食品中细菌数目的测定.doc

微生物课程实习方案1、 样品的采集处理方法1.遵循的原则：第一，采集的样品要均匀一致、有代表性，能够反映被分析食品的整体组成、质量和卫生状况；第二，在采样过程中，要设法保持原有的理化指标，防止成分逸散或带入杂质。 2.采样的方法 因为本组所进行实验的材料是腐竹，属于无包装的散装样品，对于无包装的散堆样品，其取样方法如下： 一般按三层五点法进行代表性取样。首先根据一个检验单位的物料面积大小先划分若干个方块，每块为一区，每区面积不超过50cm2 。每区按上、中、下分三层，每层设中心、四角共五个点。按区按点，先上后下用取样器各取少量样品；再按四分法处理取得平均样品。2、 预计时间安排1.2011/12/1612/18:查阅资料，写好实验方案2.2011/12/19：给老师检查实验方案，并进行修改。领取实验器材，并清洗实验器材，做好准备工作。3.2011/12/2012/25：进行腐竹中酵母菌和霉菌的数目检测实验。4.2011/12/2612/30：进行腐竹中细菌的检测实验和大肠杆菌的定性实验5：预计酵母菌和霉菌大概培养5天，预计细菌大概培养3天，在这期间每天上、下午定时进行观察，并记录菌落的生长状况。三、注意事项1. 细菌的培养在三栋1052. 酵母菌的培养在三栋1083. 每次使用完高压灭菌锅和超净工作台后写明时间，组别（写组长的名字）。4. 称量样品时必须在108，即无菌室那边。5. 每个实验前应该把移液管，试管，三角瓶，以及培养皿洗好并灭菌。腐竹中酵母菌数目检测一.实验目的采取分离培养方法检测腐竹中细菌数目。二.实验器材 研钵一个，500mL量筒1个，滴定管1根，1 mL吸管4根，试管4根，玻璃棒2根，培养皿12个，500mL烧杯一个，涂抹棒1根，洗耳球1个，牛角匙2个，瓷杯1个，漏斗，橡皮管，铁夹1套，铁架台1个，电磁炉1个，天平1台，pH试纸，250mL三角烧瓶3个，标签纸2张，纱布，棉花，棉线若干，高压蒸汽灭菌锅一台，恒温培养一台，超净工作台。三.实验药品马铃薯，葡萄糖，琼脂4. 检验程序注：采用涂抹平板计数法先在每一灭菌平皿倾注15mL左右固体培养基，制成平板，做好标记，每个稀释度做3个平行，然后用无菌吸管吸取0.2mL样品稀释液对号接种在不同稀释度的琼脂培养皿上，然后分别用无菌玻璃涂布棒将稀释液涂布均匀，平放桌上20-30分钟，使稀释液渗透于培养基中，然后将培养基倒置，28培养，3天后计数。注：在酵母菌的培养期间，安排组员每天上、下午定期来进行观察菌落的生长情况，并详细记录好每次观察到的现象。五.实验步骤1、 样品的预处理及稀释1.1、 固体和半固体样品：以无菌操作取25g 样品，置盛有225 mL 无菌水的无菌研钵内，再转移至500ml烧杯中，充分振摇，即制成1:10 的样品匀液。1.2、 样品匀液的pH 值应在6.57.5 之间，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/L HCI调节。1.3、 用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1mL ，沿管壁徐徐注人盛有9 mL无菌水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管或吸头反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。1.4、 按上述操作，依次制成10 倍递增系列样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min 。1.5 、根据对样品污染状况的估计，选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），【根据对腐竹的污染情况估计可选取10-2、10-3、10-4三个稀释度】在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做3个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。（注：每个稀释度做三个平皿的好处在于有利于排除错误的平皿，单数量的平皿也有利于选取中间菌落数，防止一大一小是不好取舍，使得数据更加准确）1.6、 及时将15 mL20 mL 冷却至46 的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（可放置于46 1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。2、培养 待琼脂凝固后，将平板倒置，281培养5d，观察并记录。3、 菌落计数 肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌。以菌落形成单位（colonyorming units，CFU）表示。选取菌落数在10 CFU150 CFU 的平板，根据菌落形态计数酵母菌，为白色菌落、比细菌菌落大几倍到几十倍。菌落数应采用两个平板的平均数。4、结果与报告（1） 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。（2）若所有平板上菌落数均大于150 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。（3）若所有平板上菌落数均小于10 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。（4） 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。6. 培养基的制备马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）配方：欲配制500ml的培养基马铃薯150g、葡萄糖（或蔗糖）10g、琼脂10g、H2O 500 mL、pH 6.5。PDA培养基配制方法马铃薯（去皮、去芽眼）切成片（玉米大小）称取150g500mL H2O煮沸15-20min 双层纱布过滤取滤液并补足500mL琼脂熔化其它营养物质调节pH（用HCl或NaOH）分装试管塞上棉塞捆扎灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）制成斜面检查灭菌效果（即2830培养23d）7. 实验记录稀释度1稀释度2稀释度3培养皿1培养皿2培养皿3平均菌落数（个）预计5天完成腐竹中霉菌数目检测一.实验目的采取分离培养方法检测腐竹中细菌数目。二.实验器材 研钵一个，500mL量筒1个，滴定管1根，1 mL吸管4根，试管4根，玻璃棒2根，培养皿12个，500mL烧杯一个，涂抹棒1根，洗耳球1个，牛角匙2个，瓷杯1个，漏斗，橡皮管，铁夹1套，铁架台1个，电磁炉1个，天平1台，pH试纸，250mL三角烧瓶3个，标签纸2张，纱布，棉花，棉线若干，高压蒸汽灭菌锅一台，恒温培养一台，超净工作台。三.实验药品孟加拉红培养基，琼脂5. 检验程序注：在霉菌的培养期间，安排组员每天上、下午定期来进行观察菌落的生长情况，并详细记录好每次观察到的现象。五.实验步骤1、 样品的预处理及稀释1.1、 固体和半固体样品：以无菌操作取25g 样品，置盛有225 mL 无菌水的无菌研钵内，再转移至500ml烧杯中，充分振摇，即制成1:10 的样品匀液。1.2、 样品匀液的pH 值应在6.57.5 之间，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/L HCI调节。1.3、 用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1mL ，沿管壁徐徐注人盛有9 mL无菌水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管或吸头反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。1.4、 按上述操作，依次制成10 倍递增系列样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min 。1.5 、根据对样品污染状况的估计，选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），【根据对腐竹的污染情况估计可选取10-2、10-3、10-4三个稀释度】在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做3个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。（注：每个稀释度做三个平皿的好处在于有利于排除错误的平皿，单数量的平皿也有利于选取中间菌落数，防止一大一小是不好取舍，使得数据更加准确）1.6、 及时将15 mL20 mL 冷却至46 的孟加拉红培养基（可放置于46 1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。2、培养待琼脂凝固后，将平板倒置，281培养5d，观察并记录。7. 菌落计数 肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌。以菌落形成单位（colonyorming units，CFU）表示。 选取菌落数在10 CFU150 CFU 的平板，根据菌落形态计数霉菌，霉菌多为绒毛状、絮状、蜘蛛网状乳白色、少数为红色、为灰色菌落，有黑色孢子。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。4、 结果与报告（1） 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。（2）若所有平板上菌落数均大于150 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。（3）若所有平板上菌落数均小于10 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。（4） 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。六.培养基的制备孟加拉红培养基配方：欲配制500ml的培养基成分：蛋白胨 2.5g 葡萄糖 5g 磷酸二氢钾 0.5g 硫酸镁(MgSO47H2O) 0.25g 琼脂 10g 1/3000孟加拉红溶液 50mL 蒸馏水 500mL 氯霉素 0.05g 制法：上述各成分加入蒸馏水中溶解后，再加孟加拉红溶液。另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培养基中， 分装后，121灭菌20min。8. 实验记录稀 释 度 平板一 平板二 平板三 平均菌数（个/g） 样品中霉菌的含量（个/g）:预计5天完成腐竹中细菌数目检测一.实验目的采取分离培养方法检测腐竹中细菌数目。二.实验器材 研钵一个，500mL量筒1个，滴定管1根，1 mL吸管4根，试管4根，玻璃棒2根，培养皿12个，500mL烧杯一个，涂抹棒1根，洗耳球1个，牛角匙2个，瓷杯1个，漏斗，橡皮管，铁夹1套，铁架台1个，电磁炉1个，天平1台，pH试纸，250mL三角烧瓶3个，标签纸2张，纱布，棉花，棉线若干，高压蒸汽灭菌锅一台，恒温培养一台，超净工作台。三.实验药品 牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂四.检验程序 检 样25g （mL ）样品+ 225mL 无菌蒸馏水，均质10 倍系列稀释选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液，各取 1.0mL 分别加入无菌培养皿中每皿中加入15mL20mL牛肉膏蛋白胨培养基，混匀37 24-48h培养计数各平板菌落数 计数菌落总数 报 告注：在细菌的培养期间，安排组员每天上、下午定期来进行观察菌落的生长情况，并详细记录好每次观察到的现象。五.实验步骤1、 样品的预处理及稀释1.1、 固体和半固体样品：以无菌操作取25g 样品，置盛有225 mL 无菌水的无菌研钵内，再转移至500ml烧杯中，充分振摇，即制成1:10 的样品匀液。1.2、 样品匀液的pH 值应在6.57.5 之间，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/L HCI调节。1.3、 用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1mL ，沿管壁徐徐注人盛有9 mL无菌水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管或吸头反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。1.4、 按上述操作，依次制成10 倍递增系列样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min 。1.5 、根据对样品污染状况的估计，选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），【根据对腐竹的污染情况估计可选取10-2、10-3、10-4三个稀释度】在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做3个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。（注：每个稀释度做三个平皿的好处在于有利于排除错误的平皿，单数量的平皿也有利于选取中间菌落数，防止一大一小是不好取舍，使得数据更加准确）1.6、 及时将15 mL20 mL 冷却至46 的牛肉膏蛋白胨培养基（可放置于46 1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。2、培养2.1 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 1 培养48 h2 h。水产品30 1 培养72 h3 h。2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，按2.1 条件进行培养。3、 菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。 3.1 选取菌落数在30 CFU300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。菌落计算公式： N=C/（n1+0.1n2）d式中：N-样品中菌落数；C-平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1-第一个适宜稀释度的平板数；n2-第二个适宜稀释度的平板数；d-稀释因子（第一稀释度）。示例：稀释度 1：100（第一稀释度） 1：1000（第二稀释度）菌落数（CFU） 232，244 33，35N = C/（n1+0.1n2）d 232+244+33+35 = - 【2+（0.12）】10-2 544 = -=24727 0.022上述数据经修约后，表示为25000或2.5104（1）若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。（2）若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。（3）若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。（4）若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU300 CFU 之间，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 时，则以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。六.培养基的制备 牛肉膏蛋白胨培养基（LB）配方：欲配制500ml培养基 药品：牛肉膏 1.5g 蛋白胨 5g 氯化钠 2.5g 琼脂 10g 蒸馏水500ml PH 7.47.6 配制步骤：称量 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。 溶化 在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。 调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达76。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。 分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。 1.液体的分装，以试管高度的1/4左右为宜。 2.固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 3.半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 加塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。灭菌 将上述培养基以105kg/cm2（15磅/英寸2），1213， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。 （8）摆斜面 将灭菌的试管培养基冷却至50左右，将试管棉塞端搁置在玻棒（或其它物品）上，并调整斜度，搁置的斜面长度不超过试管总长的一半。 （9）无菌检查 将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底。7. 实验记录培养时间 年 月 日 ： 至 年 月 日 ： 平 皿号稀释倍数10-110-210-3空白平皿一平皿二平均值结果CFU/g(mL）判定结果CFU/g(mL）预计三天完成 腐竹中大肠杆菌定性实验一.实验目的对大肠杆菌进行定性，研究其产气情况及其显色反应，用革兰氏染色判定其为阴性还是阳性。二.实验器材 研钵一个，500mL量筒1个，滴定管1根，1 mL吸管4根，试管8根，玻璃棒2根，培养皿15个，500mL烧杯一个，涂抹棒1根，洗耳球1个，杜氏小管12根，牛角匙2个，瓷杯1个，漏斗，橡皮管，铁夹1套，铁架台1个，电磁炉1个，天平1台，pH试纸，250mL三角烧瓶3个，标签纸2张，纱布，棉花，棉线若干，高压蒸汽灭菌锅一台，恒温培养一台，超净工作台。三.实验药品 1mol/L NaOH，1mol/L HCI，胰蛋白胨（10.0g），酵母浸粉（5,0g），氯化钠（10.0g），琼脂（15.0g），0.04%滇甲酚紫水溶液，磷酸氢二钾，2%伊红水溶液，0.5 %美蓝水溶液四.实验步骤1、 样品的配制（无需稀释，因为腐竹中本身只可能含有微量的大肠菌群，如若稀释，就更难检出大肠菌群了）1.1、 固体和半固体样品：以无菌操作取25g 样品，置盛有225 mL 无菌水的无菌研钵内，再转移至500ml烧杯中，充分振摇，即制成1:10 的样品匀液。吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，共做6个平皿。1.2、 及时将15 mL20 mL 冷却至46 的牛单倍乳糖蛋白胨培养基（可放置于46 1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。3、 单倍乳糖蛋白胨培养液；单倍乳糖蛋白胨培养基配制成分蛋白胨10g 乳糖5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1 mL氯化钠5g 牛肉浸膏3g 蒸馏水 1000 mL制法将蛋白胨，乳糖，氯化钠，牛肉浸膏加热溶解于1000 mL蒸馏水中，调节PH为7.2-7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1 mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌锅中，在115灭菌20分钟，储存于暗处备用将待测样品分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中，在370.5下培养24h2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。(如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则进行下面的分离培养实验）注：A.溴甲酚紫是指示剂，碱性环境下显紫色，酸性下显黄色。1.6%溴甲酚紫乙醇溶液的配制：溴甲酚紫1.6g用无水酒精定容至100ml，摇匀具体操作：称取溴甲酚紫1.6g倒入小烧杯，用少量无水酒精溶解，移至100ml容量瓶，用无水酒精多次洗小烧杯，洗液移入容量瓶，最后用无水酒精定容至100ml，摇匀备用(这种做法浓度肯定稍稍小于1.6%,但可以忽略不计) B.大肠菌群细菌发酵乳糖产酸产气使培养液由紫色变成黄色,套管内充有气体。3. 分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置361 温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。注：接种采用涂抹平板计数法吸取0.2mL产气发酵管中液体滴加至伊红美蓝琼脂平板上，然后分别用无菌玻璃涂布棒将稀释液涂布均匀，平放桌上20-30分钟，使稀释液渗透于培养基中，然后将培养基倒置培养。 伊红-美蓝培养基配制成分蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 2030g 蒸馏水 1000ml 2%伊红水溶液 20ml 0.5 %美蓝水溶液 13ml制法先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.27.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115灭菌20min，贮存于冷暗处备用。现象当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽（必须在某种光线下才可能看到）。而产气杆菌则形成呈棕色或黑色的大菌落。证实试验 在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落（典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大）1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置 361温箱内培养242h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。五.报告 记录实验结果，完成定性报告。实验预期4天完成。有兴趣的可继续进行芽孢染色的实验。附：大肠菌群 colifrom bacteria大肠菌群是革兰氏阴性、无芽孢、氧化酶阴性的杆状细菌，为需氧和兼性厌氧，可在有胆盐（或具有其他一直生长的表面活性剂）存在的情况下生长，通常可在36 C 2C发酵乳糖并产酸和醛。具有-半乳糖苷酶。在本标准设定的条件下，大肠菌群为能分解-半乳糖苷，使培养基发出荧光或生成紫色（或红色）菌落的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌。附：高压灭菌锅使用方法一、高压灭菌锅使用前要水加到水位线；二、将需灭菌的培养基、蒸馏水或其它器皿放入灭菌锅内，关闭锅盖，检查排气阀、安全阀状态，三、打开电源，检查参数设置是否正确，然后按下“work”键，灭菌锅开始工作；自动派冷气，到105时，底部排气阀门自动关闭，然后压力开始上升； 四、压力升至 0.15MPa（121）时，灭菌锅再次自动放气，然后开始记时，一般培养基灭菌20min，蒸馏水灭菌30min； 五、达到规定的灭菌时间后，关闭电源，打开放气阀缓慢放气；当压力指针降至 0.00MPa时，放气阀无蒸汽排除时，方可开启锅盖。 六、注意事项 1、汽未放尽前，不得开启高压锅； 2、如果灭菌后的培养基在锅内不及时拿出，需在蒸汽放尽后将锅盖打开，切忌将培养基封闭在锅内过夜。 3、压力表指针在0.05MPa以上时，不能过快放汽，以防止压力急速下降，液体滚沸，从培养容器中溢出。4、操作过程，请注意安全，小心烫伤。5、锅内必须要有充足的水。6、锅的气密性一定要很好。7、使用完后一定要放到适合温度才可以打开。步骤1首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 2放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 3加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 4用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用 105kg/cm2，1213，20分钟灭菌。 5灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压