HPLC测定妇心舒胶囊中芍药苷的含量.doc

HPLC测定妇心舒胶囊中芍药苷的含量【摘要】目的：建立HPLC法测定妇心舒胶囊中芍药苷含量。方法：色谱柱为KNAUER C18色谱柱，流动相为乙腈-水（20:80），流速1.0 ml/min，检测波长为230 nm，柱温为35。结果：芍药苷在1.71 mg/L6.84 mg/L浓度之间与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9997，平均回收率98.58%，RSD=1.03%，(n=6)。结论：该方法简便、准确，专属性强，可以作为妇心舒胶囊的质量控制标准。 【关键词】 妇心舒胶囊 芍药苷 高效液相色谱（HPLC）Determination of Paeoniflorin of Fuxinshu Capsules by HPLCYAO Ben,WANG Xi-fang,FENG Shu-ping,MIAO Ting,QIAO Yi ,JIA Pu(The Traditional Chinese Medicine College of Shanxi, Xianyang, Shanxi 712046 China;Shanxi Momentum Pharmaceutical CO.LTD,Xianyang,Shanxi 712000,China)Abstract: Objective To establish a method for determining Paeoniflorin of Fuxinshu Capsule by HPLC. Methods KNAUER C18 column was used. The mobile phase consisted of acetonitrile-water (20:80) with flow rate 1.0 ml/min. The detection wavelength was set at 230 nm. The column temperature was 35. Results The linear range of Paeoniflorin was at the range of 1.71 mg/L6.84 mg/L(r=0.9997). The average recovery was 98.58% and RSD was 1.03% (n=6). Conclusion The method is rapid, highly accurate and precise. It can control the quality of Fuxinshu Capsules.Key words: Fuxinshu Capsules; Paeoniflorin; HPLC妇心舒胶囊是由熟地、赤芍、当归、干姜、蒲黄等8味药物组成，具有补血活血，行气，止痛的功效。用于妇女产后恶露不尽，脐腹胀痛或胞衣不下，血晕神昏、眼黑口噤等产后淤血诸症1。本方原为散剂，现改为胶囊剂，采用HPLC测定芍药苷的含量，可为该药的质量控制及质量标准的制订提供依据。1 仪器、试药与样品1.1 仪器 SPD-20A高效液相色谱仪（SPD-20A紫外检测器，LC-20AT单元泵，Clarity色谱工作站）；梅特勒AE-240型分析天平（岛津）。1.2 试药、样品 芍药苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：110736-200630，含量测定用），甲醇、乙腈均为色谱纯，水为蒸馏水，妇心舒胶囊及阴性供试品（均系实验室自制），其他试剂均为分析纯。2 方法2.1 色谱条件 KNAUER C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，粒径5 μm）；流动相：乙腈-水（20：80）；检测波长230 nm；柱温：35，流速1.0 ml/min，进样量20 μl，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于30002。2.2 溶液的配置2.2.1 对照品溶液的制备 取芍药苷对照品适量, 精密称定, 加甲醇溶解并配制成每1 ml含17.14 μg的溶液,即得。2.2.2 供试溶液的制备 取本品内容物0.6 g，精密称量，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，离心，取上清液，精密吸取滤液5 ml，水浴蒸干，残渣用5 ml流动相溶解，转移至10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.2.3 阴性供试品溶液的制备 按处方中药味比例配制不含赤芍的阴性供试品，按2.2.2方法操作，即可。3 结果3.1 适用性实验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果(见图1图3)。图1 芍药苷标准品HPLC图（略）图2供试品HPLC图（略） 图3缺赤芍样品HPLC图（略）在该系统条件下，供试品溶液与对照品溶液在相应的位置上有相同的色谱峰，主峰与其他组分的分离良好，芍药苷的保留时间约为20.0 min，阴性供试品在相应位置无干扰峰出现。3.2 线性关系考察 精密吸取芍药苷对照品溶液，0.5ml，1.0 ml，2.0 ml，3.0 ml，4.0 ml分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取20 μl注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定峰面积。以芍药苷浓度为横坐标，以相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并计算，得线性回归方程为：Y10666.74X1116.85，r0.9997，结果表明，芍药苷在1.71 mg/L6.84 mg/L浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。3.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液20 μl，按上述色谱条件注入液相色谱仪，连续进样5次，结果测得峰面积RSD=0.97%。3.4 稳定性试验 精密吸取同一批供试品溶液各20 μl，分别于0 h，2 h，4 h，6 h，8h按上述色谱条件进行测定，RSD0.87%，结果表明供试品溶液在制备后8 h内基本稳定。3.5重复性试验 精密称取供试品（批号：071101）共5份，按2.2.2项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件注入液相色谱仪，测定，计算，样品中芍药苷的平均含量为0.74 mg/g，RSD = 1.61%，结果表明本法的重现性良好。3.6加样回收率试验 精密称取同一批已知含量的供试品（批号：071101）6份，每份约0.6 g，分别精密加入1 ml，2 ml，4 ml的芍药苷对照品（17.14 mg/L）储备液各2份，按供试品制备与测定方法操作，（见表1）。表1 加样回收率实验结果（略）3.7样品的测定 取5批妇心舒胶囊，依法制备和测定，记录芍药苷峰面积，按外标法计算含量，（见表2）。结果表明5批妇心舒胶囊中含量以芍药苷计均大于0.20 mg。表2 5批妇心舒胶囊的含量测定结果（略）4 讨论 赤芍为处方中主药之一,芍药苷是其主要有效成分,因此选择芍药苷作为控制质量的指标成分,用HPLC法测定芍药苷含量。实验研究发现关键在于根据具体情况有效的排除其他成分的干扰3，因此本实验采用先超声，过滤，蒸干，然后用流动相溶解方法处理样品，收得满意效果。 本实验经过方法学分析，反复摸索发现妇心舒胶囊利用乙腈-水作流动相，在流速为1.0 ml/min，柱温35时进行测定，峰形分离度好且阴性供试品在此处无干扰，实验研究发现此方法简便，准确,重现性、回收率均较好。【参考文献】 1汪昂.医方集解.上海科学技术出版社.2国