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迈克试剂标准操作程序（SOP） 迈克试剂标准操作程序(SOP)试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪 四川省迈克科技有限责任公司 Sichuan MAKER Science Technology CO.,Ltd 四川省迈克科技有限责任公司编制试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪目 录1.临床意义1.1医学决定水平2.检测原理3.样品准备3.1样品3.2样品稳定性4试剂盒4.1试剂盒组成4.2试剂准备4.3试剂稳定性4.4 试剂盒订货指南5.操作步骤5.1检测参数设置5.2校准5.2.1校准物5.2.2校准物准备5.2.3校准物稳定性5.2.4校准间隔5.2.5校准物溯源性5.2.6校准物订货指南5.3质控5.3.1质控物 5.3.2可接受性判定5.3.3质控物订货指南6.交叉污染7方法学特性7.1线性范围7.2精密度7.3灵敏度7.4抗干扰能力7.5抗凝剂的影响8.方法的可溯源性9.参考值范围10安全性和注意事项11技术服务12主要参考文献试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪1. 临床意义 尿素是人体蛋白质分解代谢产物，此外氨在肝脏尿素循环中也能合成尿素。90%以上的尿素通过肾脏排泄，其余主要由胃肠道和皮肤丢失。尿素检测主要见于：肾功能低下、肾前氮质血症（如充血性心力衰竭、休克）、肾后氮血症、胃肠道出血、高蛋白饮食、药物影响（如皮质类固醇类、四环素等）、妊娠后期、重症肝脏功能不全、营养不良、脂性肾病变。1.1医学决定水平 1.9 mmol/L 低于此值常伴有体内水分过多或肝脏功能不全。 8.2 mmol/L 高于此值应考虑引起血清中尿素氮增高的各种原因。检测血清肌酐对判断肾功能状态会有所帮助。 15.8 mmol/L 高于此值常伴有严重的肾功能衰竭，应选择适当的诊断和治疗措施。如果确有肾脏疾病，应确定其性质。2. 检测原理尿素H20NH+4CO2NH+4-酮戊二酸NADH谷氨酸NAD+H2O尿素在尿素酶催化下，水解生成氨和二氧化碳，氨在-酮戊二酸和还原型辅酶I存在下，经谷氨酸脱氢酶(GLDH)催化生成谷氨酸。同时，还原型辅酶I被氧化成氧化型辅酶I。还原型辅酶I在340nm波长处有吸收峰，其吸光度下降的速率与待测样品中尿素的含量成正比。3. 样本准备3.1样品本试剂盒用于体外检测血清或血浆中尿素的含量。样品为空腹血清或血浆（0.1mg肝素或1.8mgEDTA-Na2可抗凝1.0ml血液）。样品应在低温条件下运输保存。3.1样品稳定性在2小时内分离血清/血浆，分离后的样品在1530可稳定8小时，时间大于8小时，需在28保存,时间大于48小时,需在-1520冰冻保存，但不可反复冻融。4. 试 剂 盒4.1试剂组成：R1： 检测试剂1Tris缓冲液 120.0mmol/L-酮戊二酸 7.0mmol/LADP 0.6mmol/LGLDH 1KU/L脲酶 6KU/LR2：检测试剂2NADH 0.25mmol/L4. 试剂准备： 即用型液体双试剂,开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。4.3试剂稳定性：试剂密闭避光贮存可稳定12个月，开瓶上机稳定30天。4.4试剂盒订货指南货号产品编码规格包装瓶型AB01G7010102001717R1 60ml3 R2 45ml17170瓶型AB01G6010102001706R1 90ml2 R2 45ml17060瓶型AB01H9010102001702R1 50ml4 R2 50ml17020瓶型AB01A0010102001100R1 40ml2 R2 10ml2通用瓶型试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.操作步骤5.1 标准检测参数设定： 5.1.1 日立7060分析仪检测参数TestUrea & Test NameUreaUnit mmol/LData ModeOn BoardReport NameUrea Control Interval 1000Instrument Factor (Y=aX+b) a b Expected Value Expected Value Age(M)(F) 100 Y2.70-8.202.70-8.20 - 100 Y2.70-8.202.70-8.202.70-8.202.70-8.20Technical Limit 0.00-35.00 - STDConc.Pos.SamplePre.Dil.Calib.Lot No.QualitativeNo (1)0.00 W 3 0 0999000001 (1) 0 (2) * # 3 0 0 #000002 (2) 0 (3) 010 0 0000000000(3) 0 (4) 010 0 0000000000(4) 0 (5) 010 0 0000000000(5) 0 (6) 010 0 0000000000(6) 0 TestUreaAssay CodeRate-A 10 Wavelength(2nd/Primary)405/340Assay Point 21- 27- 0- 0DiluentW S.Vol.(Normal) 3 0 0 S.Vol.(Decrease) 50 3 50 S.Vol.(Increase) 6 0 0 ABS. Limit 5500 DecreaseProzone Limit UpperReagentT1240 0 & T2 0 0 T3 60 0 & T4 0 0 Calibration TypeLinear 2 2 0 0 Auto Time OutBlank 0SD Limit999.9Span 0Duplicate Limit 2002 Point 720Sensitivity Limit 0Full 0S1 ABS Limit 8000 32000Compensated Limit 注：“&”表示用户自定义通道号； “*”输入校准物标示值； “#”表示用户自定义校准液位置号试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2 日立7170分析仪检测参数5.1.2.1 7170屏幕界面1试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2.2 7170屏幕界面2试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2.3 7170屏幕界面3试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2.4 7170屏幕界面4注：“&”表示用户自定义通道号； “*”输入校准物标示值； “#”表示用户自定义校准液位置号试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.3 日立7020分析仪检测参数5.1.3.1 7020屏幕界面仪器菜单界面项目名称NO.界面项目Urea1Test Name Urea 2Assay Code (Mthd)速率法A 3Assay Code (Test) 0 4Raction Time 10 5Assay Point 1 22 6Assay Point 2 28 7Assay Point 3 0 8Assay Point 4 0 9Wave Leng (SUB) 405 10Wave Leng (MAIN) 340 11Sample Volume 3.0 12R1 Volume 240 13R1 POS & 14R1 Bottle Size 大 15R2 Volume 16R2 POS 17R2 Bottle Size 18R3 Volume 60 19R3 POS & 20R3 Bottle Size 大 21Calib. Type 线性 22Calib. Type (Wght) 0 23Calib. Conc.1 0.00 24Calib. Pos. 1 99 25Calib. Conc.2 * 26Calib. Pos. 2 # 27Calib.Conc. 3 28Calib. Pos. 3 29Calib. Conc. 4 30Calib. Pos. 4 31Calib. Conc. 5 32Calib. Pos. 5 33Calib. Conc. 6 34Calib. Pos. 6 35S1ABS 36K Factor 37K2 Factor 38K3 Factor 试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪 续上表39K4 Factor 40K5 Factor 41A Factor 42B Factor 43C Factor 44SD Limit 999.9 45Duplicate Limit 200 46Sens Limit 0 47SIABS Limit (L) 8000 48SIABS Limit (H) 32000 49ABS. Limit 5500 50ABS. Limit (D/I) 减少 51Prz. Limit 52Prz. Limit(U/D) 53Prz.(End Point) 54Expect Value (L) 2.70 55Expect Value (H) 8.20 56Instr.Fact.(a) 57Instr.Fact.(b) 58Key setting 注：“&”表示用户自定义通道号；“*”输入校准物标示值；“#”表示用户自定义校准液位置号试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.2 校准5.2.1 校准物 使用迈克科技有限责任公司的尿素校准液（商品名为Urea Calibration Liquid，Urea-CL）进行两点校准或使用迈克科技有限责任公司生产的多项液体校准血清（商品名为Muti-Calibration Serum，M-CS）进行两点校准。5.2.2校准物稳定性迈克科技公司的尿素校准液在28可密闭保存可稳定12个月；迈克科技公司生产的多项液体校准血清-15-20可稳定24个月，28可密闭保存可稳定5天。5.2.3校准物准备 尿素校准液和多项液体校准血清置室温放置15分钟,混匀后即可使用，混匀时应避免气泡产生；用后及时冷藏保存。5.2.4 校准间隔 迈克尿素UV-GLDH法检测试剂具有良好的开瓶稳定性,一批试剂间28贮存30天无瓶间差，我们推荐校准间隔为30天。当试剂批号更换、仪器维修或光源等配件更换后应重新进行校准。5.2.5 校准物溯源性迈克尿素校准液和多项液体校准血清采用Fluka公司提供的纯度为99.9%的尿素原料，用万分之一电子天平准确称量，并用对尿素有稳定作用的生物缓冲液或经稳定化处理的人血清（来源同迈克液体质控血清）准确定容而成。尿素的标示值是利用迈克科技有限责任公司尿素UV-GLDH法检测试剂和日本Kainos公司提供的尿素校准液及尿素检测试剂，在全自动生化分析仪上检测，同时平行检测大量临床正常和异常样品，经统计学处理后确认的靶值。日本Kainos公司的尿素校准液采用尿素改良UV-GLDH法检测试剂在日本JSCC指定的权威参考实验室在全自动生化分析仪上确定的尿素靶值。5.2.6 校准物订货指南品名货号产品编码规格包装瓶型Urea-CLBS07050102190070051ml5塑 料 瓶M-CSBS02150102190020153ml5塑料滴瓶5.3 质控5.3.1 质控物 使用迈克科技有限责任公司生产的液体生化质控血清（商品名为：Auto-Norm serum ，ANS、Auto-Pathology serum ，APS）。迈克液体生化质控血清来源于健康正常人血清，其中HIV、HCV、HBV传染性指标经国家食品和药品监督管理局（SDA）批准的方法检测，结果均为阴性，但不排除存在潜在感染的危险性，使用时应视病人样品同等对待。血清添加物为高纯度的尿素，反应特性接近临床新鲜血清，基质效应小。迈克液体生化质控血清采用活性物质稳定技术，确保尿素的稳定性。血清不含剧毒物质（如NaN3、硫柳汞等），对环境不造成污染,且不含蛋白酶水解抑制剂，确保血清活性成份的反应特性。尿素检测的范围值是依据迈克科技公司尿素UV-GLDH法检测试剂和配套校准物，采用迈克试剂标准操作参数在全自动生化分析仪上对其进行检测,将检测结果进行统计学处理后确定。5.3.2 可接受性判定质控血清的检测值应在给定质控范围或符合用户室内质控规则。5.3.3 质控物订货指南品名货号产品编码规格包装瓶型ANSB003500102000030505ml10塑料滴瓶APSB004500102000040505ml10塑料滴瓶试剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪6. 交叉污染本试剂具有良好的抗交叉污染能力。不对迈克其它试剂造成污染，且不受迈克其它试剂的污染。7. 方法学特性7.1 线性范围：0.0035.00mmol/L。样品中的Urea超出线性范围，可采用减量操作，或用蒸馏水按比例稀释后检测。7.2 精密度：对迈克液体生化质控血清1例、临床标本4例进行50次重复检测，检测结果如下。 批内精密度 批间精密度血清检测次数均值（mmol/L）标准差变异系数（CV%）血清检测次数均值（mmol/L）标准差变异系数（CV%）I503.550.0952.82I503.540.1022.88II506.210.142.25II506.350.1682.64III5013.890.282.02III5013.970.2882.06IV5024.260.341.40IV5024.750.331.33V5037.950.381.00V5038.230.501.307.3 灵敏度：本试剂最低检测限为0.1mmol/L,计算是由零浓度的尿素样品平行检测20次,取其均值加3个标准差而得来。7.4 抗干扰能力：胆红素855mol/L，血红蛋白0.5g/L，维生素C6mmol/L, 脂浊5%（以甘油三酯含量表示相当于10.0mmol/L）时对检测结果无影响。7.5 抗凝剂的影响：常规抗凝剂EDTA-Na2、EDTA-K2、肝素、枸橼酸钠等不影响本法对尿素的检测，但草酸盐、NaF类抗凝剂要影响本法对尿素检测，应避免使用。8. 方法学可溯性: 迈克Urea试剂（Y）与日本Kainos公司尿素改良UV-GLDH法试剂（X）比对： 回归方程：r=0.99,Y=0.974X + 0.57, n=50检测范围：0.0042.00mmol/L9. 参考值范围2.70 8.20 mmol/L，建议各实验室建立自己的参考值范围。10. 安全性和注意事项血浆样品不能使用含铵盐的抗凝剂，血清等样品可能含有乙肝等病毒,有被感染的危险性,采血时应采取防范措施；本试剂含有NaN3应避免与铅铜等金属接触；试剂反应后所产生的废液及使用后难降解的包装材料应集中收集后交当地环境废物处理站处理。11.技术服务有关产品技术咨询请与本公司技术开发部联系,电话:关产品质量投诉请与本公司质管部联系,电话:于新装机用户，本公司可提供技术支持，电话剂项目： 尿素UV-GLDH法检测试剂盒Urea Assay Reagent Kit by UV-GLDH Method适用于： 日立系列自动生化分析仪12. 主要参考文献12.1 叶应妩，等. 全国临床检验操作规程. 东南大学出版社，1997年第二版：25912.2 Tietz, N. W., Specimen Collection and Processing; Sources of Biological Variation, Textbook of Clinical Chemistq4 2nd Edition, W. B. Saunders, Philadelphia, PA (1994).12.3 National Committee for Clinical Laboratory Standards, Procedures for the Handlingand Processing of Blood Specimens; Approved Guideline, NCCLS publication H18-A, Villanova, PA (1990).12.4 National Committee for Clinical Laboratory Standards, How to Define, Determine, and Utilize Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline, NCCLS publication C28-A, Villanova, PA (1994).12.5 Tietz, N. W., Fundamentals of C