陈晓娣 外文译文(定稿).doc

169毕业设计(论文)外文资料翻译题 目: 鉴定一个非天然氨基酸中细菌铁载体的结构 院系名称： 生物工程 专业班级： 生工F0702 学生姓名： 陈晓娣 学 号： 20074850524 指导教师： 伊艳杰 教师职称： 副教授 起止日期： 2011.1-2011.2 地 点: 9435 附 件： 1.外文资料翻译译文；2.外文原文。 指导教师评语： 签名： 年 月 日附件1：外文资料翻译译文鉴定一个非天然氨基酸中细菌铁载体的结构：假单胞菌 NCPPB 2 192铁载体-脓菌素Pt的结构，和荧光假单胞菌铁载体CCM2798脓菌素Pf的结构， 摘要：绿脓菌素NCPPB 2192中分离并鉴定有A.B两种，荧光假单胞菌CCM 2798（脓菌素Pf/1,Pf/2,Pf,Pf/3/1,Pf/3/2）在缺铁的环境中培养，它们的结构通过使用FAB-MS核磁共振和CD技术。这些嗜铁素都是多肽，出了绿脓菌素pf313,在肽链的氨末端，在绿脓菌素pa中，从恶臭假单胞菌ATCC 15692中分离 和假单胞菌素B10。从假单胞菌素B10中获得。这个菌从2.3-双羟基喹啉平皿中筛选。Pt绿脓菌素多肽与一个线性肽链结合，D-ser-l-lys-l-ser-D-ser-l-thr-D-ser-l-OHO-l-thr-D-ser-D-OHO(环状)，它的碳末端被一个环状D-N6-羟乌氨酸阻断，在绿脓菌pf中，多肽链是线性的，Ser-CTHPMD-gly-l-ser-D-threo-OHASP-L-Ala-gly-Dala-gly-l-OHOra（环状）且含有一个特殊的氨基酸。由于1molde 丝氨酸和1mol2-4二氨丁酸，形成了环状胺绿脓素pt仅仅是由于多肽链上E3N上的六级键不同。PtA中是琥珀酸。绿脓素中的琥珀酸和酮戊二酸是c-s与多肽结合在绿脓菌素B中，同样的绿脓素pf11绿脓素pf12.绿脓素pf（主要结构物）和绿脓素Pf/3/2。由l-苹果酸，琥珀酸，l苹果酰胺和琥珀酰胺。绿脓素Pf/3/3有同样的多肽，如菌素这些绿脓素与假单胞菌素B10很相似，假单胞菌B10的嗜铁素，他们是线性多肽含有三个二齿螯合物与三价铁离子强力结合，在氨端由邻间苯二酚复合物结束，碳端以环N6-羟乌氨酸结束。它们不同于其他绿脓菌素。引言当微生物生长于缺铁的环境中，它们会产生一种叫嗜铁素的小分子，他通过自己高的亲和力将铁离子转运至细胞内部。这些运铁载体是一个能包含铁的稳定的八面体复合结构，荧光假单胞菌和恶臭简单胞菌对植物的生长有促进作用，也是人尽皆知。这些细菌存在植物的根除，还可以把他们叫做促植物生长根际微生物。这种现象已经有了合理的解释，很多文献中都提到过，这是一个由菌株生产的绿脓素能力的过程。嗜铁素的这种强吸附能力对植物病菌有很强的抗性。他们使病菌很难得到基础元素铁。 Lemanceau和Sumson通过研究发现嗜铁素会在绿豆植物病原菌与一些荧光假单胞菌的相互作用中出现。特别是，他们发现一些荧光假单胞菌，NCPPB2192能非常有效的阻止Pultimum的生长。在外实验环境中，对真菌生长抑制的主要因素是PtA.P.toloasii三种嗜铁素的一种。荧光假单胞菌CCM2798是革兰氏阴性菌，属于荧光假单胞菌B型。在缺铁的环境中，这个细菌合成黄绿水溶性复合物，绿脓素Pf.他们就是微生物代谢的嗜铁素。主要的嗜铁素绿脓素Pf,对铜绿假单胞菌的生长有抑制作用。Merger和Abdallah揭示了复合物的物理化学性质。他们指出这种多肽含有生色团，可以从2-3多咪唑-6-6二羟基喹啉中获得。然而，绿脓菌素Pf的全部结构还没有得到。文献中，我们阐明它的结构用FAB多光谱，核磁共振和CD技术。阐述了由P.toloasiiNCPPB2192分泌的三种绿脓素和存在于荧光假单胞菌中，CCM2798中的五种绿脓素。我们和已经公布的绿脓素结构进行比较，我们还揭示了Pf绿脓菌素含有一个特殊氨基酸，这个氨基酸含有环状酰胺结构。材料与方法菌株与培养基：P.toloasii strain NCPPB2192，Pfluoreseen2798和PfluosescensCCM2799有氧环境下培养。就像Merger之前描述的那样，培养基每升含有成分如下：K2HPO4,6g,KH2PO4,3g，（NH4）2SO4.1g,Mgso4.7h2o,0.2g.琥珀酸4g.无菌前PH值调到7.0. 绿脓菌素的分离与纯化，菌体用锥形瓶75培养，每瓶有0.5L培养液且加有机械搅拌。48h后，总共45L培养液离心，绿脓素用疏水层析。如有需要，Fe3+吸收复合物制备可加入每等效绿脓菌素液中加5倍的二氨化铁溶液。纯化就按下面的绿脓菌素复合物纯化方法。通过CM-Sephaelox柱状层析获得的三种物质，用高级层析发现的是纯的。从Pfluoreseen2798的发酵物中，得到了三个产物，绿脓素pf11绿脓素pf12绿脓素pf13.然而最后的产物与Merger和Abdallah的初期培养相同，通过高效液相色谱分析时含有三种复合物。它溶于sml的水并用1L2mol的Fecl3处理，这个产物用葡聚糖凝胶柱纯化，用PHSO的梯度乙酸液脱液。产生三种纯的铁复合物。绿脓素PfFe(),绿脓素Pf13/2-Fe,绿脓素Pf13/3-Fe用5羟基喹啉来处理，PfFe()，并用葡聚糖的过程，产生了纯白Pf,光谱分析绿脓素Pf和铁复合物可以从图中看出。他们被认为与绿脓素Pa相似，且与假单胞菌素B10也相似，这些相似性有力的证明力绿脓素Pt的生色团与绿脓素Pa相似。绿脓素Pt和铁复合物的分子质量用FAB量光谱检测。小分子物质可以在m/2 142s 1453 1424分别检测为PtA，绿脓素PtB, 绿脓素Pt.明显的在m/2,1478,1506,1477检测到贴的复合物。在1453条件下，自由配体和铁复合物的化学量是1:1,且绿脓素Pa和绿脓素PtA与绿脓素相差的量分别是28个单位和一个量单位。三种绿脓素的水解含有三种相同的成分，苏氨酸，丝氨酸，赖氨酸N6-羟乌氨酸。通过HI水解被降解为乌氨酸。结果和讨论（1） 绿脓素PtA的结构，PtA主要从pt的发酵上获得。它是一种稳定的化合物。（2）PtA核磁共振，表一中列出了核磁共振普，生色团的化学结构与Demange报道的绿脓素相似。绿脓素PtA的核磁共振图有三个直接的结构域，羟基结构域，芬香族结构域，脂肪族结构域。羟基信号共振，在1692和1839ppm之间。在1736和1769ppm之间有11个信号，分为氨基酸的10个信羟基和生色团的羟基。这些分布用他们的化学键与文献中已报道的进行对比，在1804和1839的共振信号与羧酰基团和琥珀酸上的羧酰基团分别与生色团链相连。169.2和172.2的信号分布为乙酰基团的羧基与分子共价结合，它的形成有N6-羟乌氨酸形成羟配对复合物的参与。这两种信号都有显示，与一些标准乙酰胺进行比对。顺和反氧酸盐异构体，九个芳香族碳的共振信号在102.9和159.8ppm.有三个碳在102.8（c-8） 115.5（C-5） 141.9（c-4）ppm和6个4碳116.0(c-10) 115,4 (c-3)135.8 (c-9)145.2(c-6) 151.9 (c-2)159.8(c-7).这些化学键绿脓素Pa生色团非常相似，这意味着两种生色团有同样的结构。脂肪端碳原子在21.6和70.00ppm的化学键结构在表三中呈现。从上面的实验中，我们可推断出绿脓素pta是由十个氨基酸肽与生色团结合而成生色团从2.3-6.7双羟基喹啉获得。另外一个乙酰基团与N6-羟乌氨酸和琥珀酰乙酰成一个氨基集团，可能氨基酸在生色团碳3位置上。（3）肽链的顺序，氨基酸肽链的顺序是由FAB量光谱检测，N末端和C末端分布在表四和表五中。乙酰基团的自然特性通过在m/z1383的峰值可以确定。与乙酰基团中获取一个乙稀酮酸在m/z1325也有峰值。与一个琥珀酰基团的丢失有关，在峰值m/z1475处的分子中获得，通过分析，可以确定和说明z和A的序列。用乙酰酸和脱水乙酰的混合物的甲酸溶液和pta作用5五分钟，可以在m/z1551,1554,1557.产生信号。这是由于嗜铁素上加上了乙酰基团。然而，被标记型应该有三个1：1标记的集团，那么是1：3：3：1，但是相近类型却表现出扭曲的1：4：6：4：1型。这与样品中含有乙酰基团且部分被替换是一致的。绿脓素ptA在5条件的反应中可迅速酯化，在m/z1439和1442产生单酯，30分钟后，第二个双线在m/z1457和1460c且有三线在m/z1471,1474,1477.这表明了在单酯上加了一个水分子，在酯化过以后，在酸功能形成酯化物形成后进行环状羟乌氨酸水解。绿脓素的酸水解可用FAB量光谱检测，第一步的水解一分子水加入产生信号为m/z1443,与末端环状N6-羟基呱嗪有关，这些信号与核磁共振ptA的波普一直，羟基呱嗪可以在C和C上检测到不同。进一步的水解在m/z1401he 1383处给出峰值。20分钟后，肽键的进一步水解发生了。给出分子包含一些有用的序列，在m/z829处有一个附加信号分布是Hzn-ser-ser-thr-ser-n8-OHOrn-COOHO水解片段的发生来源于赖氨酸和丝氨酸酰键断裂。这是ptA水解中最先发生的，片段。水解实验的数据定义了z结构，OHOrn-thr,并且绿脓素ptA的全序列应为Chr-ser-lys-ser-ser-thr-ser-OHOrn-thr-ser-OHOrn ptA生色团和氨基酸的结构，生色团的化学结构是由其环状二色性光谱决定的，这与已报道的paA的光谱是一致的，还有假单胞菌素B10后边的结构有x光来决定。然而生色团的手性中心为s结构，氨基酸的结构由手性气象色谱决定。用的是壶状手性柱。研究发现赖氨酸，一个丝氨酸和两个苏氨酸结构型是L型，其他四个丝氨酸的构型是D型，羟基乌氨酸有反向构型。部分水解片段被分离纯化是为了定位L丝氨酸和LN6-羟基乌氨酸在与生色团键连的十肽菌素中，水解条件产生了大量的低分子水解片段。粗水解产物4偶氧苯-异流氨酸方法来处理。制备由高效液相层析固定相。获得了两个类型的水解片段。它们在380mm处有吸光值，DABIIC试剂的加入没有产生衍生作用。他们含有ptA的生色团，没有自由氨端，主要片段是chr-ser-lys-OH。有lys-2和ser-3片段产生。片段的化学结构分析表示lyshe是L型 丝氨酸是D型。肽片段与DABITC作用。在426nm处是最大吸光值。绿脓素pt的量比绿脓素ptA少一个量单位暗示他是一个琥珀酰代替绿脓素ptA上的琥珀酸，绿脓素pt是由细菌合成的最初的主要的嗜铁素，但是培养基中PH逐渐升高，这种复合物迅速降解为绿脓素ptA，通过内部分子反应，绿脓素ptB是28个学位，高于绿脓素ptA，与生色团中酮六糖的琥珀酰次级学位相当。PtA和ptB核磁共振光谱相比，ptB有三个信号，分别为31.5,33.0。，34.5.在ptB中两个甲酸信号替换了。35.0 35.6ppm的琥珀酰信号。在生色团中有酮戊二酸相连。碳邻位的酮基团在33.0和34.5有两个信号。是由于铜的同时出生和平衡溶液中二元溶液的发生。PtB中酮戊二酸的定位，和paB中一样，用c-5键与生色团相连，这个复合物的酸水解片段的存在证明了生色团修饰的重要作用。该分子的最大吸收值在410mm酸值在PH6.7是变为460mm,在426mm处有一个拐点，与我们所期望的一样，因此，他们都有同样的位置，即在生色团c-3位置上。结论CCM2798荧光假单胞菌的绿脓素，我们对光滑和粗糙的假单胞菌进行研究，每一株菌分泌的嗜铁素没有发现明显不同，下面提到的实验认为光滑形式的菌为实验菌株。绿脓素pt通过细菌培养得到的产物用来阐明结构。嗜铁素的酸水解和氨基酸分析有丝氨酸，甘氨酸，丙氨酸N6-羟乌氨酸和三羟天冬氨酸。FAB-ms的使用可以进一步证实羟天冬氨酸的出现，且通过以L型晶体缬氨酸为固定相的化学结构的分析也能出现。绿脓素pt的结构，FAB量光谱检测，FAB-ms绿脓素pf检测在m/z1203有信号，因为M+离子的存在，主要离子的产生由于特征性生色团断裂在885u时，和序列决定因子小分子离子和