磁珠法拭子基因组DNA提取试剂盒.doc

磁珠法拭子基因组DNA提取试剂盒磁珠法拭子基因组DNA提取试剂盒MagBeads Swab DNA Extraction Kit【目 录 号】SDE-5010、SDE-5030、SDE-5100【运输条件】225；【保存条件】磁珠悬浮液 28；蛋白酶K -20；其它组分室温；【试剂盒组成】Kit Component试剂盒组成SDE-5010适用于100份样品SDE-5030适用于300份样品SDE-5100适用于1000份样品 SDE-Buffer 1 拭子保存液40mL120mL400mL Proteinase K solution 蛋白酶K溶液2mL6mL20mL SDE-Buffer 2 拭子缓冲液20mL60mL200mL SDE-Magnetic Beads 磁珠悬浮液8mL24mL80mL Wash Buffer 1 清洗液160mL180mL600mL Wash Buffer 2 清洗液 2（浓缩液）30mL(加入120mL无水乙醇)90mL(加入360mL无水乙醇)150mL*2(加入600mL无水乙醇) Dealcohol Buffer 除醇液40mL120mL400mL SDE-Elute Buffer 拭子洗脱液10mL30mL100mL【注意事项】1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害。使用前务必充分混匀；2. 首次使用试剂盒，请按清洗液2标签提示加入无水乙醇，稀释备用；3. 蛋白酶K请于-20长期保存，避免反复冻融；融化后4保存，并尽快使用；4. 为了达到最佳效果，建议使用新鲜拭子样本，或者4存放少于3天的样本，样本反复冻融将导致核酸得量严重降低；5. 如需去除RNA请自备RNase A溶液（100mg/mL，分散液：10mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH值8.0）；6. 请务必仔细阅读本试剂盒操作说明书，并严格按照操作步骤完成操作。1【产品简介】本试剂盒适用于从口腔拭子、宫颈拭子等样本中提取基因组DNA或病毒DNA。试剂盒采用独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对DNA具有极强的特异性亲和力，而当条件改变时，磁珠可逆的释放DNA，从而达到快速分离纯化DNA的目的，并可最大限度的去除蛋白质及其它杂质，从而保证提取DNA的纯度。所得基因组DNA产物OD260/280比值在1.71.9之间，可直接用于酶切、PCR、荧光定量PCR、测序、文库构建等下游实验。本试剂盒可在EP管中进行手动操作，亦可配合核酸提取仪使用，实现高通量操作。【试剂盒说明】样本类型样本量DNA提取范围口腔拭子、宫颈拭子等1个0.63.5g【自备仪器、耗材和试剂】仪器自动版英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇。手动版水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、真空干燥箱、无水乙醇、异丙醇、2.0mL EP管、EP管配套用磁力架。【仪器自动版操作步骤】本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，同步可完成32个样本的提取。1 96孔板上样准备参照下表用量向96孔板各孔位中分别加入相应试剂：样品孔位1、72、83、94、105、116、12试剂磁珠悬浮液75 L清洗液1 600L异丙醇300uL清洗液2 600L清洗液2 600L除醇液 400L洗脱液100L注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪。2 拭子样本裂解21）将拭子棉头或刮头剪下，转移至2.0mL EP管中，加入400L拭子保存液、20L蛋白酶K和200L拭子缓冲液，使溶液完全浸润拭子，涡旋震荡。注：1）若拭子样本中已经含有保存液，只需补加拭子保存液至400L即可；2）若需去除RNA，请在上述混合液中加入4L RNase A溶液。2）将EP管于58温浴15min，期间每隔5min摇晃混匀一次；3）12000 rpm离心30s，将EP管内所有液体收集到底部，待用。3 上机提取将全部裂解上清液转入96孔板第2/8列对应孔位中，将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中、插入磁棒套、打开仪器操作软件，调用“拭子DNA提取实验方法”程序，单击“运行”执行程序。“拭子DNA提取实验方法”程序各参数设置如下，如果原程序不慎丢失，可自行设定：步骤编号孔位运行类型振荡时间(秒)分离时间(秒)挥发时间(秒)振荡幅度振荡 强度一组温度()二组温度()三组温度()四组温度()11磁珠转移2505强000022DNA结合240504中000031清洗1180505强000042DNA结合4801504中000051清洗1180505中000063清洗2180505中000074清洗2120505中000085除醇0203强000096洗脱3602002中60606060103弃磁珠5005强00004 核酸转移程序运行完毕后，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，提取过程完毕，此时可弃去96孔板。【手动版操作步骤】1 拭子样本的消化以及裂解1）将拭子棉头或刮头剪下，转移至2.0mL EP管中，加入400L拭子保存液、20L蛋白酶K和200L拭子缓冲液，使溶液完全浸润拭子，涡旋震荡。注：1）若拭子样本中已经含有保存液，只需补加拭子保存液至400L即可；2）若需去除RNA，请在上述混合液中加入4L RNase A溶液。2）将EP管于58温浴15min，期间每隔5min摇晃混匀一次，完毕后12000rpm离心30s，将EP管内所有液体收集到底部，待用。3）取全部上清液转移至新的2.0mL EP管中。2 核酸结合3向EP管中加入300L异丙醇和75L磁珠悬浮液（磁珠悬浮液提前摇晃均匀），盖好EP管盖，高速涡旋振荡5min。3 磁性分离将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，如果EP管内盖有磁珠，可保持EP管在磁力架上，整体上下颠倒23次至磁珠被完全吸附。保持EP管固定于磁力架上，用移液枪吸弃上清液，期间避免接触磁珠。4 清洗1向EP管中加入600L清洗液1，将EP管从磁力架上取下，用移液枪吹散磁珠，涡旋震荡2min，磁性分离（参照步骤3操作）。5 清洗2使用600L清洗液2（已加入无水乙醇），参照步骤4操作2次。6 除醇（如下方法任选其一）方法1：将除尽上清液后的EP管置于磁力架上，一同放入45真空干燥箱中，干燥约10min至无明显乙醇味。注：亦可置于通风橱通风或电风扇直吹约10min，具体时间以磁珠干透无乙醇味为准。方法2：将除尽上清后的EP管保持在磁力架上，加入400L除醇液，快速手摇润洗吸附的磁珠表面，之后快速弃去除醇液。注：该步骤操作时间不宜过长，且不可吹散磁珠，否则影响核酸得量。7 洗脱取出EP管，加入50100L洗脱液，用移液枪吹散磁珠，58温浴10min，每隔3min涡旋振荡30s，确保磁珠与核酸洗脱完全。8