保肝功能研究试验方案.doc

保肝功能研究试验方案1、木瓜提取物：木瓜中齐墩果酸最佳提取参数为95%的乙醇、温度为60、时间3h、料液比为18、原料粒度40目、提取2次。熊果酸最佳提取参数为95%的乙醇、温度为60、时间3h、料液比为16、原料粒度60目、提取2次。用HPLC检测出的齐墩果酸与熊果酸的含量分别为：0.59%和0.12%2、乙醇肝损伤的方法：将小鼠随机分为乙醇对照组( n = 6)和 高( n = 4) 、低剂量( n = 7) 木瓜提取物预防组. 乙醇对照组每日下午定时白酒灌胃6 mL /kg;高、低剂量SAM预防组每日上午定时分别肌注SAM 32和16 mg/kg,下午定时白酒灌胃6 mL /kg. 实验两组连续给酒25和26d取血作酶学检测并处死所有大鼠取肝脏制作石蜡切片, HE染色病理学观察. 血清g-谷氨酰转肽酶(g-glutramyl transpep tidase, -GT，酒精性肝炎或酒精性肝硬化患者GT几乎都上升，为酒精性肝病的重要特征)由第四军医大学口腔医院检验科检测.态参量（56度北京二锅头）实验方案（改进）：高剂量组：240mg/Kg0.2ml 24mg/ml药物低剂量组：60mg/Kg0.2ml 6mg/ml药物配制：用56度酒配制即可，共配50ml.方法：实验前，每只老鼠称重（编号）。酒与药同时于每天上午。空白对照8只，不喂药和酒，只喂饲料和水；模型组：喂0.2ml酒，自由采食和水。药物组：1）高剂量组：喂0.2ml 24mg/ml药物，自由采食和水；2）低剂量组：喂0.2ml 6mg/ml药物，自由采食和水；连续喂养20天后，称重，眼眶取血（分离血清，测定GT酶活性），称器官重，取肝，用4%甲醛固定后进行石蜡切片观察。3、CCl4肝损伤的方法：第一种方法：SD 小鼠随机分为8 组(正交配伍18 组) ,每组6 只,各组动物各按相当生药10gkg- 1灌胃给予相应的部位配伍液或蒸馏水,连续给药5d ,1d 1 次。于末次给药2h后,参照文献方法,按7mLkg- 1给各组大鼠一次性腹腔注射10 %的CCl4 P植物油溶液, 造成大鼠急性肝损伤模型。24h 后,各组大鼠以10 %水合氯醛麻醉,颈动脉取血,分离血清,用赖氏法检测血清中ALT、AST 的含量。给予CCl4 后24 h 小鼠摘眼球取血,2 500 rPmin 离心15 min 分离血清,用全自动生化分析仪(西班牙) 测定血清中ALT、AST 活力。实验方案（改进）：高剂量组：240mg/Kg0.2ml 24mg/ml药物低剂量组：60mg/Kg0.2ml 6mg/ml药物配制：用1%Tween-80配制即可，各配20ml.方法：实验前，每只老鼠称重（编号）。空白对照8只，不喂药，自由喂饲料和水；模型组：不喂药，自由采食和水。药物组：1）高剂量组：喂0.2ml 24mg/ml药物，自由采食和水；2）低剂量组：喂0.2ml 6mg/ml药物，自由采食和水；连续喂养7天后，末次喂药后，对模型组和药物组的老鼠分别从尾静脉注射Xml CCl4，24h后称重，眼眶取血（分离血清，测定ALT，AST酶活性），称器官重，取肝，用4%甲醛固定后进行石蜡切片观察。注意：对照组测定时应测GT、ALT、AST。预试：用空白老鼠从腹腔分别注射100ml，20ml，2ml 10%的 CCl4（用色拉油配制）。24h后取血测定ALT、AST的活性是否增加。体重、心、肝、脾、肾的重量取肝脏,称重并计算肝脏系数肝脏系数= 肝脏重量(g) P空腹体重(g) 100 。取肝左叶用体积分数4 %的甲醛溶液固定,石蜡包埋,用LEICA 石蜡切片机(德国) 制做组织切片,姬姆(HE) 染色,显微镜下观察肝脏病理组织学变化。4、D-半乳糖胺肝损伤的方法第二种方法：取红丝线草,剪成粗段,分别用95 %乙醇和水回流提取,浓缩蒸干得醇提物和水提物。醇提物用适量水悬浮后依次用石油醚、水饱和的醋酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取,各部分萃取液浓缩得到不同极性部位浸膏。精密称取所需浸膏,用纯化水配成20 gkg - 1 (按生药材计算) ,备用。大鼠随机分成12 组,每组8 只。分别为肝炎模型组(A) 、正常对照组(B) 、乙肝宁组(C) 、联苯双酯组(D) 、石油醚高剂量组( E) 、石油醚低剂量组( F) 、醋酸乙酯高剂量组( G) 、醋酸乙酯低剂量组( H) 、正丁醇高剂量组( I) 、正丁醇低剂量组(J ) 、水高剂量组( K) 、水低剂量组(L) 。正常对照组和病理模型组每天灌胃给予纯化水,受试组和阳性对照组的动物每天根据剂量灌胃给药。在给药的第5 天,除正常对照组外,其余各组动物均腹腔注射D-半乳糖胺