附录 Ⅷ P 残留溶剂测定法.doc

附录 P 残留溶剂测定法药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。药物中常见的残留溶剂及限度见附表1，除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留量应符合表中的规定；对其他溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品规范、GMP或其他基本的质量要求。本法照气相色谱法（附录 E）测定。色谱柱1毛细管柱 除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互代使用。（1）非极性色谱柱 固定液为100的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。（2）极性色谱柱 固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱。（3）中极性色谱柱 固定液为（35%）二苯基-（65%）甲基聚硅氧烷，（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷，（35%）二苯基-（65%）二甲基亚芳基聚硅氧烷，（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷，（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。（4）弱极性色谱柱 固定液为（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷，（5%）二苯基-（95%）二甲基亚芳基硅氧烷共聚物的毛细管柱。2填充柱 以直径为0.250.18mm的乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作为固定相。系统适用性试验（1）用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数均应大于5000；填充柱法的理论板数应大于1000。（2）色谱图中，待测物色谱峰与其相邻的色谱峰的分离度应大于1.5；（3）以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差（RSD）应不大于5；若以外标法测定，所得待测物峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于10。供试品溶液的制备1顶空进样 除另有规定外，精密称取供试品0.11g；通常以水为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N，N二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其他适宜溶剂；根据供试品和待测溶剂的溶解度，选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。根据品种正文中残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，浓度满足系统定量测定的需要。2溶液直接进样 精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；根据品种正文中残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度满足系统定量测定的需要。对照品溶液的制备精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液。若为限度实验，根据残留溶剂的限度规定确定对照品溶液的浓度；若为定量测定，为保证定量结果的准确性，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过2倍为宜。必要时，应重新调整供试品溶液和对照品溶液的浓度。测定法第一法 毛细管柱顶空进样等温法当需要检查的有机溶剂数量不多，并极性差异较小时，可采用此法。色谱条件 柱温一般为40100；常以氮气为载气，流速为每分钟1.02.0ml；顶空瓶加热温度为7085，顶空瓶加热时间3060分钟；进样口温度为200；如采用FID检测器，温度为250。测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。第二法 毛细管柱顶空进样系统程序升温法当需要检查的有机溶剂数量较多并极性差异较大时，可采用此法。色谱条件 如为非极性色谱系统，柱温一般先在30维持7分钟，再以8/min的速度升至120，维持15分钟；如为极性色谱系统，柱温一般先在60维持6分钟；再以8/min的升温速率升至100，维持20 分钟；以氮气为载气，流速为2.0ml/min；顶空瓶温度7085，顶空时间3060分钟；进样口温度为200；如采用FID检测器，温度为250。具体到单个药品的残留溶剂检查时，可根据该品种项下的残留溶剂组成调整程序升温速率。测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。第三法 溶液直接进样法 可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于3次，每次2l，测定待测峰的峰面积。计算法（1）限度实验：以内标法测定时，计算单位重量样品中的色谱峰面积与内标峰面积之比；供试品溶液所得的峰面积比的平均值不得大于由对照品溶液所得的峰面积比的平均值。以外标法测定时，供试品溶液所得的单位重量中样品待测物峰的平均面积不得大于由标准溶液所得的待测物峰的平均峰面积。（2）定量测定：按内标法或外标法计算各残留溶剂的量。【附注】（1）除另有规定外，顶空条件的选择A应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空温度。对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的顶空温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。B顶空时间一般为3045分钟，以保证供试品溶液的气-液两相有足够的时间达到平衡。顶空时间通常不宜过长，如超过60分钟，可能引起顶空瓶的气密性变差，导致定量准确性的降低。C对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件。（2）定量方法的验证 当采用顶空色谱系统测定时，供试品与对照品处于不完全相同的基质中，故应考虑气液平衡过程中的基质效应。由于标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性。当标准加入法与其他定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果为准。（3）干扰峰的排除 供试品中的未知杂质或其挥发性热降解物易对残留溶剂的测定产生干扰。干扰作用包括在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降解物与待测物的保留值相同（共出峰）；或热降解产物与待测物的结构相同（如甲氧基热裂解产生甲醇）。当测定的有机溶剂残留量超出限度，但未能确定供试品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用时，应通过试验排除干扰作用的存在。对第一类干扰作用，通常采用在另一种极性相反的色谱柱系统中对相同样品再进行测定，比较不同色谱系统中测定结果的方法。如二者结果一致，则可以排除测定中有共出峰的干扰；如二者结果不一致，则表明测定中有共出峰的干扰。对第二类干扰作用，通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判断。（4）含氮碱性化合物的测定 普通气相色谱的不锈钢管路、进样器的衬管等对有机胺等含氮碱性化合物具有较强的吸附作用，致使其检出灵敏度降低。当采用顶空进行系统测定此类化合物时，应采用惰性的硅钢材料或镍钢材料管路；或采用溶液直接进样法测定。供试品溶液应不呈酸性，以免待测物与酸反应后不易汽化。通常采用弱极性的色谱柱或经碱处理过的色谱柱分析含氮碱性化合物，如果采用胺分析专用柱进行分析，效果更好。对不宜采用气相色谱法测定含氮碱性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等可采用其他方法如离子色谱法等测定。（5）检测器的选择 对含卤素元素的残留溶剂如氯仿等，采用ECD检测器，易得到高的灵敏度。（6）由于不同的实验室在测定同一药品时可能采用了不同的实验方法，当测定结果处于合格不合格边缘时，以采用内标及标准加入法为准。（7）甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不宜用顶空进样方式测定。附表1 药品中常见的残留溶剂及限度溶 剂 名 称限 度/%溶 剂 名 称限 度/%第一类溶剂（应该避免使用）苯四氯化碳1, 2-二氯乙烷1, 1-二氯乙烯1, 1, 1-三氯乙烷第二类溶剂（应该限制使用）乙腈氯苯氯仿环己烷1, 2-二氯乙烯二氯甲烷1, 2-二甲氧基乙烷N, N-二甲基乙酰胺N, N-二甲基甲酰胺1, 4-二氧六环2-乙氧基乙醇乙二醇甲酰胺正己烷甲醇2-甲氧基乙醇甲基丁基酮甲基环己烷N-甲基吡咯烷酮硝基甲烷吡啶四氢噻吩四氢化萘四氢呋喃甲苯1, 1, 2-三氯乙烯二甲苯0.00020.00040.00050.00080.150.0410.0360.0060.3880.1870.060.010.1090.0880.0380.0160.00620.0220.0290.30.0050.0050.1180.4840.0050.020.0160.010.0720.0890.0080.217第三类溶剂（GMP或其他质量要求限制使用）醋酸丙酮甲氧基苯正丁醇仲丁醇醋酸丁酯叔丁基甲基醚异丙基苯二甲亚砜乙醇醋酸乙酯乙醚甲酸乙酯甲酸正庚烷醋酸异丁酯醋酸异丙酯醋酸甲酯3-甲基-1-丁醇丁酮甲基异丁基酮异丁醇正戊烷正戊醇正丙醇异丙醇醋酸丙酯第四类溶剂（尚无足够毒理学资料）1, 1-二乙氧基丙烷1, 1-二甲氧基甲烷2, 2-二甲氧基丙烷异辛烷异丙醚甲基异丙基酮甲基四氢呋喃石油醚三氯醋酸三氟醋酸0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5 通常含有60%间二甲苯，14%对二甲苯，9%邻二甲苯和17%乙苯。 药品生产企业在使用时应提供该类溶剂在制剂中残留水平的合理性论证报告。附表2 常见有机溶剂在等温法测定的与丁酮的相对保留时间（RTR）非 极 性 色 谱 柱极 性 色 谱 柱溶剂名称RTR溶剂名称RTR柱温40甲醇乙醇乙腈丙酮异丙醇乙醚甲酸乙酯正戊烷1, 1-二氯乙烯醋酸甲酯二氯甲烷硝基甲烷正丙醇叔丁基甲基醚丁酮仲丁醇异丙醚正己烷醋酸乙酯氯仿四氢呋喃异丁醇1, 1, 1-三氯乙烷甲基异丙基酮1, 2-二甲氧基乙烷醋酸异丙酯正丁醇苯甲基四氢呋喃四氯化碳环己烷异辛烷三氯乙烯醋酸丙酯正庚烷甲基环己烷甲基异丁基酮3-甲基-1-丁醇甲苯正戊醇柱温70醋酸丁酯甲基丁基酮醋酸异丁酯氯苯异丙基苯柱温901, 2-二氯乙烷二氧六环吡啶3280甲氧基苯6柱温100四氢萘0.5400.6150.6400.6680.6910.7270.7360.7390.7490.7800.7850.8190.8690.9421.0001.0651.1271.1301.1311.1631.2321.2361.4311.4361.4641.5221.5331.5601.6061.6101.6151.9751.9892.1272.1342.4612.4872.5173.2473.307柱温60正戊烷正己烷乙醚异丙醚叔丁基甲基醚1, 1-二氯乙烯环己烷异辛烷正庚烷甲基环己烷二甲氧基甲烷丙酮醋酸甲酯甲酸乙酯1, 1, 1-三氯乙烷甲醇四氢呋喃甲基四氢呋喃四氯化碳醋酸乙酯醋酸异丙酯丁酮异丙醇1, 2-二甲氧基乙烷二氯甲烷乙醇氯仿甲基异丙基酮苯醋酸丙酯三氯乙烯甲基异丁基酮醋酸异丁酯乙腈仲丁醇正丙醇甲苯醋酸丁酯二氧六环1, 2-二氯乙烷柱温60异丙基苯吡啶柱温80硝基甲烷异丁醇正丁醇正戊醇氯苯3-甲基-1-丁醇柱温90甲氧基苯柱温100四氢萘0.5620.5810.5890.6050.6170.6470.6470.6570.6730.6870.7110.7630.7640.8210.8680.8970.9100.9160.9330.9480.9731.0001.0491.0621.0731.0741.0841.0941.1401.2571.3421.4501.4521.4781.4871.5991.6601.6681.8591.8682.9683.327注： 表中数据为非极性的SPB-1柱（30m0.32mm1.0m）和极性的HP-FFAP柱（25m0.32mm0.52m）测定的结果。 本表所列数据仅作参考。附表3 常见有机溶剂在程序升温法测定的相对保留值非极性色谱柱极性色谱柱顺序溶剂名称RTR顺序溶剂名称RTR12345678910111213141516171819202122232425262728293031323334353637383940414243444546474849甲醇乙醇乙腈丙酮异丙醇正戊烷乙醚甲酸乙酯二甲氧基甲烷醋酸甲酯二氯甲烷硝基甲烷正丙醇叔丁基甲基醚丁酮仲丁醇异丙醚正己烷氯仿醋酸乙酯四氢呋喃异丁醇1, 2-二氯乙烷1, 2-二甲氧基乙烷甲基异丙基酮苯醋酸异丙酯正丁醇四氯化碳环己烷甲基四氢呋喃三氯乙烯二氧六环异辛烷正庚烷醋酸丙酯吡啶甲基环己烷甲基异丁基酮3-甲基-1-丁醇甲苯正戊醇甲基丁基酮醋酸异丁酯醋酸丁酯氯苯甲氧基苯异丙基苯四氢萘0.4530.5390.5650.5950.6280.6670.6690.6830.7000.7200.7230.7800.8490.9311.0001.0951.1691.1711.1781.1791.2831.3241.4131.5611.5661.6581.6791.6961.7111.7361.7402.0282.0302.0542.1632.1642.3202.3342.3522.3702.6172.6352.6682.7312.9533.1523.5613.6535.13212345678910111213141516171819202122232425262728293031323334353637383940414243444546474849正戊烷正己烷乙醚异辛烷异丙醚叔丁基甲基醚正庚烷环己烷二甲氧基甲烷甲基环己烷丙酮甲酸甲酯醋酸甲酯四氢呋喃甲基四氢呋喃四氯化碳醋酸乙酯醋酸异丙酯甲醇丁酮异丙醇1, 2-二甲氧基乙烷二氯甲烷氯仿乙醇甲基异丙基酮苯醋酸丙酯三氯乙烯仲丁醇甲基异丁基酮醋酸异丁酯乙腈正丙醇甲苯1, 2-二氯乙烷二氧六环醋酸丁酯甲基丁基酮异丁醇正丁