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迈克试剂标准操作程序（SOP）迈克试剂标准操作程序(SOP) 试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase(ALT) Assay Reagent Kit by IFCC Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪 四川省迈克科技有限责任公司 Sichuan MAKER Science Technology CO.,Ltd 四川省迈克科技有限责任公司编制试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪目 录1.临床意义1.1医学决定水平2.检测原理3.样品准备3.1样品3.2样品稳定性4试剂盒4.1试剂盒组成4.2试剂准备4.3试剂稳定性4.4 试剂盒订货指南5.操作步骤5.1检测 参数设置5.2校准5.2.1校准物5.2.2校准物准备5.2.3校准物稳定性5.2.4校准间隔5.2.5校准物溯源性5.2.6校准物订货指南5.3质控5.3.1质控物 5.3.2可接受性判定5.3.3质控物订货指南6.交叉污染7方法学特性7.1线性范围7.2精密度7.3灵敏度7.4抗干扰能力7.5抗凝剂的影响8.方法的可溯源性9.参考值范围10安全性和注意事项11技术服务12主要参考文献试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪1临床意义 丙氨酸氨基转移酶（ALT）主要存在于肝、肾、心肌、骨骼肌、胰腺、脾、肺、红细胞等组织细胞中，同时也存在于正常体液如血浆、胆汁、脑积液及唾液中。当富含ALT的组织细胞受损时，ALT从细胞中释放增加，进入血液后导致ALT活力上升。ALT活力检测 主要见于：肝胆疾病（传染性肝炎、中毒性肝炎、肝癌、肝硬化活动期、脂肪肝、梗阻性黄疸、肝内胆汁瘀滞、胆管炎、胆囊炎）、心血管疾病（急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血）、骨骼肌疾病、传染性单核细胞增多症、胰腺炎、外伤、严重烧伤、休克等。1.1医学决定水平22 U/L 可以与患者过去和/或将来的检测值比较，作为自身对照。66 U/L 等于或高于此值，应考虑引起ALT增高的原因。330U/L 高于此值最常见于急性肝细胞损伤，如病毒性肝炎，中毒性肝炎，休克肝。2. 检测 原理L-丙氨酸-酮戊二酸丙酮酸L-谷氨酸NADH丙酮酸H+L-乳酸NAD+NADH的氧化速率与标本中ALT活性呈正比，在340nm波长处，NADH呈现特征性吸收峰，而NAD则没有。因此，可在340nm监测吸光度的下降速率(一Amin)，计算出ALT的活性单位。3. 样品准备3.1样品本试剂盒用于体外检测 血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶活力。样品为空腹血清或血浆（0.1mg肝素或1.8mgEDTA-Na2可抗凝1.0ml血液）。样品应在低温条件下运输保存。3.2样品稳定性在2小时内分离血清/血浆，分离后的样品在1530可稳定8小时，保存时间大于8小时,需在28,保存时间大于48小时,需在-1520冰冻，但不可反复冻融。4. 试剂盒4.1试剂组成：R1： 检测试剂1Tris 100mmol/L-酮戊二酸 15mmol/LNADH 0.18mmol/LLDH 1200U/LR2： 检测试剂2L-丙氨酸 240mmol/L4.2试剂准备：即用型液体双试剂,开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。4.3试剂稳定性：试剂密闭避光贮存可稳定12个月，开瓶上机稳定30天。4.4试剂盒订货指南货号产品编码规格包装瓶型AA001A010101001717R1 60ml3 R2 45ml17170瓶型AA001B010101001706R1 90ml2 R2 45ml17060瓶型AA001C010101001702R1 50ml4 R2 50ml17020瓶型AA001D010101001100R1 40ml2 R2 10ml2通用瓶型试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.操作步骤5.1 标准检测 参数设定： 5.1.1 日立7060分析仪检测 参数TestALT & Test NameALT UnitU/L Data ModeOn BoardReport NameALT Control Interval 1000Instrument Factor (Y=aX+b) a b Expected Value Expected Value Age(M)(F) 100 Y 0 - 45 0 - 45 - 100 Y 0 - 45 0 - 45 0 - 45 0 - 45 Technical Limit 0 -1000 - STDConc.Pos.SamplePre.Dil.Calib.Lot No.QualitativeNo (1) 0 W12 0 0999000001 (1) 0 (2) * #12 0 0 #000002 (2) 0 (3) 010 0 0000000000(3) 0 (4) 010 0 0000000000(4) 0 (5) 010 0 0000000000(5) 0 (6) 010 0 0000000000(6) 0 TestALT Assay CodeRate-A 10 Wavelength(2nd/Primary)405/340Assay Point 21- 27- 0- 0DiluentW S.Vol.(Normal) 12 0 0 S.Vol.(Decrease) 6 0 0 S.Vol.(Increase) 24 0 0 ABS. Limit 5000 DecreaseProzone Limit UpperReagentT1240 0 & T2 0 0 T3 60 0 & T4 0 0 Calibration TypeLinear 2 2 0 0 Auto Time OutBlank 0SD Limit999.9Span 0Duplicate Limit 502 Point 720Sensitivity Limit 0Full 0S1 ABS Limit 9000 32000Compensated Limit 注：“&”表示用户自定义通道号； “*”输入校准物标示值； “#”表示用户自定义校准液位置号试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2 日立7170分析仪检测 参数5.1.2.1 7170屏幕界面1试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2.2 7170屏幕界面2试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2.3 7170屏幕界面3试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2.4 7170屏幕界面4注：“&”表示用户自定义通道号； “*”输入校准物标示值； “#”表示用户自定义校准液位置号试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.3 日立7020分析仪检测参数5.1.3.1 7020屏幕界面仪器菜单界面项目名称NO.界面项目ALT1Test Name ALT 2Assay Code (Mthd)速率法A 3Assay Code (Test) 0 4Raction Time 10 5Assay Point 1 22 6Assay Point 2 28 7Assay Point 3 0 8Assay Point 4 0 9Wave Leng (SUB) 405 10Wave Leng (MAIN) 340 11Sample Volume 12.0 12R1 Volume 240 13R1 POS & 14R1 Bottle Size 大 15R2 Volume 16R2 POS 17R2 Bottle Size 18R3 Volume 60 19R3 POS & 20R3 Bottle Size 大 21Calib. Type 线性 22Calib. Type (Wght) 0 23Calib. Conc.1 0 24Calib. Pos. 1 99 25Calib. Conc.2 * 26Calib. Pos. 2 # 27Calib.Conc. 3 28Calib. Pos. 3 29Calib. Conc. 4 30Calib. Pos. 4 31Calib. Conc. 5 32Calib. Pos. 5 33Calib. Conc. 6 34Calib. Pos. 6 35S1ABS 36K Factor 37K2 Factor 38K3 Factor 试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪续上表39K4 Factor 40K5 Factor 41A Factor 42B Factor 43C Factor 44SD Limit 999.9 45Duplicate Limit 50 46Sens Limit 0 47SIABS Limit (L) 9000 48SIABS Limit (H) 32000 49ABS. Limit 5000 50ABS. Limit (D/I) 减少 51Prz. Limit 52Prz. Limit(U/D) 53Prz.(End Point) 54Expect Value (L) 0 55Expect Value (H) 45 56Instr.Fact.(a) 57Instr.Fact.(b) 58Key setting 注：“&”表示用户自定义通道号；“*”输入校准物标示值；“#”表示用户自定义校准液位置号试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪5.2校准物 使用迈克科技公司的多项液体校准血清（商品名为Muti-Calibration Serum，M-CS）进行两点校准。5.2.2校准物稳定性迈克科技有限责任公司生产的多项液体校准血清-15-20可稳定24个月，28密闭保存可稳定5天。5.2.3校准物准备 多项液体校准血清室温放置15分钟,混匀后即可使用,混匀时应避免气泡产生；用后及时冷藏保存。5.2.4校准间隔 迈克丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂具有良好的开瓶稳定性,一批试剂间28贮存30天无瓶间差，我们推荐校准间隔为30天。当试剂批号更换、仪器维修或光源等配件更换后应重新进行校准。5.2.5校准物溯源性迈克多项液体校准血清来源于健康正常人血清，其中HIV、HCV、HBV传染性指标经国家食品和药品监督管理局（SDA）批准的方法检测，结果均为阴性，但不排除存在潜在感染的危险性，使用时应视病人样品同等对待。血清添加物为人源性丙氨酸氨基转移酶，丙氨酸氨基转移酶的标示值是利用迈克科技有限责任公司丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂和日本Kainos公司提供的酶参考材料（ERM）及丙氨酸氨基转移酶检测试剂，在全自动生化分析仪上检测 ，同时平行检测 大量临床正常和异常样品，经统计学处理后确认的靶值。日本Kainos公司的酶参考材料（ERM）具有依据JSCC法作为推荐方法在日本JSCC指定的权威参考实验室在全自动生化分析仪上确定的丙氨酸氨基转移酶靶值。ERM为稳定的液体，属纯人源性酶参考材料，其反应特性与人血清一致。5.2.6校准物定货指南品名货号产品编码规格包装瓶型M-CSBS02150102190020153ml5塑料滴瓶5.3质控5.3.1质控物 使用迈克科技有限责任公司生产的液体生化质控血清（商品名为：Auto-Norm serum ，ANS、Auto-Pathology serum ，APS）。迈克液体生化质控血清来源于健康正常人血清，其中HIV、HCV、HBV传染性指标经国家食品和药品监督管理局（SDA）批准的方法检测，结果均为阴性，但不排除存在潜在感染的危险性，使用时应视病人样品同等对待。血清添加物为人源性丙氨酸氨基转移酶，反应特性接近临床新鲜血清，基质效应小。迈克液体生化质控血清采用活性物质稳定技术，确保丙氨酸氨基转移酶的稳定性。血清不含剧毒物质（如NaN3、硫柳汞等），对环境不造成污染,且不含蛋白酶水解抑制剂，确保血清活性成份的反应特性。丙氨酸氨基转移酶的范围值是依据迈克丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂和多项液体校准血清，采用迈克试剂标准操作参数在全自动生化分析仪上对其进行检测 ,将检测 结果进行统计学处理后确定。5.3.2可接受性判定质控血清的检测值应在给定质控范围或符合用户室内质控规则。5.3.3质控物定货指南品名货号产品编码规格包装瓶型ANSB0003e0102000030505ml10塑料滴瓶APSB0004e0102000040505ml10塑料滴瓶试剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪6.交叉污染本试剂具有良好的抗交叉污染能力。不对迈克其它试剂造成污染，且不受迈克其它试剂的污染。7.方法学特性7.1线性范围：0 1000 U/L样品中的ALT超出线性范围，可采用减量操作，或用蒸馏水按比例稀释后检测 。7.2精密度：对迈克液体生化质控血清1例、临床标本4例进行50次重复检测 ，检测 结果如下。 批内精密度 批间精密度血清检测次数均 值（U/L）标准差变异系数（CV%）血清检测次数均 值（U/L）标准差变异系数（CV%）I5031.90.712.22I5031.71.725.42II5072.50.901.24II5071.81.642.28III50100.81.00.99III5099.81.341.34IV50143.41.20.84IV50141.21.511.06V50253.71.30.51V50252.41.70.677.3灵敏度：本试剂最低检测限为3.0 U/L,计算是由零浓度的丙氨酸氨基转移酶样品平行检测 20次,取其均值加3个标准差而得来。7.4抗干扰能力：胆红素855mol/L，维生素C24mmol/L,脂浊5%（以甘油三酯含量表示相当于10.0mmol/L）时对检测结果无影响。7.5抗凝剂的影响：常规抗凝剂EDTA-Na2、EDTA-K2、肝素、枸橼酸钠等不影响本法对ALT的检测 ，但草酸盐、NaF类抗凝剂要影响本法对ALT检测 ，应避免使用。8.方法学可溯性: 迈克丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂（Y）与日本Kainos公司丙氨酸氨基转移酶JSCC法试剂比对： 回归方程：r=0.99,Y=1.009X 0.54, n=50检测范围：01000 U/L9.参考值范围0 45 U/L（37），建议各实验室建立自己的参考值范围。10.安全性和注意事项采血后应尽快分离血清/血浆，样品应避免溶血。血清等样品可能含有乙肝等病毒,有被感染的危险性,采血时应采取防范措施；本试剂含有NaN3应避免与铅铜等金属接触；试剂反应后所产生的废液及使用后难降解的包装材料应集中收集后交当地环境废物处理站处理。11.技术服务有关产品技术咨询请与本公司技术开发部联系,电话:关产品质量投诉请与本公司质管部联系,电话:于新装机用户，本公司可提供技术支持，电话剂项目： 丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂盒Alanine Aminotransferase（ALT） Assay ReagentKit by IFCC Method适用于： 日立系列自动生化分析仪12.主要参考文献12.1 Thefeld W，et al. Dt Med. Wschr，99（1974）,34312.2 Clin.Chem.Acta 105（1980）S.147-17212.3 Tietz, N. W., Specimen Collection and Processing; Sources of Biological Variation, Textbook of Clinical Chemistq4 2nd Edition, W. B. Saunders, Philadelphia, PA (1994).12.4 National Committee for Clinical Laboratory Standards, How to Define, Determine, and Utilize Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline, NCCLS publication C28-A, Villanova, PA (1994).12.5 Tietz, N. W., Fundamentals of Clinical Chemistq4, 3rd Edition, W. B. Saunders, Philadelphia, PA (1987).12.6 Young, D. S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 3rd Edition, AACC Press,