变形杆菌检验.doc

变形杆菌检验变形杆菌（Proteus）在自然界分布极广，人和动物的粪便带菌很高，各类食品及用具等均可检出，虽是常见的腐生细菌，但在严重污染的食物中，通过生长繁殖后，可使食物含有大量此菌，食入后亦易引起食物中毒。对此菌的实验室诊断，主要是根据生物学特性进行鉴别，也可以用血清学分型，但目前变形杆菌因子血清在国内应用尚不普遍，其检验程序一般是按肠道细菌检验方法进行。一、检验方法（一）操作步骤1. 取被检样品25g，加225mL灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种在SS琼脂平板和EMB琼脂平板上，经37、培养1824h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌在弱选择性的固体培养基上可出现菌落蔓延生长的特点，SS琼脂能抑制其蔓延生长，呈单个菌落。其他变形杆菌呈半透明圆形菌落。2. 挑取上述可疑菌落，接种三糖铁斜面培养基，经37、24h培养后，斜面产碱不变，底层产酸变黄，多数产少量气体，有的产硫化氢或不产硫化氢者均为可疑反应。3. 将三糖铁斜面上可疑反应的培养物做尿素酶试验和涂片革兰氏染色镜检。4. 对尿素酶阳性的革兰氏阴性杆菌，根据生化特性进行分型鉴定。必要时做血清分型。（二）检验程序表9-1变形杆菌检验程序二、结果分析判定（一）形态革兰氏阴性杆菌，形态大小很不一致，有明显的多形性，约为12m0.1-0.5m，有周身鞭毛，不产生芽胞，无荚膜。（二）培养特性生长条件与其他肠道细菌相同，一般培养基都能生长，有动力，运动活泼，普通变形杆菌和奇异形杆菌在湿润的普通琼脂培养基上和血琼脂平板上都能蔓延生长（或称游散生长），在选择性较弱的如EMB培养基，不能抑制其蔓延生长，在选择性较强的SS琼脂和DC琼脂培养基上能受到抑制，呈现单个菌落。莫尔根变形杆菌和雷极变形杆菌呈半透明、圆形、光滑菌落，如果在1琼脂上或经多次移种之后，莫尔根变形杆菌也可看到蔓延生长现象。（三）生化特性根据变形杆菌属的生化学性状分为：普通变形杆菌（P.Vulgaria）、奇异变形杆菌（P.mirabilis）莫尔根变形杆菌（P.morganii）和雷极变形杆菌（P.rettgeri），共同的生化学性状为：均能迅速水解尿素，苯丙氨酸脱氨酶阳性，赖氨酸脱羧酶阴性，精氨酸阴性，不利用丙二酸盐，能在含氰化钾（KCN）的肉汤内生长，均不分解乳糖、棉子糖、纤维二糖、阿拉伯糖、卫矛醇、山梨醇。葡萄糖产酸，可产生少量的气体（产气量一般占倒管的1015），有少数菌株不产气。分解糖类的能力较弱，一般只能发酵少数几种糖类，普通变形杆菌和奇异变形杆菌能迅速而丰富的产生大量硫化氢，液化明胶，而莫尔根变形杆菌和雷极变形杆菌无此特征。奇异变形杆菌和莫尔根变形杆菌能使鸟氨酸脱羧，雷极变形杆菌的绝大多数菌株能发酵甘露醇，但其余种别则不能。变形杆菌的主要生化学性状见表9-1，变形杆菌族生化试验的鉴别可参考表9-2。表9-1变形杆菌主要生物化学性状菌名 项目 普通变形杆菌 奇异变形杆菌 莫尔根变形杆菌 雷极变形杆菌 尿素酶 硫化氢 明胶 鸟氨酸 靛基质 葡萄糖产酸 葡萄糖产气 d 或 乳糖 麦芽糖 甘露醇 甘露糖 蔗糖 d d 肌醇 侧金盏花醇 d 木糖 或（） 或 鼠李糖 或 注：90以上为阳性；90以上为阴性；或大部分菌株为阳性，偶有少数菌株为阴性；或大部分菌株为阴性，偶有少数菌株为阴性；或（）大部分菌株阳性，有少数菌株迟缓阳性；d有不同的反应，（），。表9-2 变形杆菌族生化试验的鉴别 变形杆菌属 普罗菲登斯菌属 普通 奇异 莫尔根 雷极 产碱 司徒氏 靛基质 甲基红 v-p反应 或 柠檬酸盐 d 或() 硫化氢 尿素酶 氰化钾 动力 明胶（22） 赖氨酸 精氨酸 鸟氨酸 苯丙氨酸 丙二酸钠 葡萄糖产气 或 d 或 d 乳糖 蔗糖 d d d ()或 甘露醇 或 d 卫矛醇 水杨苷 d d d 侧金盏花醇 d 肌醇 山梨醇 d d 阿拉伯糖 棉子糖 鼠李糖 或 注：变形杆菌属和普罗菲登斯菌属产气量少（一个小气泡为1015）。（四）血清学对变形杆菌各个种别的血清学研究，Perch氏（1948，1950）曾对普通变形杆菌和奇异变形杆菌建立了一个抗原表，提出了49和O抗原群和19个鞭毛抗原。Rauss和Voros（1936，1959）建立了莫尔根变形杆菌的抗原表，该表有29和O群，19个H抗原和57个血清型。Namioka和Sakazaki二氏（1958）对雷极变形杆菌建立的抗原表，有34个O抗原样，26个鞭毛抗原和45个血清型。能用O和H因子血清做玻片凝集试验以确定其型别。但由于变形杆菌的因子血清在国内尚未供应，目前还不能普遍应用，一般仅采用生化学试验进行鉴别。为证实从不同样品中分离的变形杆菌是否为同一菌型时，最好是用血清学的方法进行分型，但在没有因子血清的情况下，也可采用以下几种方法试验。1. 凝集试验：用两株菌的免疫血清与两株细菌作交叉凝集试验，测定交叉凝集效价，观察两菌是否相同。2. 吸收试验：用两株菌的免疫血清与两株细菌做相互交叉吸收试验，观察是否将血清中的凝集素完全吸除，确定两株细菌的抗原是否相同。3. 拮抗试验：将两株不同来源分离的菌株点种在普通琼脂平板或血琼脂平板上，经37、24h后观察结果，在两株细菌菌落交界处出现明显的分界线时，为菌株不同出现拮抗现象（即称为Dienes现象）。如果菌株相同时，菌株之间无拮抗现象产生，两株细菌的菌落可以融合在一起。但应注意也有少数例外。（五）菌数测定方法目前，尚没有较好的方法准确测定变形杆菌对食品污染的程度，仅可初步了解样品中大概含量供参考。可将磨碎的样品悬液，用无菌盐水稀释成不同稀释度（1:100，1:1000，1:10000等），每个稀释度取0.1mL接种在琼脂斜面底部的凝固水中，经37、24h培养后，观察由