球等鞭金藻3011的生长与其营养盐关系的研究.doc

编号：XH03JW037-11/0厦门海洋职业技术学院毕业设计（论文）题目: 球等鞭金藻3011的生长与其营养盐关系的研究系 别：生 物 系 班 级： 水 产 养 殖 技 术3081 姓 名：刘 臻 学 号：0805303023 指导教师：李 碧 全 2011年 4 月 28 日球等鞭金藻3011的生长与其营养盐关系的研究【摘要】：球等鞭金藻是一种金黄色的微小金藻，由于其个体小（直径5um左右），繁殖快，胞内营养丰富，无细胞壁，容易被动物幼虫消化吸收。目前，该藻类已经广泛的用于无饲喂贻贝，牡蛎，泥蚶等，并被认为是海产双壳类动物幼虫的理想饵料。有关球等鞭金藻培养文章很多，但营养盐方面发表还是很少的，所以对该藻类培养液的主要成分研究很重要。【关键词】：球等鞭金藻，生长，营养盐。球等鞭金藻(Isochrysis galbana)是一种分布广泛的浮游单细胞藻类，属于金藻门，金藻纲，等鞭金藻目，等鞭金藻科，等鞭金藻属，由于个体小，繁殖速度快，营养丰富，运动速度适中，又没有纤维素的细胞壁，容易被贝类幼虫捕捉，吞食和消化吸收，因而是海产经济双壳动物幼虫的良好基础饵料。有关球等鞭金藻培养文章很多，但营养盐方面发表还是很少的，所以对该藻类培养液的主要成分研究很重要。1 材料和方法1.1试验材料 球等鞭金藻(Isochrysis galbana)由宁波大学藻种室提供，试验前，先将球等鞭金藻接种到5000ml的三角烧瓶中进行一级培养，光照3000Lx左右，温度在2126，不充气培养，每天摇动搅拌6次。1.2 藻类培养的条件 培养藻类的用水取自漳浦前亭沙崎村海区的海水，经高位黑暗沉淀，再经过脱脂棉过滤，煮沸，冷却的天然海水。pH 8.5 密度1.018g/m3。培养容器都经过草酸洗涤，晾干，密封保存。1.3实验方法与设计 本实验分别对球等鞭金藻3011的生长进行了 N，P，Fe，维生素B1，维生素B12，等营养成分单因子和正交实验。1.3.1 单因子实验的设计 氮的试验以 NH4Cl，（NH4）2SO4，NaNO3和（NH2）2CO作为氮源，设置6个梯度，N的质量浓度分别是0，10，20，40，60，80g/m3；磷的试验以NaH2PO4和KH2PO4作为磷源，设置6个梯度，磷的质量浓度分别是0，0.1，0.5，1，2，4g/m3；铁的试验以柠檬酸铁作为铁源，设置6个梯度，其的质量浓度为0，0.05，0.1，0.2，0.4，0.8 g/m3。1.3.2 正交实验设计每个试验分别进行平行试验，重复2组。试验结果采用血球计数板计数，藻液用少许福尔马林固定后1d内计完，每瓶计4个数，取其的平均值，所得生长率都以下面的公式计算公式为：K=（lnNt-lnNo）/ln2(t-to)。其中Nt为试验进行t天的细胞数目，No试验初始的细胞数目。 2. 结果 2.1 生长指数测定 利用等鞭金藻OA-3011培养液（陈淑芬等，1987）【1】NaNO3 60mgKH2PO4 4mg柠檬酸铁 0.5mg维生素B1 100-500ug维生素B12 0.5-1.5ug海水 1000ml接种密度为20万/ml，置于自然条件下（光照3000Lx左右，温度在2126）每日定时计数，共9d，结果见表1。并用细胞数目的对数和时间作图。表1.细胞数目的对数与时间关系培养天数/d123456789细胞数目的对数5.4475.8015.9436.0246.1066.1466.2356.250K值0.6170.9200.7730.6470.5740.5230.4690.417 图1细胞数目的对数和时间关系2.2 氮的单因子试验我们对不同的氮源的氮和不同质量含量的氮进行了试验，以NH4Cl，（NH4）2SO4，NaNO3和（NH2）2CO作为氮源，培养用水加母液（缺氮）设置6个梯度，N的质量浓度分别是0，10，20，40，60，80g/m3，数据处理见表2。 由表格表2可知，球等鞭金藻3011喜欢NaNO3这种氮源，并且以10g/m3为最好，尿素次子次之，NH4Cl，（NH4）2SO4则不能使用。表2名称？p(N)/ g/m3K值NaNO3（NH2）2CONH4Cl（NH4）2SO400.4180.0030.4180.0030.4180.0030.4180.003100.2140.0010.1960.0010.1390.0030.1370.001200.2100.0010.1580.0010.0920.0020.0930.001400.1970.0010.1200.006600.1870.0010.0930.002800.1660.0020.0600.001注：接种密度Nt=70万，自然光照，t=8d，T=22。“”表示K值为负数。2.3 磷的单因子试验我们以NaH2PO4和KH2PO4作为磷源，培养用水加母液（缺磷）设置6个梯度，P的质量浓度分别0，0.1，0.5，1，2，4g/m3，处理结果见表3，从表格表3知道，NaH2PO4和KH2PO4对球等鞭金藻的影响效果不显著。表3名称P(N)/ g/m3K值0KH2PO4NaH2PO40.1880.0010.1880.0010.10.2320.0010.2440.0010.50.2450.0010.2670.00110.2610.0010.2700.00120.2700.0010.2570.00140.2640.0010.2600.001注：接种密度Nt=70万，自然光照，t=8d，T=25。2.4 铁的单因子试验以柠檬酸铁作为铁源。培养用水加母液，设置6个梯度，其的质量浓度为0，0.05，0.1，0.2，0.4，0.8 g/m3。结果见表4。表4名称组别123456柠檬酸铁质量浓度（g/m3）00.050.10.20.40.8柠檬酸铁的K值0.0330.0010.3690.0010.3640.0020.3640.0010.3600.0030.3540.001注：接种密度Nt=38万，自然光照，t=8d，T=23。2.5 维生素试验维生素对金藻来说不可缺少，试验处理方案及结果见表5，由表格可以知道，得知，球等鞭金藻对维生素的要求以维生素B12和维生素B1混合使用为最佳。表5名称组别T0T1T2T3T4T5T6T7T8T9维生素B100.010.110000.010.11维生素B1200000.000050.00050.0050.000050.00050.005K值0.2460.0010.3170.0030.2950.0010.2460.0020.382 0.0020.4030.0020.4060.0010.405 0.0050.4290.0030.4090.001注：接种密度Nt=23万，自然光照，t=8d，T=23C0，T0T9为组号。3 结论1）根据表1得知，可以看到藻类具有一天的延缓期，从第二天就出现指数生长期，持续时间打7天，其静止期较长，说明，不易老化。2）从表2看出，4种氮源以NaNO3这种氮源效果最好，并且以10g/m3为最好，尿素次之，NH4Cl，（NH4）2SO4则不能使用。且随浓度增大，生长受阻。许多试验表明，不同种类的单胞藻能利用不同的氮源，对氮的浓度要求也不一样【2,3】。游离氮对动、植物有毒作用，在藻类培养的过程中，随着CO2被藻类吸收，使得培养液的pH升高，使NH4+易变成NH3，而使藻类有毒，从而NH4Cl，（NH4）2SO4则不能使用。3）磷的试验，从表中可以看出NaH2PO4和KH2PO4对球等鞭金藻的影响效果不显著。1 g/m3 NaH2PO4效果较好。4）铁的试验，从表中可以看出，以0.1 g/m3的柠檬酸铁效果最好。5）许多学者以证实，维生素B1和维生素B12是等鞭金藻生长发育所必须的【4,5】。Ford【6】也证明，球等鞭金藻细胞分裂速度取决于维生素B12的浓度。维生素B12对促进球等鞭金藻生长有很好的效果，与维生素B1混合使用的效果好于单用，且以维生素B1 0.1 g/m3和维生素B12 0.0005 g/m3为好。从本实验结果看出，藻类的生长初期具有一定时间的延迟期，在外界条件同样时候，藻类需要的营养盐浓度不同，对藻类的生长是不同的。相同的是，维生素B12和维生素B1一起用对藻类生长有良好效果。【参考文献】【1】 成永旭等，生物饵料培养，金藻培养液配方，球等鞭金藻AO-3011，【M】。1987，79-80。【2】 陈明耀