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文档简介
DMEM细胞培养基及其改良品种 DMEM由Dulbecco改良的Eagle培养基,各成份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好,常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。 改良DMEM细胞培养基DMEM(HED)细胞培养基 DMEM(HED)细胞培养基,培养CHO细胞生产乙肝疫苗,具有较强细胞维持能力,可增加收液次数,有效提高蛋白表达率。 生产和试验研究证明,DMEM(HED)细胞培养基在细胞生长和病毒分泌方面均优于使用DMEM细胞培养基。 a) 使用DMEM(HED)细胞培养基细胞贴壁和长满单层时间明显快于传统DMEM细胞培养基,维持2个月细胞未出现脱落现象。 使用DMEM(HED)细胞培养基,在接种后第2天, 80细胞已伸展并开始分裂增殖,第3天已长成较密单层,细胞贴壁均匀,形态清晰,呈多边形和梭形,细胞间略有空隙,细胞数为7.5 x 106个ml。在此后转瓶培养的60 d内细胞数保持稳定,无明显增加和减少,无脱落,无明显形态变化,培养液中HBsAg滴度稳定在1:1281:512之间。 而使用传统DMEM细胞培养基,只有30和40的细胞伸展,至第4天才长成较密单层,小方瓶与双层转瓶结果相同。至30 d 时已长成较厚的复层,并开始大片脱落,细胞数明显减少,HBsAg滴度降低,最低降到1:32 。此后细胞开始重新贴壁、增殖,至45 d左右部分细胞长成单层,一部分细胞因脱落,至60 d时仍未能长满转瓶。优点 DMEM细胞培养基的成分粉末型(A)粉末型(H)粉末型(L) 配制方法 将一袋培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水将袋内残留培养基洗下,并入容器.加 注射用水(水温2030)到47.5升,轻微搅拌溶解. 加入185克碳酸氢钠. 轻微搅拌溶解,加注射用水至50升. 用1mol / L 氢氧化钠溶液或 1mol / L盐酸溶液调pH至所需值. 用0.
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