奥氮平有关物质USP方法确认.doc

摘要奥氮平主要适用于各种精神分裂症及其相关障碍的急性期治疗和巩固治疗，对阳性症状（妄想、幻觉、思维障碍、敌意和猜疑等)和阴性症状（情感淡漠、情感和社会退缩、言语贫乏)均有肯定的疗效5。奥氮平亦可缓解精神分裂症所继发的情感症状6。对于治疗有效的病人，奥氮平可用于巩固治疗，保持其临床缓解状态7。奥氮平杂质方法被USP36版所收载， 使用HPLC方法检测药物的有关杂质1。 药品作为一种特殊的商品，药品质量的优劣性直接关系到用药者的健康与生命安全2。因此，必须对药品质量实行全面的控制，以确保人们用药的安全、合理和有效4。药品确认的项目一般包括专属性，系统适用性，重复性（包括精密度和中间精密度），定量限，检测限，溶液稳定性，耐用性等。根据日常使用的要求，需要对实验中使用到的一些溶液的稳定性进行考察3。当所有的确认都符合接受标准的情况下，我们认为该药典方法适用于应用实验室的检测，并用于控制产品质量12。关键词：奥氮平 方法 确认 目录 一、所用试剂及样品 4二、方法描述 4（一）色谱条件 4（二）溶液配制 5（三）系统适应性及操作步骤 5（四）计算公式 6三、验证内容 6（一）专属性 6（二）系统适应性 7（三）精密度 71、重复性（精密度实验1） 72、中间精密度（精密度实验2） 83、中间精密度（精密度实验3 ）9（四）定量限/检测限（LOQ/LOD） 10（五）溶液稳定性研究 13（六）耐用性 15四、结论 17五、参考文献 18一、所用试剂及样品名称级别批号/含量（若适用）来源磷酸分析级20121212/T20100318国药集团化学试剂有限公司氢氧化钠分析级20091110/20130111青山化工试剂有限公司乙腈色谱级I669430303/IB0IF60082MERCKEDTA二钠分析级20121030国药集团化学试剂有限公司色谱级K36473818646MERCK十二烷基硫酸钠色谱级026FC26F0512GFCO Chemical水纯化水每日新鲜海正药业制备奥氮平氯甲基氯化物标准品13-BHW-118-6/98%TRC奥氮平有关物质A标准品F0H156/GOK232USP奥氮平有关物质B标准品F0H160/GOK318USP奥氮平标准品1301/99.2%海正药业标定标准品1001/99.8%海正药业标定样品100801-B、100802-B、100803-B、090921海正药业生产电子分析天平METTLER XP205 已校正METTLER XP6 已校正高效液相色谱仪Agilent 1260/1100 已校正Shimadzu LC-20A/LC-2010C 已校正Waters 2695 已校正pH计METTLER S20 已校正色谱柱信息Agilent ZORBAX SB-C8 4.6250mm 5mPN：880975-906 二、方法描述1（一）色谱条件缓冲液：取13g十二烷基硫酸钠溶于1500ml水中，加入5ml磷酸，用氢氧化钠调节pH至2.5。溶剂：取约55mgEDTA二钠溶于1500ml缓冲液中，该溶液与乙腈为3：2。流动相A：缓冲液：乙腈=52：48，过滤脱气。流动相B：乙腈：缓冲液=70：30，过滤脱气。流动相：梯度洗脱。时间（min）流动相A (%，V/V)流动相B (%，V/V)01000101000200100250100271000351000色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C8,4.6250mm,5m流速：1.5ml/min检测波长：220nm进样量：20l柱温：35进样室温度：5（二）溶液配制2分离度溶液：取适量的奥氮平标准品，奥氮平USP相关物质A标准品、奥氮平USP相关物质B标准品溶于稀释液，得到奥氮平的浓度约为20g/ml，相关物质A与相关物质B的浓度分别为2g/ml。标准溶液：准确称取适量的奥氮平标准品，溶于稀释液，配成的浓度约为0.002mg/ml（例如20mg100ml，移取1ml100ml）。样品溶液：准确称取20mg的奥氮品样品于50ml的容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释到刻度，摇匀。（三）系统适应性及操作步骤进样溶剂，记录色谱图，应无干扰峰，取分离度溶液进样，记录峰响应，根据其RRT（见下表1）鉴别各峰，奥氮平有关物质A与奥氮平的分离度应不小于3.0，拖尾因子（以奥氮平峰计）应不大于1.5，连续进样标准溶液6针，奥氮平峰面积的RSD应不大于2.0%。系统符合后进样品溶液。表1峰鉴别相对保留时间(RRT)相对响应因子(RRF)限度(%)奥氮平有关物质B0.32.30.10奥氮平有关物质A0.82.30.10奥氮平1.0/奥氮平氯甲基氯化物1.11.00.15单个非特定杂质/0.10总杂质/0.4（四）按下式计算奥氮平有关物质B、奥氮平有关物质A、奥氮平氯甲基氯化物、单个非特定杂质、总杂质的含量：（PCs/Cu）（ri/rs ）（1/F）F为各杂质的相对响应因子（RRF），见上表1；Cu，Cs分别为样品溶液与对照溶液中的配制浓度（mg/ml）；rs为对照溶液所对应的主峰响应值；ri为样品溶液所对应的各杂质响应值；P为对照品的含量，%。三、验证内容（一）专属性 专属性是指在其他组分（杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能准确地测出被测组分的特性。现通过对奥氮平及各个已知杂质进行色谱定位分析来进行专属性研究10 11。分离度溶液：准确称取奥氮平标准品20.007mg，有关物质A 标准品2.011mg，有关物质B标准品 2.025mg，置于同一10ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，准确移取1.0ml至100ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。奥氮平氯甲基氯化物储备液：准确称取奥氮平氯甲基氯化物2.16mg至20ml容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，混匀。奥氮平氯甲基氯化物溶液：准确移取奥氮平氯甲基氯化物储备液1.0ml至100ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。进样溶剂、分离度溶液、奥氮平氯甲基氯化物溶液，记录峰响应值。实验结果见表2。表2.专属性结果各峰分离情况峰名称RT（min）RRTUSP参考RRT奥氮平有关物质B3.8210.20.3奥氮平有关物质A11.0350.60.8奥氮平18.5731.01.0奥氮平氯甲基氯化物19.4711.11.1由上表数据可知，各已知杂质的RRT与USP中参考值基本一致，各杂质均能够分离开，溶剂峰（2013050900.lcd）无干扰，说明此有关物质方法专属性良好。（二）系统适应性 对仪器分析方法在进行验证时，将分析设备、电子仪器、实验操作、测试样品等一系列作为完整系统进行评估，需要进行系统适应性考察10 11。分离度溶液配制同4.1“专属性“项下标准溶液：精密称取奥氮平标准品20.31mg分别至50ml容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，精密移取上述溶液1.0ml至200ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。进样溶剂（流动相）、系统适应性溶液、5针标准溶液，记录峰响应值。实验结果见表3。表3 系统适应性结果序号峰面积图谱编号1st69.5897110052603.D2nd69.5893410052604.D3rd69.7387810052605.D4th69.6070310052606.D5th69.6173610052607.D6th69.7433610052608.D平均值69.64759667/RSD(%)0.11/分离度（R）4.210052601.D拖尾因子（T）1.1接受标准R2.0 T2 RSD2.0%由上表数据可知，各系统适应性参数均满足要求，系统适应性良好。（三）精密度精密度是指对均一样品重复取样检测每个检测结果间的接近程度，通过变异系数（相对标准偏差）来考察10。 1、重复性（精密度实验1）重复性指短时间内同一分析人员使用同一仪器进行重复检测同一个样品。由实验员I在Agilent上检测六份样品标准溶液，分离度溶液，同4.2“系统适应性”项下溶液。样品原样溶液：精密称取奥氮平样品（090921）20.71mg、20.33mg、20.62mg、20.25mg、20.37mg、20.09mg分别至50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。待系统稳定后，由实验员I在Agilent仪器上按照方法描述中的方法进行检测，计算6份奥氮平样品有关物质的含量，并计算各自的RSD，应符合表4的规定。实验结果详见表5表4 接受标准3-4内 容接受标准相关物质如杂质的平均值是那么接受标准是小于LOQ N/ALOQ至 0.10%测得杂质的相对标准偏差（RSD）不超过50% 0.10至0.50%测得杂质的相对标准偏差（RSD）不超过25% 0.5%测得杂质的相对标准偏差（RSD）不超过10%表5 重复性（精密度实验1）检测结果实验员I潘海红检测日期2010.05.26仪器型号Agilent 1200样品批号有关物质A 有关物质B氯甲基氯化物单个非特定杂质总杂质10.00000.00670.02930.04750.131820.00000.00670.02840.04790.130230.00000.00690.02890.04780.132240.00000.00800.02990.04970.136250.00000.00810.02970.04920.136660.00000.00860.02860.04720.1315平均值ND0.00750.02910.04820.1331RSD%N/A11.112.112.072.002、中间精密度（精密度实验2） 中间精密度指在不同时间由不同实验员在不同仪器上对同一个样品进行测。即由实验员II在不同天用Shimadzu LC-2010C检测六份样品（090921）。分离度溶液同4.2“系统适应性”项下溶液。标准溶液：精密称取奥氮平标准品20.57mg分别至50ml容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，精密移取上述溶液1.0ml至200ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。样品原样溶液：精密称取奥氮平样品（090921）20.57mg、20.24mg、20.51mg、20.36mg、20.43mg、20.19mg分别至50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。待系统稳定后，按照方法描述中的方法进行检测，计算奥氮平有关物质含量，并计算各自的RSD，应符合表4的规定。实验结果详见下表。表6 中间精密度（精密度实验2）检测结果实验员I潘海红检测日期2010.05.29仪器型号Shimadzu LC-2010C样品批号有关物质A 有关物质B氯甲基氯化物单个非特定杂质总杂质10.00000.00290.03090.04470.127120.00000.00320.03150.04250.117830.00000.00330.03070.04190.116340.00000.00360.03100.04440.119750.00000.00380.03100.04160.117160.00000.00420.03110.04170.1203平均值ND0.00350.03100.04280.1197RSD%N/A12.910.863.243.263、中间精密度（精密度实验3）由实验员I在Waters上检测六份样品（090921）。分离度溶液同4.2“系统适应性”项下溶液。标准溶液：精密称取奥氮平标准品20.31mg分别至50ml容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，精密移取上述溶液1.0ml至200ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。样品原样溶液：精密称取奥氮平样品（090921）20.71mg、20.33mg、20.62mg、20.25mg、20.37mg、20.09mg分别至50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。待系统稳定后，按照方法描述中的方法进行检测，计算奥氮平有关物质含量，并计算各自的RSD，应符合表4的规定。实验结果详见下表。表7 中间精密度（精密度实验3）检测结果实验员I王华检测日期2010.05.26仪器型号Waters 2695样品批号有关物质A 有关物质B氯甲基氯化物单个非特定杂质总杂质10.00000.00600.02990.04410.128520.00000.00630.03000.04360.127630.00000.00690.03090.04440.131340.00000.00770.03210.04510.135650.00000.00780.03180.04560.136260.00000.00750.03230.04390.1288平均值ND0.00700.03120.04450.1313RSD%N/A10.553.381.692.86汇总三种仪器上精密度的结果至下表。表8 三种仪器精密度汇总结果项目实验1实验2实验3平均值RSD有关物质A (%)NDNDNDNDN/A有关物质B (%)0.00700.00350.00750.01N/A氯甲基氯化物 (%)0.03120.03100.02910.033.81单个非特定杂质(%)0.04450.04280.04820.056.11总杂质(%)0.13130.11970.13310.135.68从以上数据可以得知，三种仪器结果均符合规定，说明此检测方法在这三种仪器上检测中间精密度良好，适合在本实验室运行。（四）定量限/检测限（LOQ/LOD） 定量限/检测限（LOQ/LOD）是评价仪器和方法灵敏度的重要指标，现通过信噪比来确定定量限/检测限（LOQ/LOD）8 10 。 奥氮平及未知杂质的定量限/检测限（LOQ/LOD）是由奥氮平稀释得到的，已知杂质的定量限/检测限（LOQ/LOD）是由相应杂质稀释得到的。其中定量限的信噪比应不小于10，检测限的信噪比应在25之间。奥氮平的定量限溶液配制：称取20.31mg奥氮平标准品于50ml容量瓶中，加溶剂溶解并定容到刻度；移取1.0ml于200ml容量瓶中，用溶剂定容到刻度；再移取1.0ml置于50ml容量瓶中，用溶剂定容到刻度。奥氮平的检测限溶液配制：移取3.0ml奥氮平定量限溶液置于10ml容量瓶中，用溶剂定容到刻度。杂质A储备液：称取2.07mg杂质A标准品置于20ml容量瓶中，加溶剂溶解并定容到刻度；杂质B储备液：称取2.01mg杂质B标准品置于20ml容量瓶中，加溶剂溶解并定容到刻度；杂质A的定量限溶液配制：移取1.0ml杂质A储备液置于50ml容量瓶中，用溶剂定容到刻度；再移取1.0ml置于50ml容量瓶中，用溶剂定容到刻度。杂质A的检测限溶液配制：移取3.0ml杂质A定量限溶液置于10ml容量瓶中，用溶剂定容到刻度。杂质B的定量限溶液配制：移取1.0ml杂质B储备液置于100ml容量瓶中，用溶剂定容到刻度；再移取1.0ml置于50ml容量瓶中，用溶剂定容到刻度。杂质B的检测限溶液配制：移取3.0ml杂质B定量限溶液置于10ml容量瓶中，用溶剂定容到刻度。奥氮平氯甲基氯化物储备液：准确称取奥氮平氯甲基氯化物2.16mg至20ml容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，混匀。准确移取上述溶液1.0ml至100ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。准确移取上述溶液1.0ml至100ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。奥氮平氯甲基氯化物定量限溶液：准确移取奥氮平氯甲基氯化物储备液0.7ml至50ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。奥氮平氯甲基氯化物检测限溶液：准确移取奥氮平氯甲基氯化物储备液5.0 ml至10ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。定量限溶液进6针，检测限溶液进2针，记录色谱图并计算信噪比及其平均值。表9 奥氮平定量限LOQ浓度 序号峰面积S/N图谱编号奥氮平Conc:0.041g/ml,相当于奥氮平的0.01%11.6648411.010052620.D21.7792511.710052621.D31.7160811.910052622.D41.6496110.310052623.D51.6806910.010052624.D61.6010810.110052625.D平均值1.69192510.8/RSD%3.627.65/接受标准S/N: 1015表10 奥氮平检测限LOD浓度 序号峰面积S/N图谱编号奥氮平Conc: 0.012g/ml,相当于奥氮平的0.003%10.527042.410052618.D20.487092.110052619.D接受标准S/N: 25表11 奥氮平有关物质A定量限LOQ浓度 序号峰面积S/N图谱编号奥氮平有关物质AConc:0.041g/ml,相当于奥氮平的0.01%12.7078012.010052721.D22.7674613.710052722.D32.8549414.110052723.D42.9222212.410052724.D52.8745213.110052725.D62.7446911.210052726.D平均值2.81193812.8/RSD%2.998.55/接受标准S/N: 1015表12奥氮平有关物质A检测限LOD浓度 序号峰面积S/N图谱编号奥氮平有关物质AConc: 0.012g/ml,相当于奥氮平的0.003%10.8202833.010052719.D20.7558003.410052720.D接受标准S/N: 25表13 奥氮平有关物质B定量限LOQ浓度 序号峰面积S/N图谱编号奥氮平有关物质BConc:0.020g/ml,相当于奥氮平的0.005%11.5194411.010052813.D21.4058610.410052814.D31.4755811.410052815.D41.4628312.010052816.D51.4255812.710052817.D61.5103313.110052818.D平均值1.4666311.8/RSD%3.088.74/接受标准S/N: 1015表14 奥氮平有关物质B检测限LOD浓度 序号峰面积S/N图谱编号奥氮平有关物质BConc: 0.006g/ml,相当于奥氮平的0.002%10.4505883.210052811.D20.497763.210052812.D接受标准S/N: 25表15 奥氮平氯甲基氯化物定量限LOQ浓度 序号峰面积S/N图谱编号奥氮平氯甲基氯化物Conc:0.015g/ml,相当于奥氮平的0.004%140312.72013050904.lcd242612.82013050905.lcd340712.82013050906.lcd441512.62013050907.lcd541513.02013050908.lcd641112.12013050909.lcd平均值41212.7/RSD%1.932.43/接受标准S/N: 1015表16 奥氮平氯甲基氯化物检测限LOD浓度 序号峰面积S/N图谱编号奥氮平氯甲基氯化物Conc: 0.007g/ml,相当于奥氮平的0.002%12974.72013050910.lcd22954.02013050911.lcd接受标准S/N: 25从以上数据可以得知，奥氮平、有关物质A、有关物质B和奥氮平氯甲基氯化物的定量限、检测限结果均符合规定，说明此方法灵敏度良好。（五）溶液稳定性研究为保证样品检测的结果真实可信，确实代表样品准确的结果，需对样品的溶液稳定性进行考察。即将样品在冷藏和室温状态下分别进行检测，通过考察回收率来确认溶液的稳定性（回收率=放置一段时间后结果/0小时结果）13杂质标准溶液：准确量取相关物质A和相关物质B储备溶液各1.0ml于25 ml容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度。样品溶液配制：准确称取样品20.68mg至50ml容量瓶中，准确加入5.0ml杂质标准溶液，用溶剂溶解并稀释至刻度。对加入一定量杂质后的奥氮平样品溶液的稳定性进行研究，在室温和冷藏条件下存放样品溶液，每隔1小时进样一次，计算每个点测得的杂质量，除以0小时的检测值即为回收率，回收率记入下表17。表17 样品溶液的稳定性（冷藏条件）检测值（%）储存条件有关物质A 有关物质B氯甲基氯化物单个非特定杂质总杂质0h冷藏0.0760 0.10000.0313 0.04840.2948 1h冷藏0.0763 0.10020.0322 0.04820.2934 2h冷藏0.0753 0.10000.0351 0.04730.2944 3h冷藏0.0754 0.10090.0344 0.04710.2930 4h冷藏0.0751 0.10080.0341 0.04660.2949 5h冷藏0.0750 0.10110.0341 0.04640.2939 6h冷藏0.0754 0.10190.0338 0.04600.2951 7h冷藏0.0757 0.10230.0332 0.04560.2943 8h冷藏0.0748 0.10210.0324 0.04560.2936 9h冷藏0.0747 0.10320.0331 0.04470.3054 10h冷藏0.0754 0.10450.0331 0.04490.3105 11h冷藏0.0752 0.10480.0334 0.04400.3096 12h冷藏0.0753 0.10620.0329 0.04360.3132 13h冷藏0.0753 0.10680.0328 0.04390.3153 14h冷藏0.0753 0.10470.0336 0.04360.3095 15h冷藏0.0751 0.10510.0335 0.04320.3100 16h冷藏0.0753 0.10530.0337 0.04330.3122 17h冷藏0.0753 0.10570.0335 0.04320.3145 18h冷藏0.0754 0.10630.0324 0.04280.3136 19h冷藏0.0752 0.10650.0324 0.04280.3149 20h冷藏0.0748 0.10610.0325 0.04200.3112 21h冷藏0.0748 0.10660.0337 0.04200.3155 22h冷藏0.0754 0.10760.0329 0.04160.3181 23h冷藏0.0754 0.10800.0332 0.04130.3184 24h冷藏0.0753 0.10850.0331 0.04150.3198 回收率（%）0h冷藏100.4 100.2 102.7 99.6 99.5 1h冷藏99.0 100.0 111.9 97.8 99.9 2h冷藏99.2 100.9 109.7 97.4 99.4 3h冷藏98.8 100.8 108.9 96.3 100.1 4h冷藏98.7 101.1 108.7 95.8 99.7 5h冷藏99.2 102.0 107.8 95.0 100.1 6h冷藏99.6 102.3 106.0 94.2 99.8 7h冷藏98.4 102.2 103.4 94.3 99.6 8h冷藏98.3 103.3 105.7 92.3 103.6 9h冷藏99.2 104.5 105.6 92.9 105.3 10h冷藏98.9 104.8 106.5 90.8 105.0 11h冷藏99.0 106.2 105.0 90.1 106.3 12h冷藏99.0 106.8 104.8 90.8 107.0 13h冷藏99.1 104.8 107.4 90.0 105.0 14h冷藏98.8 105.2 106.9 89.2 105.2 15h冷藏99.1 105.4 107.6 89.4 105.9 16h冷藏99.1 105.7 106.8 89.3 106.7 17h冷藏99.2 106.3 103.5 88.4 106.4 18h冷藏99.0 106.6 103.4 88.4 106.8 19h冷藏98.4 106.1 103.7 86.9 105.6 20h冷藏98.4 106.6 107.7 86.8 107.0 21h冷藏99.2 107.7 105.0 85.9 107.9 22h冷藏99.2 108.0 105.8 85.4 108.0 23h冷藏99.1 108.6 105.6 85.8 108.5 24h冷藏100.4 100.2 102.7 99.6 99.5 表18 样品溶液的稳定性（室温条件）检测值（%）储存条件有关物质A 有关物质B氯甲基氯化物单个非特定杂质总杂质0h室温0.0762 0.1004 0.0315 0.0450 0.2988 1h室温0.0765 0.1053 0.0307 0.0442 0.3156 2h室温0.0756 0.1126 0.0313 0.0429 0.3439 3h室温0.0763 0.1204 0.0310 0.0420 0.3640 4h室温0.0742 0.1295 0.0303 0.0391 0.3964 5h室温0.0763 0.1392 0.0319 0.0582 0.4081 6h室温0.0747 0.1490 0.0303 0.0702 0.4368 7h室温0.0777 0.1563 0.0305 0.0835 0.4517 8h室温0.0755 0.1656 0.0317 0.0982 0.4730 9h室温0.0747 0.1757 0.0303 0.1138 0.4968 10h室温0.0749 0.1848 0.0316 0.1283 0.5207 11h室温0.0753 0.1953 0.0303 0.1420 0.5418 12h室温0.0771 0.2033 0.0303 0.1563 0.5671 13h室温0.0763 0.2143 0.0303 0.1742 0.5926 14h室温0.0752 0.2229 0.0298 0.1889 0.6036 15h室温0.0770 0.2285 0.0313 0.1950 0.6320 16h室温0.0765 0.2372 0.0322 0.2087 0.6545 17h室温0.0745 0.2449 0.0312 0.2225 0.6693 18h室温0.0752 0.2533 0.0304 0.2361 0.6900 19h室温0.0757 0.2614 0.0310 0.2487 0.7119 回收率（%）0h室温100.4 104.9 97.2 98.3 105.6 1h室温99.3 112.1 99.2 95.3 115.1 2h室温100.1 119.9 98.2 93.2 121.8 3h室温97.4 128.9 95.9 86.9 132.7 4h室温100.1 138.6 101.0 129.4 136.6 5h室温98.0 148.4 96.1 155.8 146.2 6h室温102.0 155.7 96.5 185.5 151.2 7h室温99.1 164.9 100.4 218.2 158.3 8h室温98.1 175.0 96.2 252.7 166.3 9h室温98.3 184.0 100.0 285.1 174.3 10h室温98.9 194.5 95.9 315.5 181.3 11h室温101.2 202.4 96.1 347.3 189.8 12h室温100.2 213.4 96.1 387.1 198.3 13h室温98.7 222.0 94.5 419.6 202.0 14h室温101.1 227.6 99.2 433.3 211.5 15h室温100.5 236.2 102.2 463.6 219.0 16h室温97.8 243.9 98.9 494.4 224.0 17h室温98.6 252.2 96.3 524.6 230.9 18h室温99.3 260.3 98.2 552.5 238.3 19h室温100.4 104.9 97.2 98.3 105.6 由以上数据可知，奥氮平样品溶液冷藏储存条件下24小时内稳定，室温下需要进样前溶解。（六）耐用性耐用性是为了证明方法的普适性11。耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为把方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明6。在该试验中，通过改变色谱柱品牌、调节流动相比例、调节柱温、调节流速，调节缓冲液浓度等，来寻找影响此方法的关键参数，评估此方法的耐用性。每个系统中，系统稳定后进溶剂、系统适应性溶液、标准溶液、样品溶液。通过对系统适应性参数的考察研究参数变化对系统的影响。表19 改变色谱柱品牌对系统参数结果的影响参数接受标准色谱柱品牌InertsilAgilentWelch分离度3.010.565.3023.91拖尾因子1.51.1721.1341.079理论塔板数/245391933597976相对保留时间杂质B0.30.260.300.23杂质A0.80.740.860.63表20 改变缓冲液pH值对系统参数结果的影响参数接受标准缓冲液PH值2.42.52.6分离度3.07.3611.785.49拖尾因子1.51.1721.1861.234理论塔板数/206986645018983相对保留时间杂质B0.30.280.260.29杂质A0.80.810.770.85表21 改变流动相比例对系统参数结果的影响参数接受标准缓冲液/乙腈A:490/510B:270/730A:520/480B:300/700A:550/450B:330/670分离度3.07.045.3014.40拖尾因子1.51.1351.1341.111理论塔板数/2109019335217132相对保留时间杂质B0.30.500.300.25杂质A0.81.240.860.82表22改变流动相比例对系统参数结果的影响参数接受标准缓冲液/乙腈A:510/490B:290/710A:520/480B:300/700分离度3.02.324.24拖尾因子1.51.1081.112理论塔板数/1649616973相对保留时间杂质B0.30.330.31杂质A0.80.930.88表23 改变柱温对系统参数结果的影响参数接受标准柱温（）303540分离度3.05.345.304.92拖尾因子1.51.0971.1341.134理论塔板数/212771933517300相对保留时间杂质B0.30.290.300.30杂质A0.80.860.860.87表24 改变流速对系统参数结果的影响参数接受标准流速（ml/min）1.31.51.7分离度3.05.565.305.22拖尾因子1.51.0851.1341.108理论塔板数/392791933515734相对保留时间杂质B0.30.300.300.29杂质A0.80.880.860.85改变柱温(5)、流速(0.2ml/min)、缓冲液pH(0.2)、流动相中甲醇的浓度(10%)、流动相中缓冲盐的浓度(10%)、色谱柱品牌等条件，系统适应性均符合规定，方法耐用性良好。四、结论（一）系统适应性及专属性项目下，连续5针标准峰面积的RSD是0.11%3.0，奥氮平的拖尾因子为1.11.5，各项均符合规定，溶剂峰无干扰（10052600.D），系统适应性良好。各已知杂质的RRT与USP中参考值基本一致，各杂质均能够分离开，溶剂峰（2013050900.lcd）无干扰，说明此有关物质方法专属性良好。（二）精密度（重复性）项目下，3次精密度实验中，6份样品有关物质A均无检出；有关物质B含量的RSD在10.55%12.91