溶剂，即二氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇、甲苯、丙酮，采用气相顶空进样法在成品进行研究与控制（方法学验证一）。5.2.2.2 一氯甲烷为成品制备过程中产生的副产物，考虑到一氯甲烷常温下为气体，我们通过购买一氯甲烷甲醇溶液作为对照品来测定样品中一氯甲烷的含量。因一氯甲烷对照品为甲醇溶液，会干扰成品中甲醇的测定，以及方法学验证一中溶剂N,N-二甲基乙酰胺会干扰N,N-二甲基甲酰胺的测定，故我们另建系统对成品中的一氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺和苯进行研究与控制（方法学验证二）。5.2.2.3 因存在样品效应，正己烷回收率不能达到80%120%，故在试生产阶段转给合川时，将溶剂正己烷，成品中不进行检测，在中间体Z2中进行单独控制（方法学验证三）。5.2.3 验证用样品、试剂及结果概要 5.2.3.1 有机溶剂及残留允许限度见下表：溶剂名称ICH指南的分类ICH限度指标内控指标一氯甲烷无毒理数据600ppm（USP467）600ppm乙醇类5000 ppm5000 ppm丙酮类5000 ppm5000 ppm异丙醇类5000 ppm5000 ppm甲醇类3000ppm3000ppm正己烷类290 ppm290 ppm甲苯类890 ppm890 ppm二氯甲烷类600 ppm600 ppmN,N-二甲基甲酰胺类880ppm880ppm三乙胺类290ppm-苯类2ppm2ppm5.2.4溶液配制5.2.4.1贮备液甲醇贮备液：精密称取甲醇0.75g，置装有适量稀释剂的100ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。乙醇贮备液：精密称取乙醇1.25g，置装有适量稀释剂的100ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。异丙醇贮备液：精密称取异丙醇1.25g，置装有适量稀释剂的100ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。丙酮贮备液：精密称取丙酮1.25g，置装有适量稀释剂的100ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。二氯甲烷贮备液：精密称取二氯甲烷0.15g，置装有适量稀释剂的100ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。甲苯贮备液：精密称取甲苯0.22g，置装有适量稀释剂的100ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。5.2.4.2空白溶剂（稀释剂）N,N-二甲基乙酰胺5.2.4.3标准溶液分别精密移取“5.2.4.1项”下贮备液1.0ml同置于100ml容量瓶中，用稀释剂稀释到刻度，摇匀，即可。5.2.4.4样品溶液称取供试品约0.125g，精密称定，置10ml顶空瓶中，加入5.0ml稀释剂，压盖密封，水域加热，使其溶解，即得。5.2.5测定方法移取5ml标准溶液置10ml顶空瓶中，压盖密封，进样；称取供试品约0.125g，精密称定，置10ml顶空瓶中，加5.0ml稀释剂，加盖密封，立即振摇，使其溶解，即得，进样，记录色谱图，按外标法计算测定结果。计算公式样品的有机残留量按下式计算：式中：CT-样品溶液中有机溶剂的浓度，ppm；Cs-标准溶液中有机溶剂的浓度，ppm；As-标准溶液中有机溶剂峰响应值；AT-样品溶液中有机溶剂峰响应值；f u-样品的稀释因子。5.3方法专属性5.3.1实验过程移取各贮备液1.0ml到不同的100ml的容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，顶空进样，记录色谱图。移取各贮备液1.0ml到同一个100ml的容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀得到混合溶液，顶空进样，记录色谱图。称取供试品约0.125g，精密称定，置10ml顶空瓶中，加入5.0ml稀释剂，压盖密封，水域加热，使其溶解，顶空进样，确定样品不干扰溶剂的检测。称取供试品约0.125g，精密称定，置10ml顶空瓶中，加入5.0ml混合溶液，压盖密封，水域加热，使其溶解，顶空进样，确定溶剂、样品互不干扰。移取稀释剂5.0ml到10ml顶空瓶中，压盖密封，顶空进样，确定稀释剂不干扰溶剂的检测。表 1 方法专属性数据溶剂名称单独进样混合进样保留时间（min）保留时间（min）分离度（R）甲醇乙醇异丙醇丙酮二氯甲烷甲苯样品对溶剂检测 干扰，稀释剂对检测 干扰。5.3.2结论：5.4方法耐用性5.4.1实验过程用专属性下的混合溶液分别调整各实验条件(柱温1、升温程序1/min、柱流速0.1ml/min)，测试标准溶液，记录溶剂间的分离度和保留时间，结果见下表。表 2 耐用性测试表溶剂正 常条 件柱流速（ml/min）柱温（）升温速率（/min）0.91.1991011416甲醇RT( min)分离度乙醇RT( min)分离度异丙醇RT( min)分离度丙酮RT( min)分离度二氯甲烷RT( min)分离度苯RT( min)分离度甲苯RT( min)分离度5.4.2结论：5.5检测限及定量限5.5.1实验过程将各贮备溶液逐级稀释，进样并记录色谱图，符合SN3(+ 1)：1的进样浓度即为检测限浓度（进样两针），符合SN10(+ 1)：1的进样浓度即为定量限浓度（进样两针）。表 3 定量限数据溶剂名称溶液浓度（g/ml）保留时间（min）SN定量限(成品中存在浓度ppm)甲醇乙醇异丙醇丙酮二氯甲烷甲苯表 4 检测限数据溶剂名称溶液浓度（g/ml）保留时间（min）SN检测限(成品中存在浓度ppm)甲醇乙醇丙酮异丙醇二氯甲烷甲苯5.5.2结论：5.6加入实验5.6.1实验过程称取一批样品两份，向其中加入未检出溶剂的检测限浓度水平，顶空进样，记录色谱图，计算各溶剂的S/N表 5 加入实验数据记录溶剂S/N平均甲醇乙醇异丙醇丙酮二氯甲烷甲苯5.6.2结论：5.7线性（LOQ内控限度200%）5.7.1实验过程分别称取甲醇0.75g，乙醇1.25g，异丙醇1.25g，丙酮1.25g，二氯甲烷0.15g和甲苯0.22g同置于100ml容量瓶中，再移取0.1ml、0.2ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml，分别依次到6个100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，与定量限溶液组成线性溶液。每个浓度点进样2次，记录色谱图，以各溶剂的浓度C (g/ml)为横坐标，各溶剂峰面积A为纵坐标，做二次回归，得到回归方程及相关系数。表 6 线性测定结果溶剂名称LOQ10%20%50%100%150%200%甲醇C(g/ml)峰面积回归方程及相关系数 乙 醇C(g/ml)峰面积12回归方程及相关系数异丙醇C(g/ml)峰面积12回归方程及相关系数丙酮C(g/ml)峰面积12回归方程及相关系数二氯甲烷C(g/ml)峰面积12回归方程及相关系数甲苯C(g/ml)峰面积12回归方程及相关系数5.7.2结论：5.8系统适用性5.8.1标准溶液取甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、甲苯、丙酮贮备液各1.0ml到同一个100ml容量瓶中，用稀释剂稀释到刻度，取5ml到10ml顶空瓶中，平行移取6份顶空进样，记录色谱图，计算溶剂间的分离度、对称因子、理论塔板数及各溶剂峰面积RSD%。表7 系统适用性数据记录溶剂名称甲醇乙醇异丙醇丙酮二氯甲烷甲苯峰面积123456RSD%理论塔板数分离度对称因子5.8.2结论：5.9重复性5.9.1实验过程选择一批样品，平行称取6份，照“5.2.4溶液配制”项下制成样品溶液，进样并记录色谱图，计算6份样品溶液中每个残留溶剂的平均含量及相应的RSD%。表 8 重复性数据记录溶剂名称样品中溶剂检出值(ppm)平均值RSD%123456甲醇乙醇异丙醇丙酮二氯甲烷甲苯5.9.2结论：5.10方法准确度5.10.1实验过程称取一批样品9份，配制成样品溶液，在3份样品溶液中加入5ml相对标准浓度30%的溶液，另3份中加入5ml相对标准浓度60%的溶液，剩余3份中加入5ml相对标准浓度120%的溶液，制成3种不同准确度验证溶液，以重复性数据为空白对照。计算各溶剂的加样回收率。回收率计算公式为： 表9 方法准确度测定结果 甲醇溶剂残留量（ppm）加入水平称样量（g）峰面积检出值（ppm）加入量（ppm）回收率单次测定平均值RSD%甲醇 乙醇溶剂残留量（ppm）加入水平称样量（g）峰面积检出值（ppm）加入量（ppm）回收率单次测定平均值RSD%乙醇 异丙醇 溶剂残留量（ppm）加入水平称样量（g）峰面积检出值（ppm）加入量（ppm）回收率单次测定平均值RSD%异丙醇 丙酮溶剂残留量（ppm）加入水平称样量（g）峰面积检出值（ppm）加入量（ppm）回收率单次测定平均值RSD%丙酮 二氯甲烷溶剂残留量（ppm）加入水平称样量（g）峰面积检出值（ppm）加入量（ppm）回收率单次测定平均值RSD%二氯甲烷 甲苯溶剂残留量（ppm）加入水平称样量（g）峰面积检出值（ppm）加入量（ppm）回收率单次测定平均值RSD%甲苯5.10.2结论：5.11中间精密度（不同人员、不同时间、相同仪器）5.11.1实验过程选择一批样品，平行称取6份，照“5.2.4溶液配制”项下制成样品溶液，进样并记录色谱图，计算6份样品溶液中每个残留溶剂的平均含量、相应的RSD%以及两人数据的RSD%。表10 中间精密度数据记录人员序列溶剂甲醇(ppm)乙醇(ppm)异丙醇(ppm)丙酮(ppm)二氯甲烷(ppm)甲苯(ppm)人员1123456