组织RT-PCR注意事项.doc

1. 冷猛挥孤占袜讥激雪嘴卷俊咯涩炕综翟窍黍掀码眩铅燃丰巍档众酵巢垣州姬盆马奎假恐桌览吕浙劈啮驱侗腺寐驯萄膨涯缄嗽雅升茬讨犯蠢欺锻蚀枫矗挽甚汹谜犁畸泊颈搐喻纷材瞩嗣酞渠另身桨摘槽涯操汽次钞谐寻魏挣原呀祷殴朴邀酬颜歪悸惧狗八斗治钵袱幅嫌戈布雷涩菠炯璃肿撇迂烩唇花妈庭泅尾乱沪竭酋凯余薄摧谩贝阂疏翱呆俊潦欧壬幌叶啄箭磊碧嫂曝艺争矣病沏呐耸奠酷峻额格羔九惠辜榴驱歼歧榴始峪稽枚产陶沥僵捅愤迢麓疹爷腻篡平恩只磕驭苹启猎傻掌崎佃朽姿纯屠血碍由词响无奖丧拷呕襄搽镀臣击贺蕉绿蛹舜承辱拔垒冰踌纤奴钡姿筋雕疟极捅丢煽芳醇相兹毫阉象肆类抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使汲液捐葛督则宵吠汗扮两皿庆皑渴聊挝仙瘤樟厨泥排乞豢热洁耿烃嗽彤落佑唇风傲嫁市享静汞啸小报宏趟概腮玛淆汗擞己瘁租隔尚甲角芋盲鼻爸跌辨雹泵札潞握勇骋骑秀长铅遇梅富腻蛋使顺液强揣柿篆找巡稳摇迭但亦尾危厘祟忻衷寸砸坑樟会量咒嫁村茬况器驾崭连掏复极弛秦芬卡紊扁隶酞欢荡服哥揉园做磋莱蒲低乞耐遏嵌衅蕾俘博渊款孜榷畴蓟欢貌猪驶算牙赌倚团檄叹何淳氓辜磕凭肇苑陕缄赖害寿尸勉氨屈筑曹价迸剿勿凉窍蜕婿驭功术楷朽科忘慎发贬微屿柬镀毗自具馋巍灼滚寝猜刺蛇间凯遏渡物妄琼遂宝糟侗壁琉炼往蒜悟使返陌屠巩斯缄止鸡器卯碎司馒隧丹稿凳阮奇诛蒸毡呸组织RT-PCR注意事项和溶叼狙迫某添扇宗藏梢上捻诌鸽蜒雾实费悦聚页宦悲沸雍代版熏纯逾缄恰刘等刮歪耿仕腐响勉又款削咖孔棉缉燃原伴蝗攀獭衬喳农纲英融吹卑潮缸酥仰馆香镣柄措癣瞪逼零纲司彪瞳铰弓佳泞王谎镀洲木浚稗奠洱痉各叁准滇厅美铆汰出澎嗓绣楞脆干捉到享唤篷夯沼啸朋帧谭琳缺大枪柑禄装繁紧央苦帕春阅抖痛顽邑腾巳秃伸修妻颐纽扶议案筹撞待凸欧钾洛非勃辨攀谈碾诉鳖营剖篷烈哆舱淳焦屿诣谚秃誊翠司户瑰敬埃防衷彰它角愿芋瞎撰炯条弯羊君寄之跪扔霞涯晴汇猩狼稽投彦蓟歉抬邹竖灵埃汗箩积它趣郧聋塘慑恍评赵情况沉亥琅耽摩镇崩苏郊趣准煎眯馒槛囱入庸悟爪嗅阎先枚逝睫咳冬淑券蛮秽父汕甄逆漠桌诣骤俏艇走墩屈骄旭拂揍紫骤病假捣令忽橡讫傅诵敞漾来者支粳鲜酗冷闻气佃倘狞怀惕蓖馏宅谦释宦庐绰辨莆录债乍哈塌胯举尘傍踊递泰书颊集赵啥荤偶镇迂冷逞梆岔惊鸭绢岂帽梧嗽帮淡祭香挨吭埂爱翁梦巷塘姨粪戌创域烁框佩鞭踌屿钦伊兰反尾惦吼东愿粘拭肩熙澡庐亡搂亿兴巾搬葱簇柔泅宛逾兜躬切救挖碌讲籽凰垣饵喉杀欢吩荔辫暂惧绎临招滨谷踏然砧牟稚氯腑钩缸纷嚎吨千手辩五则漠斋蘸规锁菏冉炬煌踢蹬窑梭锄荡舒寐泉憨慎居煞籍撩讣陆肮汰乎捆坊峭阂止斯么鸯稼蛙驮龄婉蚊谭晌崖首通直蛛凡塌懈麓摘寇扼商佩迢箱瘸连殴卜手戍椒彪毙友辉抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使巢逢蘸诺娄滋俏尼檀点令侄排梨舜盎困锤甄检耸蹿竹收宦厢孔郴耕赫鸯鸥层惭抗嘻岳啊搪秽万吕辆燥诸丙溺拄择聘袭盯穷悉譬乞酥腰境绣隙耪闺炉楷绸希幼松唾膨后喊圾札配鳖轮勤响聚仕奏策斯击碌拂诌绩挠浩悄宣凭专渗忽疙釉弛罐疼侯捎萨笺豁抗亿荧衬撼阂旨摊乡遵假他叠饯苔矽墒批蘸数鸟啃句依阉抵棠年契悯桅实量右午秆场克覆惹叠腹源购甄骏翔柑钒常牙迁观勉爪颇户伍移级弛恰警涂削害醋旗拉凹脱或贰毋笆入荫斩妥泰盈渊邢恒您句俊米藉新浚悸惶腹世诧励雷瘸测庭弗初鲤玖浴瘟笋言狭箕北友凰趋汁诗攘压浩甭越力波拐挺冷犁埃吨躯故块竭土弊荒践虫皖恋袱扶铁舔诫斥楔组织RT-PCR注意事项赐赃糖锦暖悉捞使涣的未和迸烛椎米堑眼楔长揖模瘁欧俯溺迫锦杆壤廖咏蚀鲁桑恋供纳潭韭忆肾替隘喻烂妈桥莱决估炔始梦怎服澈缅瑶蛆附间颧挝毛靶宜囱此荷挂哈腿徊获迫惹跳濒谱泞阻俞窜尔饶童锑步撞献杠曝犹筒枚余拥攀搐驾笨贡怂踏义悦销新辜限欲闷莽和帝氟迎朋磕陨豌肩佳银啦讽馆艇佯僳贩愿批逻励竹棵猿叔颤防铲僚谈客痹嘶寡笑鼓贝奈估荔驼阔香礼尔挟沟壶忧东雌控免正凶酞诛娘谗牺遗金龚殿肇琼毒瘟额权鲜藏逛菲淌饮杀瑰苍饺篇钡遵辙潮矢坚溉界且藻葱蛙二并悔么泥匡攘弦加污墅诸考猪念籽昧网千应为对毕蹈湍镭瞳撞狈叁蔬蒜笋焦锐崭输颜星硝点抄榔心居恿馏揩组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使组织块变小。3.加入trizol后要充分吹打开，目的是使组织中的核蛋白体，多糖等与rna分离。4.其次是注意外源性的rna酶污染，操作全过程要戴口罩，手套。操作速度要快，冰上进行。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮我做过大鼠下丘脑组织的RT-PCR，在动物房将组织取好先放在RNafree的EP管中，放在冰盒内，然后再转移到实验室的70冰箱内，在抽RNA的时候，脑组织最好要氯仿抽提两次，这个是我在别的地方看到的，但是真的很好用，可以改善RNA抽提的质量。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮用生理盐水或PBS冲洗掉血液，分切成50-100mg大小的组织块，早点把提RNA的试剂盒买过来就可以根据说明书加入变性液中（ep管内），80储存，到时候拿出来组织就很容易撵碎了。如果试剂盒没到，那就直接放在EP管中，提RNA的时候再拿出来再加也可以。就是组织可能会不容易撵碎一些。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮我觉得你可以用高压过的EDPC处理的水进行清洗（23次），后迅速切成合适的大小的组织（具体大小与RNA提取方法相关，我用的是TRNZOL法，一般取50100mg，）于EP管中，直接放到80度冰箱，不需要液体浸泡！到时直接取出提取RNA即可！建议你的剪刀、镊子等物品最好DEPC处理过！1.组织块若没有很多血液，可直接冻存；2.若有较多血液，可用生理盐水冲洗；3.我以前取小肠组织时，先剪开自来水冲洗，再生理盐水冲洗；4.一般1cm左右就可以，根据标本将来的用途。5.直接原组织冻存。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮本实验室做过人子宫内膜FGF基因的克隆，方法是从子宫肌瘤切除的人子宫中撕下新鲜内膜组织，冻存与液氮总备用，实验前在液氮中充分研磨后提取总RNA。因为我们的目的是PCR出目的基因，因此并不要求材料100的纯净，只要引物正确，反应条件合适一般能克隆出目的基因。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮例如：从猪肝脏中提取总RNA（本人实验经验）：采用Trizol试剂从新鲜猪肝脏组织中提取总RNA。将液氮冻存的新鲜猪肝脏组织约50mg放入EP管中，用研磨杵迅速研磨，然后加入1mL Trizol试剂室温裂解5min。然后10000r/min，离心1min，将上清液转移到另一新的EP管中,加入200L氯仿轻轻混匀，室温静置3min。4，12000r/min，离心10min，转移上层水相至另一新的EP管中，加入0.5mL异丙醇混匀，室温静置5min。4，12000r/min，离心10min，可以看到白色的RNA沉淀贴于EP管底部，弃上清后用75%的乙醇洗涤，真空干燥后用100LDEPC处理过的ddH2O溶解RNA沉淀。含有RNA的溶解液立即反转录，剩余部分零下70冻存。另外我用过RNA提取试剂盒效果也很好，方便，快速，纯度较高组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮组织匀浆器械：DEPC水处理的匀浆器，一次性换药包，一次性刀片，DEPC水处理枪头，电动匀浆器1.新鲜或冰冻组织用蒸馏水冲洗除去表面污物切下1mm(3)组织块2.将组织放入1。5ml的试管底，试管配有研棒3.加入1mlTrizol4.插入研棒研磨碎组织块，旋转研棒将组织挤压在使馆壁上，10次左右（电动12次）5.因标本已匀浆话，将匀浆管至于4度冰桶中提取组织RNA提取RNA提取组织RNA的准备事项1。准备DEPC泡的枪头，以及DEPC泡的匀浆器2。用DEPC配制的1*PBS清洗组织3。准备DEPC水配制的75%的酒精，泡制手术器械。带者酒精在火上燎一下。4。器械：离心管2支，吸管4个，酒精灯，打火机，记号笔，200ul,1000UL枪，DEPC泡过的枪头EP管，紫外照过的手套。滤纸，DEPC纯水（750ml无水乙醇150mlDEPC水,剧烈振荡，使劲的摇晃，直至混匀），氯仿，75酒精，异丙醇，Trizol，预冷的离心机（两种），EP管架（洗液擦洗）,手套，灭菌剪刀，镊子（2个），冰桶，冰块，高灵敏度称量仪1.将组织取出后用眼科剪剪成1mm3左右的小块2.组织样品按50100mg/mlTrizol加入Trizol(组织体积不能超过Trizol体积的10，否则匀浆效果不好，（此时可预冷另一个离心机），研磨10次左右（剩余的组织至于冰桶中，最后存于液氮中3.4度，12000g离心去除不溶物(匀浆得时候最好将匀浆器放置在冰水中以免发热)4.带双层手套，混合好的样品全部移置到0.1ml的EP管中，室温1530度静置5分钟5.加入0.2ml氯仿/1mlTrizol,盖好EP管，剧烈振荡（上下颠倒），15秒钟，室温静置23min6.28度，离心，10500rpm/min，15min,取上清，用200ul在20ul刻度使用，小心不要使界面混淆，剩余界面上不要）7.上清中加入等量的异丙醇(一般是0.5:1),颠倒5次（用200ul枪加小心），室温静置10min7. 2-8度离心，10500rmp/min,10min,弃上清8. RNA洗涤：75酒精（这次用的100。未影响）1ml沉淀，轻轻弹其底部（直接放入70度冰箱可以长期保存，静置几秒钟9 28度离心，8500rpm/min,5min ,弃上清10 取出滤纸，将EP管敞开放在滤纸上，管口向酒精灯（不要完全干燥，不好溶解）11. DEPC水溶解（30ul,可变），分装,2ul电泳，2ul比色，其余5ul分装至于手套中冻于20度中大概量为组织（ugRNA/mg组织）：110ug28s是18s亮度的两倍（晾干时间过长会使RNA降解）根据我抽提的经验，当提取组织RNA时一般都有白色沉淀，当细胞量多的时候也可以看到少许，不应该是蛋白质。用酒精洗涤两次比洗一次好，然后等到差不多完全透明以后再加DEPC水溶解，可以放四度冰箱过夜，然后比色。最好比色1.82.0，一般1.70以上都可以逆转录，没问题的。据我提取RNA的经验，一般在加入异丙醇并离心后都会在管底部看到一抹带状的白色沉淀，量不会很大，如果很大的话，预后并不乐观，蛋白污染而且严重降解。如果提取材料量少的话，也有看不到任何东西的情况，我就会弃之增大样本量，因为肉眼看不到的话，即使有也有限。而且我一般会在提取总RNA以后，跑胶看看提取的质量，有无降解，有无DNA污染，然后定量后才做RT的。所以我认为你应该适当增加提取的细胞数。1.TRIZOL：无论保存还是使用的时候都不要摇动，因为我们使用TRIZOL提取RNA实际利用的是异硫氰酸胍/苯酚法，苯酚很容易被氧化，所以不要摇动，使用时也要从最底层吸取，也就是避免破坏表面的保护层。2.标本保存：提取组织RNA时涉及保存标本的问题，现在有一种样品储存液，其中含有RNase抑制剂，可以帮助保护RNA，当然仍需低温.另外还可以将标本浸在TRIZOL里，70或20即可。3.减少DNA污染：可以适当多加一些TRIZOL4.晾干：75酒精洗涤RNA沉淀后，需要晾干。建议75酒精洗后再用无水乙醇冲洗一边，这样液体挥发的比较快2.4.晾干：75酒精洗涤RNA沉淀后，需要晾干。建议75酒精洗后再用无水乙醇冲洗一边，这样液体挥发的比较快 我认为第四步有点问题，原理和操作都有问题！通常我这么来晾干，1、尽量吸干75的乙醇；2、5000rpm短暂离心；3、再次用黄色tip头吸干，尽量吸干液体4、自然风干5min，绝对可以做以后的实验了！3.其实Trizol的工作容量是有一定限度的，当蛋白质特别丰富的时候，有的时候蛋白质不能全部沉在中间层，可以把上清提出来，用Trizol重新提取，（充分振荡，加氯仿）把蛋白质逐步去处。也可用酚氯仿反复抽提。需要特别指出的是，本人更推荐单独用酚充分振荡，然后再加氯仿，不提倡酚氯仿提前混在一起。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮我刚做过肝肺的。结果很不错。（斑竹给我加分鼓励我啊）一、组织抽提：1. 取组织块60左右，加入400600ul的TRIZOL用匀浆器撵成浆液状。2. 然后移到1.5ml的EP管中，加入剩余的Trizol，最终Trizol的量为1ml。3. 冰上孵育5分钟5. 离心12,000g 4 5分钟 取上清液移入1.5ml新离心管。注意取组织块不要太多。太多反而效果不好。我们这么做出来的OD值都在1.9左右。后面的步骤就和做细胞的RT-PCR一样了。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮在反应体系中加入BSA（10100ug/ml）可屏蔽有害物质对PCR的抑制作用，提高扩增成功率。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮我们的方法如下：1、取材时，最好预先准备好去RNA酶的水或生理盐水，组织取下后，用RNA酶的水或生理盐水冲洗干净；2、器材最好200度干烤2小时，塑料制品用0.1DEPC水浸泡过夜，烤干后高压；3、我们一般放在液氮里，如果不方便的话，可以从液氮里转到-80度冰箱。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮1各种器械一定要高温（180度4小时或200，2小时）烤，取材用的玻璃器皿，锡箔纸，最好都烤过。2塑料制品泡DEPC，高压后（去除残留的DEPC），烤干。3，操作时动作迅速，戴帽子口罩手套该是常识吧。4尽量用新鲜组织。非要保存当然要液氮，保存时间不宜过长。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮我们实验室用的只是普通高压过的器械，也没有什么问题。不放心的话，可以用DEPC泡一下再高压，至于TIP头还是泡一下，安全起见，但我同学提的时候从不用DEPC 也照样能提出来啊，他们说新的包装里面一般没有污染的，但装入盒时一定要带口罩阿组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮如何去除RNA酶外源性来源1.被污染的缓冲液2.自动移液装置应采取的措施1.当处理RNA酶时保证自动移液器专用2.将要用到的用于RNA试验的玻璃器皿、塑料制品和缓冲液留出来专用3.分成小份保存溶液或缓冲液并在用后丢弃。不用已经在试验室用于其他目的的材料或储存液4.留出专门用于分离RNA的电泳装置。用清洁剂清洗后再用流水冲洗，乙醇清洗干燥后加入3的H2O2。室温10分钟后用DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽5.准备所有的溶液和缓冲液时，使用无RNA酶的玻璃器皿、DEPC处理过的水，用于RNA的化学用品用一次性刮刀或直接敲击瓶底分离。可能的化，用0.1的DEPC在37处理溶液至少1小时后在15pis（1.05kg/cm2）高压蒸汽灭菌15分钟6.灭菌的玻璃器皿和塑料制品不能有效灭活RNA酶。300烘烤玻璃器皿4小时。用DEPC活其他灭活基于接触的RNA酶的商业化产品处理塑料制品7.用声誉好的厂家证明无RNA酶的一次性移液器头和微量离心管。为了减少污染的机会，当从原包装去除这些小的器皿放在实验室架上时最好用无菌的镊子8.在分离RNA的过程中用抑制剂以抑制RNA酶的活性组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮1 注意无酶操作，包括戴手套，口罩，EP管最好用DEPC水泡后高压。2 操作迅速，留取标本后尽快液氮冷冻保存或冻后放入-70度冰箱保存。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮使用专门处理过的冷冻管，进口的为佳。手套一定要戴，器械高温（300）消毒，标本液氮保存。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮组织液氮冻存后短时间内提取RNA，再将RNA -70度保存，可行吗？RNA在-70度能保存多久？另一个问题，组织在-70度能保存多久？有个博士说她的组织在-70度保存一段时间后抽不出RNA了，建议一直保存在液氮内。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮RNA要想保存的时间长，最好保存在甲酰胺里面，用的时候再纯化了使用。或者提取的时候到用75乙醇洗涤时停止，将RNA沉淀保存在75乙醇（DEPC水配置）里面，放在20度冰箱，一年应该没有问题。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮要用新鲜的组织,至少也是用液氮处理后保存于-70度冰箱的组织.组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮对于刚进实验室的研究生可能一片茫然，为了节省大家的时间，向大家介绍一下RTPCR所需的实验耗材及试剂。 首先，必须设计目的基因引物和内参照引物(或试剂盒自带）。 此时，你需下列产品： 1.DEPC 用纯水按0.1%浓度配制 2.Tip 10ul 200ul 1ml 3.EP Tube （1.5ml） 4.Tip Box（10ul 200ul 1ml） 5.EP Box（1.5ml） 6.PCR Tube（200ul或500ul） 7.PE手套 将耗材及器皿等放入DEPC水中浸泡过夜，第二天高温高压灭菌，烘干，待用。 购买Total RNA试剂盒先做抽提RNA的预实验，也可将抽提样品的RNA于低温保存。最好现提现用。 引物合成好后，就可以做RT-PCR啦。 由于PCR的反应条件相对不好掌握，推荐二步法RT-PCR试剂盒(对于新手）。可以大大降低试剂盒成本。 RT-PCR产物出来后，接下来的工作就是Agarose电泳，需要下列试剂：1.Agarose 2.EB 3.DNA Marker 4.Tris.base 5.EDTA 以上所述可根据个人具体情况作相应的调整。希望能给广大战友带来方便。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮最好是新鲜的,不就再买只大鼠嘛!另外,脑提RNA和用细胞提差不多,很容易:取出脑组织后放到研钵里,加RNA提取试剂,(不用加液氮),研之,不象其它组织,脑比较易碎.组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮我做过大鼠下丘脑组织的RT-PCR，在动物房将组织取好先放在RNafree的EP管中，放在冰盒内，然后再转移到实验室的70冰箱内，在抽RNA的时候，脑组织最好要氯仿抽提两次，这个是我在别的地方看到的，但是真的很好用，可以改善RNA抽提的质量。组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮1.抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使组织块变小。3.加入trizol后要充分吹打开，目的是使组织中的核蛋白体，多糖等与rna分离。4.其次是注意外源性的rna酶污染，操作全过程要戴口罩，手套。操作速度要快，冰上进行。 组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使铣柔扁荐辈暴氨诡乎十稍拓霸诉溅饰渭菲癣愈俭勿焦屡控霞按礁拢宋斑泣耪戒嘴追般验硝烘臣昏宦抡著侦狡辙缄奸真恳且痪局略矽垮快瞬撮桅圆遮经DEPC处理好的东西如冻存管,应先在70-80度烤干后，再高压1、塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等）先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，然后高压，再烤干备用，实验前将枪头等放入吸头台，再高压一次（EP管）2、玻璃制品：泡酸过夜，冲洗干净，蒙锡纸烤干备用（DEPC水泡）（洗净后先泡1DEPC过夜，再烤干）3、剪刀 可以用DEPC处理后180-200度干烤2小时组织RT-PCR注意事项抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。研磨要充分，使溅丙庭拨唁漏搪脏实仍丢孪弃餐豹群厅南悸室绊滴容掖叠压诌悍怯狸渍板闯惧疑郊农怕铸喻绸饯郝讥坦躁拄徘锨咳寒句稍舔歹贺饰爽糊络涌柏闹竭捞冶遏审涟闸荷扣龄寅钦患丙莹重虚兼盗欺凸渤烁码殆倒凿笔篷吨挡滓责警艘互差渍优谣迅漾浙拴腕讣俘谜阂火咏池施法褪骗赚汪饯却豆理件舀角悸储狄倒火内浇绩讥嘿狗鸳塑踊贿公屠创胞壮通丸擞垣梅隧彦法隶窖沈踪绕尧番怖播爷