确证化学结构的试验资料及文献资料(样版).doc

盐酸帕洛诺司琼申报资料99盐酸帕洛诺司琼确证化学结构的试验资料及文献资料目 录91新药名称、化学结构式、分子式及分子量92供确证化学结构用样品的纯度及其检查方法93确证化学结构的方法94综合解析95参考文献9.1、新药名称、化学结构式、分子式及分子量通用名：盐酸帕洛诺司琼英文名：Palonosetron Hydrochloride汉语拼音：Yan Suan Pa Luo Nuo Si Qiong 结构式：多了2,3a 位的双键分子式：C19H25ClN2O分子量：332.87CAS登录号：135729-61-2中文化学名：(3aS)-2-(S)-1-氮杂双环2.2.2辛-3-基-2,3,3a,4,5,6-六氢-1H-苯并de异喹啉-1-酮盐酸盐英文化学名：(3aS)-2-(S)-1-Azabicyclo2.2.2oct-3-yl-2,3,3a,4,5,6-hexahydro -1H- benzdeisoquinolin-1-one Hydrochloride通用名：盐酸帕洛诺司琼 (Palonosetron Hydrochloride)其它名称：Aloxi、Onicit9.2、供确证化学结构用样品的来源与批号1、 供确证化学结构用样品的精制和批号批号：盐酸帕洛诺司琼样品：20040705盐酸帕洛诺司琼精制品：20040707取帕洛诺司琼盐酸盐样品25g，无水乙醇重结晶2次，最后得白色帕洛诺司琼盐酸盐精制品12g。具体精制方法见“资料编号8”。盐酸帕洛诺司琼样品(批号：20040705)和精制品(批号：20040707)以归一化法测得含量为99.75，有关物质 0.3 。具体方法参见资料10中“含量测定”项。2、来源： 公司9.3、确证化学结构的方法9.3.1 理化性状1 外观性状【1】本品为白色或微黄色粉末状晶体，无臭，无味。2 溶解性易溶于水，溶于丙二醇，微溶于乙醇和2丙醇。3 熔点 290，与文献报道相符（m.p. 290）【1】)4 绝对构型 4.1 比旋度的测定盐酸帕洛诺司琼样品测量值：-88 -92，（c=1，CHCl3） 盐酸帕洛诺司琼精制品测量值：-88 -92，（c=1，CHCl3）请各选定一个检测值并附上检测报告。文献值2：90.4（c1，CHCl3） 4.2 手性色谱柱测定取盐酸帕洛诺司琼样品，加乙醇（含0.1的TFA）制成每1ml含0.4mg的溶液作为供试品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2000年版二部附录V D）试验，通过AD-H（2504.6mm，5um）手性色谱柱。用峰面积归一化法计算，对映异构体含量应不大于1.0。具体方法参见资料10中 “对映异构体”项。盐酸帕洛诺司琼样品光学纯度：含量 99.0%，以上检测证明盐酸帕洛诺司琼样品20040705的光学纯度和绝对构型与文献报道相符，样品20040705与盐酸帕洛诺司琼相符。？9.3.2、元素分析测试单位：中国药科大学分析测试中心仪器：Elementa Vario EL III型元素分析仪方法：样品经燃烧分解，定量转换，检测，再经数据处理得到C、H、N的百分含量。1、元素分析报告书盐酸帕洛诺司琼样品的元素分析报告书见附图?。2、元素分析测定数据表1. 盐酸帕洛诺司琼样品（20040705）的元素分析结果测试元素CHN理论计算值（）68.567.578.42实测值（）第一次第二次平均值3、元素分析数据分析和结论测定结果表明，盐酸帕洛诺司琼样品（20040705）的C、H、N含量实测平均值与理论计算值误差均小于0.3%。由元素分析和质谱可以初步确定化合物的分子式为C19H25ClN2O。？9.3.3、紫外吸收光谱（UV）（未测定）测试单位：中国药科大学分析测试中心仪器：Perkin-Elmer Lambda 2 UV/VIS光谱仪溶剂：甲醇、0.1mol/L HCl溶液和0.1mol/L NaOH溶液供试液：盐酸帕洛诺司琼适量，分别于上述溶液中超声溶解，样品的浓度为4.49、4.21和4.30g/ml。 测定波长：200-400nm1、紫外光谱图（UV）盐酸帕洛诺司琼样品在水、0.1mol/L HCl溶液和0.1mol/L NaOH溶液中的紫外光谱图分别见附图 。2、 测定数据表2. 匹伐他汀钙样品的紫外光谱测定结果溶剂精制品对照品max (nm)maxmax (nm)max水0.1mol/L HCl溶液0.1mol/L NaOH溶液3、解析由图5-1a，5-2a，5-3a可知，样品分子在水中的最大紫外吸收在244nm处，吸收带强度（摩尔吸收率）为7.29104，证明K带的存在，即存在共轭的两个不饱和键。样品分子在NaOH水溶液的最大紫外吸收在244nm处，吸收带强度（摩尔吸收率）为7.59104，在盐酸水溶液的最大紫外吸收在248，吸收带强度（摩尔吸收率）为6.87104，表明在酸性条件下，有游离COOH。 盐酸帕洛诺司琼精制品的紫外光谱图盐酸帕洛诺司琼样品的相一致。9.3.4、红外吸收光谱（IR）测试单位： 中国药科大学分析测试中心仪器：Nicolet Impact 410型红外光谱仪仪器校正：用聚苯乙烯薄膜的红外光谱吸收峰对仪器波数进行校正（参考中国药典2000年版二部附录C）方法：KBr压片法1、 红外吸收光谱图盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）和样品（批号20040705）的红外吸收光谱图见附图？。2、 测试数据表3. 盐酸帕洛诺司琼样品的红外测定结果吸收峰波数（cm-1）吸收峰强度基团和振动类型解析样品精制品文献值 JOC,42, 1329,19773440.10中VH-Cl盐酸盐活波氢的伸缩振动吸收峰。更可能是水峰。 所以建议删除此行。2928.87、2899.63中VC-H亚甲基、次甲基C-H伸缩振动2592.25中VN-H叔胺盐的NH伸缩振动吸收峰2468.96中V-H胺盐的伸缩振动吸收峰. 建议此行删除1647.11强VC=O酰胺的羰基的伸缩振动吸收峰1589.68、1477.20中VC=C苯环的CC伸缩振动的特征吸收峰1447.22、1322.421302.75 此二峰不是， 建议删除中C-H次甲基、亚甲基C-H的弯曲振动吸收峰1407.96中VCN酰胺CN单键伸缩振动的吸收峰1322.421155.88中弱VCNCN单键伸缩振动的吸收峰768.00、620.46弱、中C-H1,2,3 取代苯环的C-H弯曲振动的特征吸收峰3 红外吸收光谱数据解析a盐酸帕洛诺司琼样品20040705红外吸收峰2592.25cm-1，1322.421155.8cm-1，是叔胺盐酸盐的N-H和C-N伸缩振动, 证明结构中含叔胺的盐酸盐。b样品的红外吸收峰2928.87、2899.63、1447.22cm-1， 证明结构中含包含有亚甲基、次甲基。c1589.68、1477.20cm-1为苯环骨架C=C伸缩振动特征吸收峰； 768.00cm-1、620.46为1,2,3取代苯环C-H的弯曲振动吸收峰，证明样品结构中有1,2,3取代苯环。d1647.11, 1407.96 cm-1：为酰胺羰基和CN单键伸缩振动的吸收峰。由红外光谱可知，盐酸帕洛诺司琼样品20040705结构中含有酰胺基、1,2,3取代苯环、叔胺盐酸盐以及烷烃。盐酸帕洛诺司琼样品20040705红外光谱数据与盐酸帕洛诺司琼结构相符。9.3.5、核磁共振谱（NMR）测试单位： 中国药科大学分析测试中心仪器：BRUKER AV-500 型核磁共振仪溶剂： DMSO-d6，内标：TMS9.3.5.1.1 1H-NMR谱图盐酸帕洛诺司琼精制品（20040707）的氢谱、重水交换谱和样品（20040705）的氢谱、重水交换谱、H-HCOSY谱分别见附图?。以上编号不合适， 碳和氢应该使用相同编号,如下：9.3.5.1.2 测试数据表4：氢谱测试数据化学位移（ppm）质子数峰形归 属相关质子备 注样品文献值JMC1.24-1.311.30(bq)1mH31.63-1.721.60-2.15(m, 7H)1mH41.72-1.851mH151.85-1.962mH121.96-2.042mH4,H152.04-2.091mH32.192.22(m)1bdH11J2.12.71-2.862.70-2.94(m)2mH5 2.98-3.033.04(m)1mH33.15-3.273.15-3.30(m)4m1H2,1H13,2H163.44-3.493.56(m)2mH13、H143. 60-3.653.64(m)1mH143.78-3.813.80(dd)1dd H2b J4.8J11.84.76-4.794.8(m)1tH10H3.63, H3.46J8.77.24-7.307.26(m)2mH6、H7H87.70-7.717.72(dd)1dH8H6、H7J6.611.0810.9(bs)1sHCI 重水交换后消失 a, H在平面下方；b, H在平面上方9.3.5.1.3 图谱解析 1H-NMR给出18组峰，积分比（由低场至高场）为1：1：2：1：1：1：2：4：1：1：1：1：1：2：2：1：1：1，共有25个氢质子，与盐酸帕洛诺司琼结构相符。根据化学位移，偶合常数值及1H-1H COSY谱氢质子归属如下： a, 11.08是一宽峰,相当于1个质子,重水交换后消失,为胺盐质子; b, 7.70-7.71为双峰，相当于1个质子，7.30-7.24为多重峰，相当于2个质子，两组峰氢氢相关，根据化学位移分别归属为苯环上的8位和6,7位质子； c，4.76-4.79为三重峰，相当于1个质子，结合碳谱，归属为H10; d, 3.81-3.78是dd峰，相当于1个质子，在HMBC中与C3和C9相关, 归属为H2b;结合HSQC确定C2的位移值是48.08 ppm，另一个2位氢质子H2a归属为3.15-3.27； e, 3.60-3.65是m峰，相当于1个质子，在HMBC与C10远程相关,为H14, 3.44-3.49与3.60-3.65都与C14在HMBC中相关，归属为另一个H14; f, 3.15-3.27,3.44-3.49为两组m峰，与C13,C16相关，归属为H13,H16; g,2.98-3.03,2.19分别是双峰和多重峰，各相当于1个质子，结合碳谱与HSQC, 归属为H3； h, 2.71-2.86是m峰，相当于2个质子，在HMBC中与C6相关, 归属为H5; i, 2.04-2.09，1.24-1.31是两组m峰，相当于1个质子，在HSQC中与C3相关, 归属为H3; j, 1.85-1.96是m峰，相当于2个质子，在HMBC与C10远程相关,为H12 k, 1.63-1.72,1.72-1.85,1.96-2.04为多重峰，分别相当于1，1，2个质子，根据HMBC归属为H4,H15和另外两个位于4，15位的氢质子。 所有氢质子一一归属，证明样品（20040705）结构与盐酸帕洛诺司琼相符。9.3.5.2.1 13C-NMR谱图 盐酸帕洛诺司琼精制品(20040707）碳谱和样品（20040705）的碳谱、DEPT谱、HSQC谱和HMBC谱分别见附图?9.3.5.2.2 13C-NMR谱图数据表5. 碳谱测试数据化学位移(ppm)碳类型C数归属HSQCHMBC备注实测值文献值219.0119.4仲1C15H10,H1221.5921.6仲1C4H5,H3 23.6223.6仲1C12H12H1124.7125.3叔1C11H11H1025.5325.8仲1C3H3H527.7627.8仲1C5H5,534.5634.7叔1C3H3H2/H345.1245.7仲1C13H13H14,11,1245.2745.8仲1C16H16H1448.0849.2仲1C2H248.7449.2叔1C10H10H11,12,1449.0349.3仲1C14H14125.51125.8叔1C8H8126.44136.5叔1C6H6/7H6/7128.55128.1季1C6/H6/7,132.40132.5叔1C7H6/7H8135.00134.8季1C6/H6/7,5137.68136.8季1C9/H8, 6/7,2165.10165.9季1C9H10,29.3.5.2.3 13C-NMR谱图的解析13CNMR谱图中除溶剂峰外有19个碳峰，由DEPT谱可知样品和精制品分子中有9个仲碳，4个季C，6个叔C，与盐酸帕洛诺司琼结构式相符。根据化学位移，C-H COSY谱图，C-H远程相关图谱归属如下：a 165.10ppm处有一个羰基季C碳原子信号，为酰胺碳原子，归属为C9；b 137.68ppm处有一个苯环季C碳原子信号，与H8远程相关，归属为C9；c 135.00,128.55 ppm处有2个苯环季C碳原子信号，均与H6/7远程相关，但前者与H5远程相关，分别归属为C6，C6；d 132.40 ppm处有1个苯环叔C碳原子信号，与H6/7相关，与H8远程相关，归属为C7；e, 126.44 ppm处有1个苯环叔C碳原子信号，与H6/7相关，与H6/7远程相关，归属为C6；f, 125.51 ppm处有1个苯环叔C碳原子信号，与H8相关，归属为C8；g, 48.74,34.56,24.71 ppm处各有1个叔C碳原子信号，根据化学位移和48.74,34.56 ppm分别远程相关H11,12,14；H2,3，归属为分子中的三个烷基叔碳C10，C3, C11；h, 49.03 ppm处有1个仲C碳原子信号，与H10相关，归属为C14；i, 48.08 ppm处有1个仲C碳原子信号，与H2相关，归属为C2； j, 45.12,45.27 ppm处有2个仲C碳原子信号，分别与H14，12，11和H14远程相关，归属为C13和C16；k, 27.76 ppm处有1个仲C碳原子信号，与H5相关，归属为C5；l. 25.53 ppm处有仲C碳原子信号，与H3相关，H5远程相关，归属为C3；m. 23.62 ppm处有仲C碳原子信号，与H12相关,H11远程相关，归属为C12；n, 21.60,19.01 ppm处有2个仲C碳原子信号，分别与H3，5和H10,H12远程相关，归属为C4和C15；所有碳原子一一归属，证明样品（20040705）结构与盐酸帕洛诺司琼相符。9.3.6、质谱（MS）测试单位：中国药科大学分析测试中心仪器：AGILENT 1100 LC/MS 质谱仪 溶剂：甲醇离子化方式：ESI(+)，100V9.3.6.1 质谱图盐酸帕洛诺司琼精制品(批号20040707)和样品(批号20040705)的质谱图见附图8-1, 8-2。9.3.6.2 测试数据表6. 盐酸帕洛诺司琼精制品和样品的质谱测定结果质荷比(m/z)相对丰度备注297.1100M+H298.215.6M+2319.24.0M+Na9.3.6.3 解析质谱图中的M+H和M+Na峰的质荷比分别为297.1和298.2，与盐酸帕洛诺司琼游离胺的分子量一致。？9.3.7、差热分析（DSC）测试单位：中国药科大学分析测试中心仪器：NETZSCH DSC 204型差热分析仪温度范围：30-350升温速率：10/min？9.3.7.1 DSC曲线图盐酸帕洛诺司琼精制品(批号20040707)和样品(批号20040705)的DSC曲线图见附图9-1，9-2。9.3.7.2 测试结果和解析由图DSC图可知，盐酸帕洛诺司琼精制品和样品的DSC图中有二个尖锐的主峰，本品在50-270之间缓慢的吸热，在300320有一吸热峰，开始温度分别为307.5和307.4。？9.3.8、热重分析（TG）测试单位：中国药科大学分析测试中心仪器：NETZSCH TG 209型热重分析仪温度范围：30-350 升温速率：10/min9.3.7.1 TG曲线图盐酸帕洛诺司琼精制品和样品的TG曲线图见附图10-1，10-2。9.3.7.2 测定结果和解析由图101可知, 样品随着温度的升高,有很少量的热重现象,从50到250,失重为2 ,但样品在温度300开试急剧降低重量,表明样品快速分解。因此，普通方法测定熔点在溶解前样品就会分解，难于测定准确的熔点与文献相符。提法不太准确。9.3.8、粉末X-射线衍射测试单位：南京大学现代分析中心仪器：瑞士 xTRA X射线衍射仪测试条件：靶型铜靶，管压40kv，管流40mA；起始角6，终止角50；扫描速度10；重复次数1；步长02；狭缝2/4/0.5/0.2。9.3.8.1 X-射线衍射图盐酸帕洛诺司琼精制品和样品的X-射线衍射图分别见附图11-1，11-2。9.3.8.2 样品测定结果和解析序号2qd值相对强度序号2qd值相对强度412.986.815381119.944.44999614.166.249721423.163.83740917.505.064291927.503.241261018.404.818482131.642.82635由图11-1，11-2可知，本品为结晶性粉末。94、综合解析1、质谱图中的M+H和M+Na峰的质荷比分别为297.1和319.2，与盐酸帕洛诺司琼游离胺的分子量一致，其分子量为偶数，盐酸帕洛诺司琼游离胺分子中应含偶数个N原子，这与盐酸帕洛诺司琼游离胺结构相符。结合元素分析结果本品的元素组成为C19H25ClN2O，即为盐酸帕洛诺司琼。2、样品分子在水中的最大紫外吸收在 nm处，吸收带强度（摩尔吸收率）为 104，证明K带的存在，即存在共轭的两个不饱和键。样品分子在NaOH水溶液的最大紫外吸收在244nm处，吸收带强度（摩尔吸收率）为7.59104，在盐酸水溶液的最大紫外吸收在248，吸收带强度（摩尔吸收率）为6.87104。 3、3440.10cm-1：宽吸收峰，胺的盐酸盐的伸缩振动吸收峰。说明本品结构中可能包含胺的盐酸盐结构。2928.87、2899.63cm-1：较强的吸收峰，为亚甲基和次甲基的伸缩振动吸收峰。说明本品结构中可能包含有亚甲基、次甲基的结构。1589.68、1477.20cm-1：中等强度吸收峰，为苯环骨架C=C伸缩振动特征吸收峰；818.19、768.00cm-1：为苯环C-H的弯曲振动吸收峰，证明本品结构中有苯环的结构存在。2592.25cm-1：中等吸收峰，为Cl-N伸缩振动，说明本品结构中可能含有胺的盐酸盐结构。1407.96 cm-1：可能为酰胺CN单键伸缩振动的吸收峰。总之，由红外光谱可知，本品结构中含有羰基、苯环、饱和烃基、胺盐酸盐的结构，可能含有酰胺、胺的结构。 4、1H-NMR给出18组峰，3.30为水峰，未加以积分，其他18组峰的积分比（由低场至高场）为1：1：1：2：2：1：1：1：1：1：4：2：1：1：1：2：1：1，共计25个氢；1.238912.08738(8H)之间8个氢，是未与N相连的亚甲基氢的化学位移；2.187043.03045(4H)是3个与苯环相连的亚甲基、次甲基及桥头CH氢的化学位移；3.150077.371037是3个芳香氢原子的化学位移；11.0796是盐酸盐活波氢化学位移，与结构式相符和。由13CNMR谱可知图中除溶剂峰外有19碳原子，由DEPT谱结合分子式可以知道分子中有9个仲碳C，4个季C，6个叔C，共计19个碳原子。1050为12个饱和C的化学位移，110150为6不饱和C的化学位移，165.0为CO碳原子的化学位移。结合H-HCOSY谱、HSQC以及HMBC谱等图谱证明分子结构与盐酸帕洛诺司琼相一致。5、旋光分析结果 与文献syn报道结果一致，进一步确证样品的构型与盐酸帕洛诺司琼相符。结合合成路线（见8号资料），通过上述元素分析和各种图谱的测定，综合图谱解析结果，样品与文献报道的盐酸帕洛诺司琼的化学结构式、分子量、化学名称、绝对构型均相同。综上所述完全可确证样品为盐酸帕洛诺司琼。五、参考文献1 JMedChem，1993，36，26452657。2 Synthesis，1996，816818。附图：图1-1a 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040705）的旋光测定报告图1-1b 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040705）的旋光测定报告图1-1c 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040705）的旋光测定报告图1-1d 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）的旋光测定报告图2-1 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040705）的元素分析报告图5-1a 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）在水溶液的紫外光谱图图5-1b 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）在水溶液的紫外光谱图图5-2a 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040705）在0.1mol/L HCl溶液的紫外光谱图图5-2b 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）在0.1mol/L HCl溶液的紫外光谱图图5-3a 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040705）在0.1mol/LNaOH溶液的紫外光谱图图5-3b 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）在0.1mol/LNaOH溶液的紫外光谱图图6-1 盐酸帕洛诺司琼红外吸收光谱的校正谱图6-2 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）的红外吸收光谱图图6-3 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040705）的红外吸收光谱图图6-4 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040710）的红外吸收光谱图图6-5 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040715）的红外吸收光谱图图6-6 盐酸帕洛诺司琼样品（批号041201）的红外吸收光谱图图6-7 盐酸帕洛诺司琼样品（批号041202）的红外吸收光谱图图6-8 盐酸帕洛诺司琼样品（批号041203）的红外吸收光谱图图7-1 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）核磁共振氢谱图7-1a 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）核磁共振氢谱扩展谱图图7-1b 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）核磁共振氢谱扩展谱图图7-2 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）核磁共振重水交换氢谱图7-2a 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）核磁共振重水交换氢谱扩展谱图图7-2b 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）核磁共振重水交换氢谱扩展谱图图7-3 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）核磁共振碳谱 图7-3a 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）核磁共振碳谱扩展谱图图7-3b 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）核磁共振碳谱扩展谱图图7-3c 盐酸帕洛诺司琼精制品（批号20040707）核磁共振碳谱扩展谱图图7-4 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040705）核磁共振氢谱图7-4a 盐酸帕洛诺司琼样品（批号20040705）核磁共