韩国检测霉菌的方法是Howard霉菌计数法.doc

韩国检测霉菌的方法是Howard霉菌计数法（Howard Mold Counting Assay）。其方法如下：1.所需设备1) 高速混合器可调速的高速混合器，4-8个尖锐的不锈钢刃在200ml容量的不锈钢杯容器的底部附近旋转，使用旋转速度最少010，000rpm之间，并用带有旋转速度仪的高速混合器。2) Howard霉菌计数玻片（Howard Mold Counting Slide）依外壕被围绕的2015mm大小的四角的玻璃片。试料点滴平面的两个侧面盖玻片支架比试料点滴平面高出0.1mm的整齐突起。盖玻片放在支架上面时，使用试料点滴平面与盖玻片之间的深度达到0.1mm的玻片。3) 显微镜使用配有4个黑白接物镜并以10-400倍的倍率可以观察的显微镜。2.试剂1）1%氢氧化钠溶液（NaOH）2）氧化硅胶液小包制或者2-辛醇（2-octanol）3）稳定液（5%果胶溶液）：高速搅拌器里注入475ml、85水搅拌的同时将25g的果胶（pectin）少量的添加并溶解。3试验操作1）试验溶液的调配 称5g检样放入高速混合器。100ml的1%氢氧化钠溶液分2次添加，第一次添加约30ml在10，000rpm的速度下搅拌5秒，然后用余下的70ml清洗混合器内壁上的附着物。把混合器内的混合物以10，000rpm的速度搅拌3分钟后，滴入氧化硅胶液34滴除去泡沫，以上的混合物100g与25g的稳定液混合作为显微镜镜检试料。 2）试验操作 （1）显微镜镜检试料的操作 Howard霉菌计数玻片的试料平面上利用滴管点滴试料。在点滴的试料上，大的检样片或籽等用微型镊子取出后，尽量不产生斑点或线条的小心放上盖玻片，然后在显微镜载物台上插入霉菌计数玻片。 （2）霉菌菌丝的诊断 在显微镜的100450倍观察时，霉菌菌丝有下列外观特性。 细胞壁的平行 分节 形成粒子 分枝 菌丝的末梢 非折射性的外观 （3）阳性划区判定 对一个可视划区判定阳性或者阴性。哪一个划区也不能一次以上的判定阳性。为判定一个划区为阳性，三根以下的霉菌菌丝的总长度（合计长度）需要超过可视划区直径的1/6.大部分的阳性划区判定是包括分枝长度的一个菌丝的长度为依据，并且要超过可视划区直径的1/6。下列长度中只要有一个超过可视划区直径的1/6，该可视划区判定为阳性。l 没有分枝的一个菌丝的长度l 分枝的长度合计的一个菌丝的长度l 2个菌丝的长度合计的长度l 3个菌丝的长度合计的长度l 由霉菌块形成的所有菌丝的总长度(霉菌块是作为1个碎片来看待并且所有菌丝的总长度) （4）显微镜镜检适当的调整粗调螺丝和微调螺丝，在90125倍的倍率范围里，调准焦距到可视划区内的物体能够清晰可见。在试料平面上设定25个圆型的可视划区，按号码顺序判定霉菌菌丝体的各可视划区的霉菌菌丝体是阳性或者阴性。 从1号可视划区到25号可视划区逐一镜检，按各可视划区分别判定霉菌菌丝体的阳性或者阴性。从1号到25号划区的镜检结束后，从显微镜拿出Howard霉菌计数玻片清洗干燥。使用同一试验溶液反复（1）的试验操作，从25号划区起至1号划区逐一实施镜检，对总共50个可视划区判