WS琼脂 的化学性质.doc

WS琼脂 的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：胨、牛肉膏粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；氯化钠维持均衡的渗透压；乳糖、蔗糖为可发酵的糖类；十二烷基硫酸钠、溴麝香草酚兰和酸性复红抑制革兰氏阳性菌；硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；琼脂是培养基的凝固剂；溴麝香草酚兰和酸性复红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为蓝绿色。配方（每升）：胨12g牛肉膏粉3g氯化钠5g乳糖12g蔗糖12g十二烷基硫酸钠2g琼脂15g酸性复红 0.1g溴麝香草酚兰0.064g硫代硫酸钠6.8g柠檬酸铁铵0.8g最终pH 7.50.2溴麝香草酚兰Bromothymol blue.0.064g硫代硫酸钠Sodium thiosulfate.6.8g柠檬酸铁铵Ferric ammonium citrate.0.8g最终pH Final pH.7.50.2胨Peptone.12g牛肉膏粉Beef extract.3g氯化钠Sodium chloride.5g乳糖Lactose.12g蔗糖Sucrose.12g十二烷基硫酸钠Sodium lauryl sulfate.2g琼脂Agar.15g酸性复红Acid fuchsin.0.1g 质量标准本培养基倾注平皿待冷却后呈草绿色，质控菌株接种后。361培养18-24h，观察结果如下表：菌名菌号生长状况菌落特征鼠伤寒沙门氏菌CMCC(B)50115良好绿蓝，可有黑心宋内氏志贺氏菌CMCC(B)51592良好绿蓝大肠埃希氏菌ATCC25922部分抑制桃红色可有胆酸沉淀金黄色葡萄球菌ATCC6538被抑制用途用于沙门氏菌的选择性分离(GB/T4789.282003 中4.23，GB/T4789.42003)。使用方法：1、 称取本品68.8g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，待冷至50左右，在无菌环境中，倾注灭菌平皿，待凝固后，备用。2、 用接种环取增菌液一环，划线接种于平板上。3、 将平板放入恒温培养箱中，361培养18-24h。4、 观察结果。DHL琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理： 蛋白胨、牛肉膏粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；乳糖、蔗糖为可发酵的糖类；去氧胆酸钠和柠檬酸钠抑制革兰氏阳性菌及大多数的大肠菌群和变形杆菌，但不影响沙门氏菌的生长；硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；中性红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为无色；琼脂是培养基的凝固剂。配方（每升）：蛋白胨20g牛肉膏粉 3g乳糖 10g蔗糖10g去氧胆酸钠1g硫代硫酸钠 2.3g柠檬酸钠1g柠檬酸铁铵1g中性红0.03g琼脂15g最终pH 7.30.2质量标准本培养基倾注平皿待冷却后呈红色，质控菌株接种后。361培养1824h，观察结果如下表：菌名菌号生长状况菌落特征鼠伤寒沙门氏菌CMCC(B)50115良好无色半透明可有黑心福氏志贺氏菌CMCC(B)51572良好无色至淡红色半透明大肠埃希氏菌ATCC25922部分抑制桃红色或粉红色金黄色葡萄球菌ATCC6538被抑制用途用于肠道致病菌特别是沙门氏菌和志贺氏菌的选择性分离培养(GB/T4789.282003 中4.20，GB/T4789.42003和GB13091-91和SN0170-92)。使用方法： 1、 称取本品63.3g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，待冷至50左右，在无菌环境中，倾注灭菌平皿，待凝固后，备用。2、 用接种环取增菌液一环，划线接种于平板上。3、 将平板放入恒温培养箱中，361培养1824h。4、 观察结果。HE琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理： 胨、牛肉膏粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；乳糖、蔗糖和水杨素为可发酵的糖类；胆盐、去氧胆酸钠、溴麝香草酚兰和酸性复红抑制革兰氏阳性菌；氯化钠维持均衡的渗透压；硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；琼脂是培养基的凝固剂；溴麝香草酚兰和酸性复红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为蓝绿色。配方（每升）：胨12g牛肉膏粉 3g乳糖12g蔗糖12g水杨素2g胆盐20g氯化钠 5g琼脂15g溴麝香草酚兰0.064g酸性复红0. 1g硫代硫酸钠6.8g柠檬酸铁铵 0.8g去氧胆酸钠2g最终pH7.50.2质量标准本培养基倾注平皿待冷却后呈草绿色，质控菌株接种后。361培养1824h，观察结果如下表：菌名菌号生长状况菌落特征鼠伤寒沙门氏菌CMCC(B)50115良好浅绿蓝，可有黑心宋内氏志贺氏菌CMCC(B)51592良好绿蓝大肠埃希氏菌ATCC25922部分抑制橙红橙黄色，可有胆酸沉淀金黄色葡萄球菌ATCC6538被抑制用途用于肠道致病菌特别是沙门氏菌和志贺氏菌的选择性分离培养(GB/T4789.4-2008)。使用方法：1、 称取本品90.8g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，待冷至50左右，在无菌环境中，倾注灭菌平皿，待凝固后，备用。2、 用接种环取增菌液一环，划线接种于平板上。3、 将平板放入恒温培养箱中，361培养1824h。麦康凯琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：蛋白胨、胨提供碳氮源、维生素和生长因子；牛胆盐和结晶紫可抑制革兰氏阳性菌的生长；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；乳糖为可发酵的糖类；中性红是pH指示剂，细菌发酵乳糖产酸时菌落呈粉红色并在菌落周围出现胆盐沉淀的浑浊圈。 配方（每升）： 蛋白胨17.0g胨 3.0g牛胆盐5.0g氯化钠 5.0g琼脂 4.0g乳糖10.0g中性红0.03g最终pH 7.20.2 质量标准下列菌株经361培养1824h，生长情况如下表：菌 名菌 号 生长状况 菌落特征大肠埃希氏菌 ATCC25922良好粉红或红，周围有混浊胆盐沉淀圈鼠伤寒沙门氏菌CMCC(B)50115 良好无色半透明奇异变形杆菌CMCC(B)49005良好 无色半透明金黄色葡萄球菌ATCC6538 不长或差 胨Proteose peptone.20g （BR)琼脂Agar.14g乳糖Lactose.10g中性红Neutral red.0.03g最终pH Final p牛胆盐Bile salts.5g氯化钠Sodium chloride.5gH.7.20.2用途供分离发酵乳糖的革兰氏阴性肠道杆菌。（中华人民共和国药典2005年版）使用方法：1、 称取本品54g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121高压灭菌15min。2、 待培养基冷至5055倾注灭菌平皿，待凝固后，备用。3、 取待检样品划线接种于麦康凯平板。4、 将平板置培养箱于361培养1824h。5、 观察结果。在做致泻大肠埃希氏菌检验时，观察结果不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意不发酵和迟发酵的菌落。危险性质储存方式贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理： 马铃薯浸出粉有助于各种霉菌的生长；葡萄糖提供能源；琼脂是培养基的凝固剂；氯霉素可抑制细菌的生长。马铃薯 300g(从中提取浸出粉) 葡萄糖 20g 琼脂 15g 氯霉素 0.1g 最终pH 6.00.2质量标准本品倾注平皿，下列菌株接种后2528培养72h生长情况如下表。 （含抗生素）菌 名 菌 号生长状况 菌落特征黑曲霉ATCC16404良好菌丝白色孢子黑色白色念珠菌ATCC10231良好菌落表面呈奶油色大肠埃希氏菌 ATCC25922 被抑制 金黄色葡萄球菌ATCC6538被抑制用途供霉菌和酵母菌计数及分离培养（GB/T4789.282003，GB/T4789.152003中4.78）。 使用方法：1、 称取本品40.1g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121高压灭菌20min，备用。2、 霉菌和酵母菌计数时，参照021030高盐察氏琼脂培养基使用方法。3、 用于霉菌分离鉴定，参照021020察氏琼脂。庆大霉素琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；蔗糖提供碳源；亚硫酸钠可刺激弧菌生长；柠檬酸钠、庆大霉素和亚碲酸钾及较高的 pH可抑制革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性杂菌；霍乱弧菌对酸性环境比较敏感，因此该pH值可增强其生长；琼脂是培养基的凝固剂。配方（每升）： 蛋白胨 10g牛肉膏粉 3g氯化钠 5g蔗糖10g柠檬酸钠10g无水亚硫酸钠3g庆大霉素500U琼脂15g最终pH8.50.2质量标准下列菌株接种后于361培养2024h，结果如下：菌名菌号生长状况菌落特征霍乱弧菌V60好淡灰色大肠埃希氏菌ATCC25922被抑制用途用于霍乱弧菌的选择性分离培养。使用方法：1、 称取本品56g，加入蒸馏水或去离子水1 L，加热煮沸充分溶解，冷至50左右，每100mL培养基加入0.05%无菌亚碲酸钾溶液(029220)1mL，摇匀，立即倾注平皿，待凝固后，备用。2、 取待检菌的新鲜纯培养物划线接种于琼脂平板上，于361培养2024h。3、 观察结果。甲苯胺蓝-DNA琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：具有脱氧核糖核酸酶的细菌分解培养基中的脱氧核糖核酸(DNA)，使DNA长链水解成数个单核苷酸的寡核苷酸短链，使指示剂甲苯胺蓝作用变成粉红色；氯化钙提供阳离子作为激活剂；氯化钠维持均衡的渗透压；三羟甲基氨基甲烷为缓冲剂；琼脂为培养基的凝固剂。配方（每升）：脱氧核糖核酸(DNA)0.3g氯化钙0.0011g氯化钠10g甲苯胺蓝0.083g三羟甲基氨基甲烷6.1g琼脂10g最终pH9.00.2质量标准质控菌株接种后，于35培养4h结果如下：菌名菌号培养特征金黄色葡萄球菌ATCC6538粉红色圈表皮葡萄球菌CMCC（B）26069无粉红色圈用途用于金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶的试验。 (SN 0172-92)使用方法：1、称取本品26.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，115高压灭菌15min(即用可不需灭菌)，备用。2、载玻片的制备：取3mL甲苯胺蓝-DNA琼脂平铺于在载波片上制成标本，待琼脂凝固后，在琼脂上打成直径2mm的小洞(每个载玻片10-12个)，抽出小洞中的琼脂块。3、从Baird-parker平板挑一个可疑单菌落接种普通肉汤培养基中，361培养20h24h后，经过100沸水煮15min,取0.01mL接种所制备的载玻片上小洞，于35培养4h后，观察结果。氯化钠蔗糖琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：蛋白胨、牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子；较高含量的氯化钠抑制不耐高渗的细菌；蔗糖是可发酵的糖类；偏高的pH可减缓部分杂菌的生长；溴麝香草酚兰是pH指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。配方（每升）：蛋白胨10g牛肉膏粉 10g氯化钠 50g蔗糖 10g琼脂 15g溴麝香草酚兰0.04g最终pH7.80.2 质量标准下列菌株接种后于361培养1824h，结果如下：菌名菌号生长状况培养特征副溶血性弧菌VPL490好培养基变蓝绿色金黄色葡萄球菌ATCC6538好培养基黄色不变大肠埃希氏菌ATCC25922差用途用于副溶血性弧菌的选择性分离培养(参考GB/T4789.282003 中4.40，GB/T4789.72003)。使用方法：1、 称取本品95g，加入1 L蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121高压灭菌15min，冷至50倾注平皿备用。2、 取稀释处理的样品或增菌液划线接种于氯化钠蔗糖琼脂平板上于361培养1824h。3、 观察结果。氯化钠三糖铁琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、维生素、矿物质；乳糖、葡萄糖、蔗糖为可发酵糖类，其产酸时通过酚红指示剂测出，酸性呈黄色，碱性呈红色；硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢，与硫酸亚铁中的铁盐生成黑色硫化铁；较高含量的氯化钠维持弧菌均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。配方（每升）：蛋白胨20g牛肉膏粉3g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖1g氯化钠30g硫酸亚铁0.5g硫代硫酸钠0.5g琼脂12g酚红0.024g最终pH 7.40.2 质量标准下列菌株接种斜面后，361培养物1824h，结果如下：菌名菌号生长状况斜面/底部产气产硫化氢副溶血性弧菌VPL4-90良好K/A-大肠埃希氏菌ATCC25922良好A/A+-鼠伤寒沙门氏菌CMCC(B)50115良好K/A+铜绿假单胞菌ATCC9027良好K/K-用途用于鉴别副溶血性弧菌的生化反应(SN0173-92)。使用方法：1、 称取本品87g，加入蒸馏水或去离子水1 L，加热搅拌溶解煮沸至完全溶解，分装试管（装量宜多些）。2、 将试管放入灭菌锅中，115高压灭菌15min，取出，制成高层斜面，备用。3、 挑取待检菌的新鲜纯培养物，穿刺接种后，再划斜面，置培养箱37培养1824h。4、 观察结果。副溶血性弧菌在斜面上产碱，在底层产酸，不产气，不产硫化氢。酪蛋白琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：某些细菌产生酪蛋白酶可分解酪蛋白使菌落周围的培养基形成透明圈；牛肉膏粉提供氮源、维生素和生长因子；磷酸氢二钠为缓冲剂；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；溴麝香草酚蓝为指示剂染料。配方（每升）：酪蛋白10g牛肉膏粉3g磷酸氢二钠 2g氯化钠5g琼脂 15g溴麝香草酚蓝0.05g最终pH7.40.2质量标准质控菌株接种后于361培养24h，结果如下。菌 名菌 号 生长状况 培养特征蜡样芽孢杆菌CMCC(B)63303良好 菌落周围有透明圈，培养基颜色由绿变蓝大肠埃希氏菌ATCC25922 良好菌落周围没有透明圈用途用于鉴别蜡样芽孢杆菌分解酪蛋白试验 (GB/T4789.28-2003中4.65，GB/T4789.14-2003)。使用方法：（平板计数法）1、 称取本品35g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121灭菌15分钟。2、 用时加热溶化琼脂，至50，摇匀后倾注灭菌平皿，冷却后平板呈绿色，有沉淀。1、 取待检菌的新鲜培养物划线接种于平板上，于361培养24h。4、 观察结果：蜡样芽孢杆菌能产生酪蛋白酶，如沿菌落周围有透明圈形成，即为能水解酪蛋白。琼脂粉/琼脂条/琼脂糖的化学性质,质量标准及用途化学性质 条状琼脂为类白色或淡黄色半透明细长条状；粉状；琼脂为鳞片状无色或淡黄色粉末。在沸水中极易分散成溶胶，在冷水中不溶，但能吸不膨胀成胶块状，溶胶液呈中性反应。食用时不被酶分解，所以几乎没有营养价值。琼脂易分散于热水，即使0.5%的低浓度也能形成坚实的凝胶。1%的琼脂溶胶在42固化，其凝胶即使在94也不融化，有很强的弹性。琼脂溶胶的凝固温度较高，一般在35即可变成凝胶。琼脂的吸水性和持水性高，干燥琼脂在冷水中浸泡时，徐徐吸水膨润软化，可以吸收20多倍的水。琼脂凝胶的耐热性较强。琼脂的耐酸性比明胶与淀粉强，但不如果胶 质量标准 水分Moisture 22% 灰分Ash 3% 热水中不溶物Hot water insoluble substance 1% 酸不溶物 0.5% 重金属(Pb)Acid insoluble ash 0.004% 用途 琼指可用作食品增稠剂、蚕丝上浆剂、缓泻剂，以及药品的胶粘剂、增稠剂和胶囊，还可作为细菌培养基、固定化酶载体、细菌的包理材料和电泳的介质。还可用于病毒，亚细胞粒子和大分子的过滤分离，以及血清抗原或抗体的观察。ADI（每日允许摄入量）不需要特殊规定。 嗜盐菌选择性琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：蛋白胨提供生长必须的碳氮源；较高含量的氯化钠抑制不耐高渗的细菌；琼脂是培养基的凝固剂；结晶紫可抑制革兰氏阳性菌；较高的pH可抑制部分杂菌的生长。配方（每升）：蛋白胨20g氯化钠 40g琼脂15g结晶紫 0.0005g最终pH8.70.2 质量标准本品倾注平板后呈淡紫色，下列菌株接种后于361培养1824h，结果如下：菌名菌号生长状况菌落特征副溶血性弧菌VPL490好灰白色大肠埃希氏菌ATCC25922差金黄色葡萄球菌ATCC6538不长用途用于副溶血性弧菌的选择性分离培养(参考GB/T4789.282003 中4.41，GB/T4789.72003)。使用方法：1、 称取本品75g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121高压灭菌15min，冷至50倾注平皿备用。2、 取待检菌的新鲜纯培养物划线接种于平板上，于361培养1824h。3、 观察结果。结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素；乳糖是可发酵的糖类；氯化钠可维持均衡的渗透压；3号胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌；中性红为pH指示剂。配方（每升）：蛋白胨7g酵母膏粉 3g乳糖10g氯化钠5g3号胆盐1.5g中性红0.03g结晶紫0.002g琼脂15g最终pH 7.40.2质量标准质控菌株接种后于361培养1824h结果如下：菌名菌号生长状况培养特征大肠埃希氏菌ATCC25922良好深红色菌落，周围有红色沉淀产气肠杆菌CMCC(B)45103良好红色菌落，周围可有淡红色沉淀金黄色葡萄球菌ATCC6538受抑制-用途用于水或食品中大肠菌群平板菌落计数(GB/T 4789.3-2008和SN0169-92)。使用方法： 1、 称取本品41.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，备用（不得超过3h）。2、 以无菌手续取样品25g或25mL，加入含225mL无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的三角瓶内，充分振摇或用均质器均质1min成1：10稀释液，然 后 以1：10继续稀释，选择三个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个平皿，倾注加热溶解并冷至45左右的培养基，琼脂凝固后再加34mL培养基覆盖平 板表层。3、 361培养1824h。4、 观察结果。假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：明胶胨和胰蛋白胨提供氮源；甘油提供碳源；硫酸钾和氯化镁可促进绿脓色素的产生；琼脂是培养基的凝固剂。配方（每升）：明胶胨16.0g胰蛋白胨10.0gK2SO410.0gMgCl21.4g琼脂15g溴化十六烷基三甲胺0.2g最终pH 7.10.2质量标准下列质控菌株接种后于361培养48h结果如下：菌名菌号生长状况培养特征铜绿假单胞菌ATCC9027良好产黄绿色色素铜绿假单胞菌ATCC27853良好产黄绿色色素大肠埃希氏菌ATCC25922受抑-金黄色葡萄球菌ATCC25923受抑-用途用于饮用天然矿泉水检验中铜绿假单胞菌的测定。（GB/T 8538-2008）使用方法：1、 称取本品52.6g，加入蒸馏水或去离子水1 L，并加入10mL甘油(029080)，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121高压灭菌15min。 2、 待培养基冷却至4550时，每100mL培养基加入CN琼脂配套试剂（SR0230）1支(1.5mg萘啶酮酸)，混匀后倾注平板，培养基厚度至少高5mm；3、 待测水样过滤后，将滤膜贴在已制备好的CN琼脂平板上，平铺并避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡，于361下培养40h48d。4、 观察结果。碱性琼脂的化学性质,质量标准及用途化学性质原 理：蛋白胨、牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；较高的pH有利于抑制大肠菌群和其他杂菌的生长，有利于霍乱弧菌的生长。配方（每升）： 蛋白胨 20g牛肉膏粉 5g氯化钠 5g琼脂 15g最终pH8.50.2 质量标准此培养基呈淡黄色透明。下列菌株接种后于361培养2024h，结果如下：菌名菌号生长状况菌落特征霍乱弧菌Vb0好灰白色大肠埃希氏菌ATCC25922不长或差用途用于霍乱弧菌及其它弧菌的培养。使用方法：1、 称取本品45g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121高压灭菌15min。待冷至50左右，倾入无菌平皿，凝固后备用。2、 取待检菌的新鲜纯培养物划线种于琼脂平板上，于36