自身免疫病与自身抗体的检测ppt课件.ppt

自身免疫病与自身抗体的检测 1 与自身免疫性疾病相关的基本概念 免疫机体识别和排除抗原性异物的功能 也就是机体免疫系统对抗原刺激所产生的以排除抗原为目的的生理过程 体液免疫 产生抗体细胞免疫 致敏淋巴细胞 2 与自身免疫性疾病相关的基本概念 隐蔽抗原 机体有些组织成分由于解剖位置的特殊性 正常情况下终生不与免疫系统接触 称为隐蔽抗原 眼晶状体 葡萄膜 交感性眼炎 精子 男性不育 3 与自身免疫性疾病相关的基本概念 自身免疫 是指机体免疫系统对自身抗原发生免疫应答 产生自身抗体和 或 致敏淋巴细胞的现象 4 与自身免疫性疾病相关的基本概念 自身免疫病 是指在各种内外因素的作用下 自身免疫反应过强 超过了生理性自身免疫反应的强度且持续相当长时间 造成对正常细胞 器官的功能与结构的破坏 呈现与此损伤相关的临床表现及免疫学异常 5 自身免疫性疾病发生的原因 机体抗原特异性淋巴细胞发生异常 对正常组织发生免疫应答状态 机体自身组织成分发生改变从而引起的免疫应答状态 6 自身免疫病的基本特征 多数自身免疫病的病因不清 有些自身免疫病的发生和复发似乎与某些外因有关 但大多数自身免疫病是 自发 地发生的 目前未找到肯定的外因 7 自身免疫病的基本特征 血液中可检出高滴度的自身抗体和 或 与自身组织成分起反应的致敏淋巴细胞 8 自身免疫病的基本特征 组织器官损伤和功能障碍的范围取决于自身抗原分布 器官特异性自身免疫病 桥本氏甲状腺炎 非器官特异性自身免疫病 如系统性红斑狼疮 SLE 9 自身免疫病的基本特征 自身免疫病的发生与多因素相关 包括遗传因素 性别差异 年龄大小 气候环境及地理位置等 10 自身免疫病的基本特征 遗传因素 强直性脊柱炎 AS 患者90 为HLA B27阳性 然而在HLA B27阳性的人群中发生强直性脊柱炎的可能仅为2 而第一级HLA B27阳性的亲属中 发生强直性脊柱炎的危险性达20 11 自身免疫病的基本特征 系统性红斑狼疮 SLE 的家族发病率也较高 在SLE第一代亲属中发病率达3 5 同胞姐妹发病率更高 特别是单卵双胎更为常见 在1980年的调查中35组单卵双胎的患者中 有22组患SLE 共患病率达62 9 而双卵双胎8组中仅1组患病 为12 5 12 自身免疫病的基本特征 性别差异和年龄大小 强直性脊柱炎 AS 多见于年轻男性 其发病年龄从4 90岁不等 但以15 20岁多见 男女比列为9 10 1 但最近有人调查发现男女比列约为1 5 3 1 只不过女性强直性脊柱炎患者起病缓慢 病情较轻 易被误诊 13 自身免疫病的基本特征 系统性红斑狼疮 SLE 是最常见的自身免疫性疾病之一 发病的男女比列为1 9 在生肓年龄甚至可高达1 30 而且多发生于20 40岁的孕龄妇女 14 自身免疫病的基本特征 大多数自身免疫病呈现出发作 缓解 复发 缓解 迁延的临床特征 以致成为终身痼疾 15 自身免疫病的基本特征 免疫抑制剂 肾上腺皮质激素 环磷酰胺 治疗有一定疗效 但副作用与不良反应严重 停药后常易复发 16 自身免疫性疾病临床 病谱 器官特异性非器官特异性桥本甲状腺炎类天疱疮自身免疫性肾小球肾炎系统性红斑狼疮原发性粘液水肿恶性贫血肺肾出血综合征干燥综合征甲状腺机能亢进自身免疫性萎缩性胃炎绝经过早 少数病例 类风湿关节炎Addisino病自身免疫性肝炎男性不育 少数病例 硬皮病1型糖尿病原发性胆汁性肝硬化溃疡性结肠炎多发性肌炎 皮肌炎重症肌无力原发性硬化性胆管炎克隆氏病混合性结缔组织病多发性硬化症自身免疫性溶血性贫血交感性眼炎系统性血管炎脱髓鞘疾病特发性血小板减少性紫癜晶状体源性葡萄膜炎抗磷脂综合征寻常天疱疮特发性粒细胞减少症药物性狼疮自身免疫性疾病有一百多种 发病率占世界人口的10 自身免疫性疾病几乎遍布临床各科 非手术科 疑难病症 17 常见的自身免疫性疾病图片资料 系统性红斑狼疮 SLE 18 常见的自身免疫性疾病图片资料 类风湿性关节炎 RA 19 常见的自身免疫性疾病图片资料 系统性硬化症 PSS 20 常见的自身免疫性疾病图片资料 干燥综合症 SS 21 常见的自身免疫性疾病图片资料 皮肌炎 多发性肌炎 DM PM 22 自身抗体的检测 自身抗体 是指抗自身细胞内 细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白 23 自身抗体的检测 自身抗体是自身免疫病的重要标记 每种自身免疫病都伴有特征性的自身抗体 某些自身抗体因对疾病的诊断具有高度的特异性 已成为诊断某些疾病的血清标记性抗体或特异性抗体 某些自身抗体与疾病的活动性有相关性 个别的自身抗体被证实参与了组织的免疫病理损伤 24 自身抗体的检测 自身抗体检测的临床意义有助于自身免疫病的早期诊断 有助于判断疾病的活动性和预后 观察治疗反应 指导临床用药 有助于进一步研究和阐明自身免疫性疾病的发病机制 25 自身抗体的检测方法 间接荧光染色技术 IIF 实验原理细胞 组织切片或纯化的 生化性质明确的物质均可作为检测自身抗体或病原体抗体的抗原基质 如标本为阳性 已稀释血清中的特异性抗体将与包被在固相上的抗原结合 第二步 已结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体结合 然后在荧光显微镜下观察结果 26 自身抗体的检测方法 间接荧光染色技术 IIF 27 自身抗体的检测方法 间接荧光染色技术 IIF 特异性高 阴阳性结果的信号强度对比明显 每种已结合的抗体在相应抗原的位置产生典型的荧光模型 基质中抗原谱完整 可检测多种抗体 并且检出率高 当制备酶免试剂所需要的抗原太困难或复杂时 可选择间接免疫荧光法 28 自身抗体的检测方法 核均质型 ds DNA或抗组蛋白 29 自身抗体的检测方法 斑点型 S 抗SSA 抗SSB 30 自身抗体的检测方法 着丝点型 ACA 抗着丝点抗体 31 自身抗体的检测方法 抗纺锤体抗体 32 自身抗体的检测方法 ELISA法检测ANA 原理 利用ELISA法 搜集细胞核和细胞浆抗原 如ds DNA Histones Sm RNP SSA SSB Scl 70 centromere Jo 1等混合液包被微孔板 检测抗核抗体 33 自身抗体的检测方法 ELISA法与IIF法比较 有操作简便 结果判断较客观 无需荧光显微镜等优点 现在一些医院用ELISA法来作检测ANA的筛选方法 34 自身抗体的检测方法 颗粒凝集法 PA 原理 以检测抗脱氧核糖核蛋白体 抗DNP抗体 为例 从小牛胸腺中提取脱氧核糖核蛋白 DNP 抗原 致敏聚苯乙烯乳胶 制成抗DNP抗体乳胶凝集试剂 当血清中存在抗DNP抗体时 便与乳胶颗粒上的DNP抗原结合 使乳胶颗粒相互凝集出现肉眼可见的凝集颗粒 35 自身抗体的检测方法 金标免疫斑点法 原理 斑点反应板上固相纯化抗原与血清中抗体形成复合物 胶体金标记抗人IgG单抗与复合物结合 形成肉眼可见的红色圆斑点 本法用于快速检测血清中抗体 36 自身抗体的检测方法 免疫印迹法 IB 原理 用SOS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 将抗原按分子量大小予以分离 再将其转移至硝酸纤维薄膜 如果受检血清含有相应抗原的自身抗体 则在相应位置会发生免疫反应 再加酶标抗体 底物 显色液和终止液 在抗原抗体反应的位置出现显色带 与标准带相比较 37 自身抗体的检测方法 免疫印迹法 IB 38 自身免疫病常规实验室检查 血常规 RA 80 贫血 活动期PLT升高 SLE WBC PLT Hb均可能降底 免疫血管炎 WBC增高 对药物引起的骨髓抑制的监测 39 自身免疫病常规实验室检查 尿常规 SLE 尿蛋白及RBC的出现表明肾脏损伤 40 自身免疫病常规实验室检查 肝功能 如有异常 应鉴别是何种性质 自身免疫肝病 病原感染常规检查肝炎病毒 HAV HBV HCV HDV HEV HGV EBV TB 41 自身免疫病常规实验室检查 肾功能 免疫肾病 SLE 血管炎 肌酶 多发性肌炎 皮肌炎 PM DM 尿酸 痛风 42 自身免疫病常规实验室检查 免疫血清学检查免疫球蛋白 血清蛋白电泳 高球蛋的血症 ESR CRP 急性期蛋白 对病情活动性的判断 CH50 C3 C4 SLE活动期均降底 ASO 链球菌感染 风湿热 43 自身免疫病常规实验室检查 抗核抗体谱 ANAs 抗中性粒细胞胞浆抗体 ANCAs 类风湿关节炎相关抗体自身免疫性肝病相关抗体抗磷脂抗体其它 44 抗核抗体谱 ANAS 的检测 抗核抗体 ANA 是自身抗体中的一组抗体 ANA的研究 从发现狼疮 LE 细胞算起 迄今40多年来 人们对ANA的认识不断加深 已衍生出具有不同临床意义的二十余种ANA 形成了抗核抗体谱 ANAS 45 抗核抗体谱 ANAS 的检测 抗核抗体 传统定义 顾名思义是指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称 现代定义 是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称 46 抗核抗体谱 ANAS 的检测 ANA检测 IIF法 金标准 1 90 以上实验室使用Hep 2细胞为底物 2 为人来源培养细胞 人喉癌细胞 据有核大 细胞结构清晰特点 3 便于结构观察及荧光染色核型分析 4 核抗原丰富 特异性强 有完整的ANA抗原谱 细胞核 浆 骨架 周期 5 可预测分析ANA靶抗原范围 6 经验性强 47 48 IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型细胞核细胞浆细胞骨架细胞周期均质型核糖体型肌动蛋白型中心体型核膜型线粒体型波形蛋白型纺锤体型斑点型高尔基体中间体型核仁型溶酶体型着丝点颗粒型 粗 细 PCNA型核 多 少 点型 49 抗核抗体谱 ANAS 的检测 在实际工作中 不管用何种方法来检测ANA 实际上都是指总抗核抗体检测 若检测结果为阳性 则需进行分型 50 抗核抗体谱 ANAS 的检测 抗核抗体 ANA 的阳性率SLE 95 PSS70 80 MCTD 95 SS60 70 PM DM50 60 RA20 30 自身免疫性肝炎80 90 正常人5 20 51 IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型细胞核细胞浆细胞骨架细胞周期均质型核糖体型肌动蛋白型中心体型核膜型线粒体型波形蛋白型纺锤体型斑点型高尔基体中间体型核仁型溶酶体型着丝点颗粒型 粗 细 PCNA型核 多 少 点型 52 抗心磷脂抗体 ACL 抗心磷脂抗体 Anti CardiolipinAntibodiesACL 是抗磷脂抗体中的一个重要组成部分 可在多种结缔组织病中出现 抗心磷脂抗体可分为IgA IgM IgG 53 抗心磷脂抗体 ACL 研究表明ACL在SLE中阳性率为30 其次在RA中阳性率为23 都以IgG型为主 在SLE病人当中ACL阳性者狼疮脑病的发病率明显高于ACL阴性患者 另外 血小板减少 血管栓塞和习惯性流产也与ACL抗体密切相关 54 抗心磷脂抗体 ACL 55 类风湿性关节炎 RA 的早期诊断 类风湿因子 RheumatoidFactorRF 是IgGFc端的自身抗体 因为它是抗体 即IgG 的对应抗体 故也称为抗抗体 RF可以是IgG IgA IgM型 现在一般说的RF是指IgM类风湿因子 56 类风湿性关节炎 RA 的早期诊断 RF出现于的RA病人血清中 约30 的SLE 约50 的SS 部分MCTD和少数PSS病人也可呈阳性 在某些病毒 原虫 细菌感染和肿瘤等非自身免疫病患者也可以出现 57 类风湿性关节炎 RA 的早期诊断 RA是一种最常见的自身免疫性疾病 在全世界大约有1 的人患有此病 是以关节滑膜炎症的慢性自身免疫性疾病 其预后变异大 轻者发生轻度关节畸形 重者则发生严重致死性病变 RA诊断和治疗晚 则疗效不满意 早期诊断和治疗 炎症有可能发生可逆性改变 这就显得RA的早期诊断极为重要 58 类风湿性关节炎 RA 的早期诊断 类风湿因子 RF 阳性率为79 特异性为63 抗核周因子抗体 APF 阳性率达为81 特异性为73 90 抗角质蛋白抗体 AKA 阳性率为36 69 特异性为95 99 抗RA33抗体 阳性率为35 病情相对较重 59 类风湿性关节炎 RA 的早期诊断 抗Sa抗体 IB法检测的敏感性为40 特异性为99 阳性预报率为98 60 类风湿性关节炎 RA 的早期诊断 抗环瓜氨酸肽 CCP 抗体 一种远比类风湿因子特异的RA的指标 抗CCP阳性患者比阴性的患者更容易发展成可通过放射性方法检测到的关节损伤 ELISA法敏感性为80 特异性为96 在79 的早期患者中可检出抗CCP抗体 61 类风湿性关节炎 RA 的早期诊断 这几种抗体都可以在RA起病一年内出现 除RF外的几种抗体对RA的诊断具有很高的特异性 故对RA的早期诊断有很大的帮助 62 抗中性粒细胞胞浆抗体谱 ANCA ANCA是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体 80年代中期发现ANCA 是临床诊断原发小血管炎的重要血清学标志 近10年来国际上对ANCA的研究进入了高潮 重要的ANCA抗原相继发现 63 抗中性粒细胞胞浆抗体谱 ANCA ANCA靶抗原包括 蛋白酶3 PR3 髓过氧化物酶 MPO 人白细胞弹性a蛋白酶 HEL 乳铁蛋白 LF 组织蛋白酶G CG 人溶酶体相关膜蛋白2 H LAMP2 64 抗中性粒细胞胞浆抗体谱 ANCA 溶菌酶 LYS 杀菌 膜通透性增高蛋白 BPI 天青杀素防御素 浠醇酶 葡萄糖醛酸酶 65 抗线粒体抗体 antimitochondrialantibodiesAMA AMA是一种无种属特异性和器官特异性的自身抗体