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离子交换色谱 运用与分析 主讲 许先融编辑 谢晓敏资料搜集 刘佳娜李春凤甘权贤资料整理 李扬帆刘雁08中药分析与鉴定 1 班 基本原理 离子交换色谱 ionexchangechromatography IEC 以离子交换树脂作为固定相 树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团 当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时 组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换 根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离 主要用于分离离子或可离解的化合物 包括氨基酸 多肽 核酸 核苷等各种生物大分子 离子交换色谱的运用 分离纯化生物大分子 Po ZDo Pb ZDb 重视 Po 流动相中溶质的浓度 Pb 填料表面上被吸附的溶质浓度 Do 流动相中洗脱剂的浓度 Db 填料表面上洗脱剂的浓度 Z 蛋白质在吸附过程中从填料表面上被置换的洗脱剂的数目 以离子交换色谱快速纯化8一淀粉酶为例 研究探讨离子交换色谱 本研究利用合成的强阴离子交换柱很好地分离了a 淀粉酶粗品 其活性回收率高达96 比活性达388ug mg蛋白质纯度提高30倍 此法的研究成功为大规模制备高纯度a 淀粉酶提供了一个新工艺路线 高纯度的8一淀粉酶可作为酶试剂 研究生物作用的特性 酶反应机理 测定生化反应的平衡常数 1 0摘要 2 0实验部分 2 1标准酶液配制用微量天平准确称取5mg高纯度的a 淀粉酶试剂 于小离心试管中 准确加1 0ml水 溶解后 在1300r min的高速离心机上离心5min 小心转移上部清液于另一离心试管中 此液相当于1062u ml活力 3 0结果与讨论 3 1洗脱剂为获得高的洗脱效率 本实验选用0 02mol LTris 2mol LNacl PH6 0 体系作为洗脱剂 Tris 指三羟甲基氨基甲烷 由图2可知 在2 0mol L以下 随盐浓度的增加 洗脱能力增大 活性回收率提高 洗脱液中离子强度对洗脱效率的影响可归结为离子交换平衡的移动 这种色谱行为表明该固定相具有典型的阴离子交换特性 符合离子交换色谱的洗脱规律 但在2 0mol L以上 随盐浓度增加洗脱能力下降 这种反常现象 可能是由于离子交换柱的多功能特性引起 实验证明 离子交换柱不仅有离子交换的作用 而且还表现一定的疏水作用的 并且这种疏水作用 随溶液离子强度发生变化 当洗脱剂浓度大于2 0mol L时 由于溶液的表面张力过大 离子交换剂的疏水作用变得明显 对蛋白质疏水缔合作用增强 故被吸附的蛋白质难以洗脱 因而活性回收率下降 所以选择抓Nacl浓度为2 0mol L 3 3PH对活性回收率的影响 总结 凡在溶液中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法进行分离 它不仅适用于无机离子混合物的分离 亦可用于有机物的分离 例如氨基酸
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