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文档简介

一玻璃板的处理：银染测序的玻璃板一定要非常清洁。实验过程中，先用温水和去污剂洗涤，再用去离子水冲洗玻璃板，除去残留的去污剂，最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遗留的去污剂微膜可能导致凝胶染色时背景偏高。每次铺胶前均需分别严格处理长玻璃板和短玻璃板。（1）长玻璃板的处理a) 用浸透亲和硅烷溶液(1ml左右)的镜头纸擦拭清洗过的长玻璃板。长玻璃板经粘合溶液处理可将凝胶化学交联于玻璃板上；b) 五分钟后用吸水棉纸沾95%乙醇洗长玻璃板3次，以除去多余Sigmacote溶液。（2）短玻璃板的处理a) 更换手套，避免与亲和硅交叉污染；b) 用浸透剥离硅烷溶液(1.5ml)的镜头纸擦拭清洗过并已经自然干燥的整个玻璃板板面；c) 五分钟后，用干净纸头单向擦玻璃板，然后略用力沿垂直方向擦拭。重复三次,每次均须换用干净的纸，以除去多余的粘合溶液；d) 实验中根据温度等实际情况调整剥离硅烷的涂量。这一步对于在银染操作过程中防止凝胶撕裂至关重要。（3）测序板处理的注意事项a) 在单向擦玻璃板时不要过度用力,否则会带走过多粘合硅烷,使凝胶不能很好地粘附；b) 一定要更换手套，防止粘染粘合硅烷,否则将导致凝胶撕裂；c) 用过的凝胶可在水中浸泡后用剃须刀片或塑料刮刀刮去。玻璃板须用去污剂完全清洗。或者凝胶用10% NaOH浸泡3060min后除去；d) 为防止交叉污染, 用于清洗短玻璃板的工具必须与清洗长玻璃板的工具分开, 如果出现交叉污染, 以后制备的凝胶可能撕裂或变得松驰。二（1） 长玻璃（亲水玻璃）处理： a、亲水剂制备：2ml 95%酒精，4ul亲水硅烷（Binding Silane）,10ul冰醋酸混合。此为一块板用量。 b、洗净玻璃板，以水沿玻璃板均匀下流为好。 c、用手巾纸浸亲水剂涂搽玻璃板。 d、干燥5分钟，用约2ml 95的酒精再轻轻涂搽玻璃板（以均一方向）然后在垂直向再涂搽一遍。 e、晾干约十分钟。 （2） 短玻璃（疏水玻璃）处理 a、换手套，以防亲水剂和疏水剂交叉污染。如果出现污染情况，可将玻璃浸入10的NaOH溶液中。 b、洗净玻璃板，以水沿玻璃板均匀下流为好。 c、用纸巾浸疏水剂(Repel-silane ES)涂搽玻璃板，要均匀。 d、干燥5分钟，用约2ml 95的酒精再轻轻涂搽玻璃板（以均一方向）然后在垂直向再涂搽一遍。 e、晾干约十分钟。、试剂： a）亲和硅烷 Bind-silane 购自生工生物工程（上海）有限公司（产品编号：BB0226，25ml规格）； b）剥离硅烷 Repel-siliconizing 购自生工生物工程（上海）有限公司（产品编号：RB0805-100，100ml规格）。2、使用方法： a）取150ul Bind-silane原液，用Kimwipes低尘擦拭纸（KIMTECH Science公司，规格11cm21cm）快速均匀的涂布于平板玻璃上
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