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医学免疫学实验四免疫标记技术ImmunolabelingTechnique 1 简介 免疫标记技术 immunolabelingtechnique 是指用荧光素 酶 放射性同位素等对抗体或抗原进行标记 然后再通过检测标记物来观察抗原抗体反应的实验技术 优点 特异 敏度和快速 可定性 定量和定位 2 分类 3 放射免疫技术 放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性和抗原抗体反应的高度特异性相结合 在体外测定超微量物质的一项技术常用的放射性同位素有 125I 3H 14C 35S 32P三种方法 基于竞争性结合反应的放射免疫分析 RIA 非竞争性结合的免疫放射分析 IRMA 放射受体分析技术 RRA 4 放射免疫技术 放射免疫技术具有灵敏度高 特异性强 精密度好的优点 常用于各种激素 微量蛋白质 肿瘤标志物和药物等微量物质的测定 但具有放射污染的缺点 5 免疫酶技术 免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法 常用的酶 辣根过氧化物酶 HRP 碱性磷酸酶 AP 特点 灵敏度高 特异性强 准确性好 试剂稳定和简易安全等优点 6 分类 7 免疫荧光技术 免疫荧光技术是用荧光标记的抗体或抗原与样品 细胞 组织或分离的物质等 中相应的抗原或抗体结合 以适当检测荧光的技术对其进行分析的方法常用于标记的荧光素有 异硫氰酸 FITC 罗丹明 RB200 常用的方法有直接法和间接法两种 8 直接荧光法 把荧光素标记的抗体与待检标本 细胞悬液 细胞涂片或组织切片 相互作用 洗去未结合荧光标记抗体 在荧光显微镜下观察 有荧光的部分为阳性 免疫荧光技术 9 间接荧光法 将特异性抗体 一抗 和待检标本 细胞悬液 细胞涂片或组织切片 相互作用后加入荧光素标记的一抗的抗体 二抗 显示结果 免疫荧光技术 10 实验一酶联免疫吸附技术 双抗体夹心法测定甲胎蛋白 AFP 11 酶联免疫吸附技术 酶联免疫吸附技术 enzymelinkedimmunosorbentassay ELISA 是一种集免疫学 生物化学及光学检测技术为一体的测定方法 将抗原或者抗体固定化后 加入酶标抗体或抗原 形成抗原抗体复合物 再加入酶反应的底物后 底物被酶催化成为有色产物 产物的量与标本中受检物质的量直接相关 由此进行定性或定量分析 12 双抗体夹心法 实验原理 13 ELISA基本的实验过程 包被 将已知抗原或抗体通过物理吸附到固相载体表面 使抗原或抗体固相化抗原抗体反应 先后加入被检标本和酶结合物 使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定酶促反应 在反应体系中加入酶作用的底物 使发生酶促反应而显色 14 ELISA基本的实验过程 15 实验器材 1 AFP诊断试剂盒 2 AFP阳性对照品 阴性对照品 待检品 3 微量加样器 温箱 16 操作步骤 将包被孔编号 分别加入阳性对照 待测样品及阴性对照各50ul在各孔内加入酶结合物1滴 37 温育30分钟甩掉孔内液体 然后在各孔中分别加入洗涤液1滴 摇匀 弃去 用蒸馏水或自来水加满各孔甩掉 反复5次 然后在吸水纸上吸干 倒扣在吸水纸上 各孔内加入底物和显色液各1滴 轻轻摇动混匀 室温避光反应2 5min 观察结果 17 注意事项 1 加样应加在加样孔的底部 避免产生气泡 防止产生假阴性2 洗涤必须彻底 防止产生假阳性 18 实验结果 若待检孔显色浅于或等于阴性对照孔则判定为若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判定为若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对照孔之间则判定为 阴性 阳性 弱阳性 19 临床意义 1 原发性肝癌的大规模普查 2 可以用作检测胎儿畸形 畸胎瘤 20 实验二免疫金标记技术 21 免疫金标记技术 免疫金标记技术 Immunogoldlabellingtechique 是将金颗粒标记抗原或抗体 用于检测相应抗体或抗原的一种实验方法 22 免疫金标记技术 该技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性 在金标蛋白结合处 在显微镜下可见黑褐色颗粒 当这些标记物在相应的配体处大量聚集时 肉眼可见红色或粉红色斑点 因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中 23 实验原理 胶体金标记的鼠抗人 hCG抗体 抗人 hCG抗体 抗鼠IgG抗体 hCG 妊娠诊断试纸 24 实验原理 25 操作步骤 1 待测样品 检测试纸和其它检测材料等恢复到室温后检测 2 将测试纸有箭头的一端插入尿液标本容器中 5秒钟后取出平放 5分钟内观察结果 注意 测试纸插入尿液深度不可超过MAX标志线 26 实验结果 阳性