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文档简介

生物学实验常用技术一、分子方面1、基因工程1）PCR（Polymerase Chain Reaction）(二楼PCR仪器全部会用)2）RT-PCR；Q-PCR3）琼脂糖凝胶电泳；胶回收4）酶切/链接5）转化6）固体/液体 LB培养基配制（高压蒸汽灭菌锅使用方法）7）质粒大/小抽原理及步骤（手提、溶液I、II、III作用）8）基因组DNA抽提9）RNA提取；2、蛋白质工程1）蛋白收集（蛋白裂解液+PMSF；1Loading 裂解（推荐）2）SDS-PAGE（电泳胶的配制）2）考马斯亮蓝染色，银染3）Western blot4）蛋白定量常用的方法及原理，以及熟练操作Bradford法蛋白定量（TRIZOL法原理、注意事项及步骤）二、细胞方面1）细胞培养、传代2）细胞冻存与复苏 冻存液配制： （1）DMSO:血清=1:9（推荐）（2）DMSO：培养基：血清=1:3:6 均可DMSO为细胞专用型；现用现配，效果最好；冻存时细胞在-80中不要超过一周，最好在24-48h内放入液氮罐中保存。3）细胞培养基配制（过滤除菌）、胰酶配制（过滤除菌），PBS配制（灭菌）；（不同培养基的区别；谷氨酰胺（提供氮源），2周补充一次）4）转染5）MTT原理及操作（检测细胞存活率或死亡率）6）碱性磷酸酶实验（ALP，检测细胞分化）（5、6 需学会SPSS软件及graphpad prism5软件使用）7）Hoechst染色8）结晶紫染色（不推荐）9）苏木精/伊红染色（9可以替代8，以后实验推荐使用9，图片漂亮）10）荧光显微镜的使用11）激光共聚焦显微镜样品制备（细胞固定，染色，洗脱）（7、8、9、10、11需学会Photoshop常用工具处理数据）12）流式细胞仪样品制备（包括：转染效率和细胞凋亡染色标记）以及仪器操作（需学会FlowJo软件分析流式结果）三、动物实验1）小鼠的定制：常见的小鼠：ICR小鼠（正常），9元/只BalB/C小鼠（正常），30元/只SD大鼠（正常），30元/只裸鼠（免疫缺陷小鼠），80元/只NOD SCID小鼠（免疫三缺陷），250元/只其中前四种是常用的，最后一种以后可能会用到。浙江中医药大学：小鼠品系齐全，可提供以上小鼠静脉注射，提供体内原位成瘤手术；杭州师范大学：NOD SCID品系小鼠没有，不提供裸鼠静脉注射，不提供体内原位成瘤手术。2）小鼠成瘤（熟练皮下成瘤操作）；3）肿瘤测量（游标卡尺测量；IVIS测量（推荐，前体要构建Luc细胞系）4）慢病毒转染构建稳转Luc癌细胞系5）小鼠的腹腔注射、瘤内注射以及ICR小鼠的尾静脉注射6）小鼠尾部和眼球取血7）小动物活体成像仪的原理及使用方法8）小鼠解剖及组织固定电镜样品：2.5%戊二醛固定；免疫组化：10%的福尔马林或4%的多聚甲醛固定9）组织电镜样品的制备及TEM的使用（每个样品400，额外每张TEM照片5元）10）免疫组织切片样品的制备（蜡块制备25元；HE染色15元
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