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迈克试剂标准操作程序（SOP） 迈克试剂标准操作程序(SOP)试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay Reagent Kit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪 四川省迈克科技有限责任公司 Sichuan MAKER Science Technology CO.,Ltd 四川省迈克科技有限责任公司编制试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪目 录1.临床意义2.检测原理3.样品准备3.1样品3.2样品稳定性4试剂盒4.1试剂盒组成4.2试剂准备4.3试剂稳定性4.4 试剂盒订货指南5.操作步骤5.1检测参数设置5.2校准5.2.1校准物5.2.2校准物准备5.2.3校准物稳定性5.2.4校准间隔5.2.5校准物溯源性5.2.6校准物订货指南5.3质控5.3.1质控物 5.3.2可接受性判定5.3.3质控物订货指南6.交叉污染7方法学特性7.1线性范围7.2精密度7.3灵敏度7.4抗干扰能力7.5抗凝剂的影响8.方法的可溯源性9.参考值范围10安全性和注意事项11技术服务12主要参考文献试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪1临床意义 胆红素主要来源于衰老红细胞裂解后的血红蛋白，也有一部分来自肌红蛋白、过氧化酶及细胞色素等。血清直接胆红素检测见于：黄疸性肝病、慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎、肝硬化、原发性肝癌、急性肝炎、胆结石、阻塞性胆囊炎、胰头癌等。2检测原理胆红素胆绿素样品中直接胆红素在pH3.0附近，在氧化剂和表面活性剂作用下，被氧化成胆绿素。与此同时，胆红素特有的黄色也随之消失。检测反应前后吸光度的差，即可计算出样品中直接胆红素的浓度。3样品准备3.1样品本试剂盒用于体外检测血清中直接胆红素（DBil）的含量。样品为空腹血清或血浆（1.8mgEDTA-Na2或0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液）。样品应在低温条件下运输保存。3.2样品稳定性在2小时内分离血清/血浆，分离后的样品在室温避光密闭保存可稳定4小时，28密闭避光保存可稳定24小时, -1520密闭避光保存可稳定15天，但不可反复冻融。4试剂盒4.1试剂组成R1： 检测试剂1GoodS 150.0 mmol/LR2： 检测试剂2氧化剂 10.0 mmol/L4.2试剂准备：即用型液体双试剂,开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。4.3试剂稳定性：试剂密闭避光贮存可稳定12个月，开瓶上机稳定30天。4.4试剂盒订货指南货号产品编码规格包装瓶型AA06G7010101006717R1 60ml3 R2 45ml17170瓶型AA06G6010101006706R1 90ml2 R2 45ml17060瓶型AA06H9010101006702R1 50ml4 R2 50ml17020瓶型AA06A0010101006100R1 40ml2 R2 10ml2通用瓶型AA06U9010101006500R1 100ml4 R2 100ml1通用瓶型试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪5.操作步骤5.1 标准检测参数设定： 5.1.1 日立7060分析仪检测参数TestDBil & Test NameDBil Unitmol/L Data ModeOn BoardReport NameDBil Control Interval 1000 Instrument Factor (Y=aX+b)a b Expected Value Expected Value Age(M)(F) 100 Y 0.0-10.0 0.0-10.0 - 100 Y 0.0-10.0 0.0-10.0 0.0-10.0 0.0-10.0Technical Limit 0.0 -700.0 - STDConc.Pos.SamplePre.Dil.Calib.Lot No.QualitativeNo (1) 0.0 W10 0 0999000001 000000(1) 0 (2) * #10 0 0 # 000002 000000(2) 0 (3) 010 0 0000000000(3) 0 (4) 010 0 0000000000(4) 0 (5) 010 0 0000000000(5) 0 (6) 010 0 0000000000(6) 0 TestDBil Assay Code 2Point End 10 Wavelength (2nd/Primary)546 / 450Assay Point 16 - 31 - 0- 0 Diluent W S.Vol.(Normal) 10 0 0 S.Vol.(Decrease) 5 0 0 S.Vol.(Increase) 20 0 0 ABS. Limit 0 DecreaseProzone Limit UpperReagentT1280 0 & T2 0 0 T3 70 0 & T4 0 0 Calibration TypeLinear 2 2 0 Auto Time OutBlank 0SD Limit 999.9 Span 0Duplicate Limit 100 2 Point 720Sensitivity Limit 0 Full 0S1 ABS Limit -1000 1000 Compensated Limit 注：“&”表示用户自定义通道号； “*”输入校准物标示值； “#”表示用户自定义校准液位置号试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2 日立7170分析仪检测参数5.1.2.1 7170屏幕界面1试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2.2 7170屏幕界面2试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2.3 7170屏幕界面3试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.2.4 7170屏幕界面4注：“&”表示用户自定义通道号；“*”输入校准物标示值；“#”表示用户自定义校准液位置号试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪5.1.3 日立7020分析仪检测参数5.1.3.1 7020屏幕界面仪器菜单界面项目名称NO.界面项目DBil1Test Name DBil 2Assay Code (Mthd)2Point End 3Assay Code (Test) 0 4Raction Time 10 5Assay Point 1 17 6Assay Point 2 34 7Assay Point 3 0 8Assay Point 4 0 9Wave Leng (SUB) 546 10Wave Leng (MAIN) 450 11Sample Volume 10.0 12R1 Volume 240 13R1 POS & 14R1 Bottle Size 大 15R2 Volume 16R2 POS 17R2 Bottle Size 18R3 Volume 60 19R3 POS & 20R3 Bottle Size 大 21Calib. Type 线性 22Calib. Type (Wght) 0 23Calib. Conc.1 0.0 24Calib. Pos. 1 99 25Calib. Conc.2 * 26Calib. Pos. 2 # 27Calib.Conc. 3 28Calib. Pos. 3 29Calib. Conc. 4 30Calib. Pos. 4 31Calib. Conc. 5 32Calib. Pos. 5 33Calib. Conc. 6 34Calib. Pos. 6 35S1ABS 36K Factor 37K2 Factor 38K3 Factor 试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪 续上表39K4 Factor 40K5 Factor 41A Factor 42B Factor 43C Factor 44SD Limit 999.9 45Duplicate Limit 100 46Sens Limit 0 47SIABS Limit (L) -1000 48SIABS Limit (H) 1000 49ABS. Limit 0 50ABS. Limit (D/I) 减少 51Prz. Limit 52Prz. Limit(U/D) 53Prz.(End Point) 54Expect Value (L) 0.0 55Expect Value (H) 10.0 56Instr.Fact.(a) 57Instr.Fact.(b) 58Key setting 注：“&”表示用户自定义通道号；“*”输入校准物标示值；“#”表示用户自定义校准液位置号 试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪5.2校准5.2.1校准物 使用迈克科技有限责任公司的胆红素校准血清（商品名为：Bilirubin calibration Serum，Bil-CS）或多项液体校准血清（商品名为Muti-Calibration Serum，M-CS）进行两点校准。5.2.2校准物稳定性迈克科技有限责任公司的胆红素校准血清28密闭避光贮存可稳定24月，室温密闭避光贮存可稳定7天,复溶后28密闭避光贮存可稳定7天；多项液体校准血清-15-20可稳定24个月，28密闭避光贮存可稳定5天。5.2.3校准物准备多项液体校准血清室温放置15分钟,混匀后即可使用，混匀时应避免气泡产生,用后及时冷藏保存；胆红素校准血清使用配套溶解液复溶，溶解完全并混匀后即可使用，混匀时应避免气泡产生；用后及时冷藏保存。5.2.4校准间隔 迈克直接胆红素氧化法检测试剂具有良好的开瓶稳定性,一批试剂间28贮存30天无瓶间差，我们推荐校准间隔为30天。当试剂批号更换、仪器维修或光源等配件更换后应重新进行校准。5.2.5校准物溯源性迈克胆红素校准血清和多项液体校准血清来源于健康正常人血清，其中HIV、HCV、HBV传染性指标经国家食品和药品监督管理局（SDA）批准的方法检测，结果均为阴性，但不排除存在潜在感染的危险性，使用时应视病人样品同等对待。血清添加物为胆红素,其标示值是利用迈克科技有限责任公司的直接胆红素氧化法检测试剂和C.f.a.s（Calibrator for automated system）校准血清及罗氏公司直接胆红素改良J-G法检测试剂在全自动生化分析仪上相比对所确认。罗氏C.f.a.s校准血清具有在欧洲30个权威参考实验室的全自动生化分析仪上确定的直接胆红素靶值。5.2.6校准物订货指南品名货号产品编码规格包装瓶型M-CSBS02150102190020153ml5塑料滴瓶Bil-CSBS0303010219003003Bil-C：3ml1 溶解液：4ml1玻 璃 瓶5.3质控5.3.1质控物 使用迈克科技有限责任公司生产的液体生化质控血清（商品名为：Auto-Norm serum ，ANS、Auto-Pathology serum ，APS）。迈克液体生化质控血清来源于健康正常人血清，其中HIV、HCV、HBV传染性指标经国家食品和药品监督管理局（SDA）批准的方法检测，结果均为阴性，但不排除存在潜在感染的危险性，使用时应视病人样品同等对待。血清添加物基本为人源性材料，反应特性接近临床新鲜血清，基质效应小。迈克液体生化质控血清采用活性物质稳定技术，确保酶、胆红素等物质的稳定性。血清不含剧毒物质（如NaN3、硫柳汞等），对环境不造成污染,且不含蛋白酶水解抑制剂，确保血清活性成份的反应特性。直接胆红素的范围值是依据迈克直接胆红素氧化法检测试剂和胆红素校准血清，采用迈克试剂标准操作参数在全自动生化分析仪上对其进行检测,将检测结果进行统计学处理后确定。5.3.2可接受性判定质控血清的检测值应在给定质控范围或符合用户室内质控规则。5.3.3质控物订货指南品名货号产品编码规格包装瓶型ANSB003500102000030505ml10塑料滴瓶APSB004500102000040505ml10塑料滴瓶试剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪6.交叉污染本试剂具有良好的抗交叉污染能力。不对迈克其它试剂造成污染，且不受迈克其它试剂的污染。7.方法学特性7.1线性范围：0.0700.0mol/L，样品中的DBil超出线性范围，可采用减量操作，或用蒸馏水按比例稀释后检测。7.2精密度：对迈克液体生化质控血清1例、临床标本4例进行50次重复检测，检测结果如下。 批内精密度 批间精密度血清检测次数均值（mol/L）标准差变异系数（CV%）血清检测次数均值（mol/L）标准差变异系数（CV%）I505.30.112.07I50 5.50.162.90II5012.70.211.65II5013.50.221.62III5018.30.291.58III5018.70.311.65IV5040.70.631.54IV5041.40.531.28V50386.73.440.88V50394.23.850.977.3灵敏度：本试剂最低检测限为0.1mol/L,计算是由零浓度的直接胆红素平行检测20次,取其均值加3个标准差而得来。7.4抗干扰能力：血红蛋白1g/L，维生素C30mmol/L,脂浊10%（以甘油三酯含量表示相当于20mmol/L）时对检测结果无影响。7.5抗凝剂的影响常规抗凝剂EDTA-Na2、EDTA-K2、枸橼酸钠、肝素等不影响本法对总胆红素的检测，但草酸盐、NaF类抗凝剂要影响本法对直接胆红素检测，应避免使用。8.方法学可溯性: 迈克DBil试剂（Y）与罗氏公司（X）DBil改良J-G法试剂比对： 回归方程：r=0.99,Y=1.01X + 0.42, n=50检测范围：0480mol/L9.参考值范围0.0 10.0mol/L，建议各实验室建立自己的参考值范围。10.安全性和注意事项血清等样品可能含有乙肝等病毒,有被感染的危险性,采血时应采取防范措施；本试剂含有NaN3应避免与铅铜等金属接触；试剂反应后所产生的废液及使用后难降解的包装材料应集中收集后交当地环境废物处理站处理。11.技术服务有关产品技术咨询请与本公司技术开发部联系,电话:关产品质量投诉请与本公司质管部联系,电话:于新装机用户，本公司可提供技术支持，电话剂项目： 直接胆红素氧化法检测试剂盒Direct Bilirubin(DBil) Assay ReagentKit by Oxidizing Method 适用于： 日立系列自动生化分析仪12.主要参考文献12.1 Tokuda k.and Tanimoto K. 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