唐古特虎耳草黄酮对小鼠几种脏器抗氧化机能的影响.doc

学号：0812134人体解剖生理学设计实验报告题 目：唐古特虎耳草黄酮粗提物对小鼠肝脏和脾脏生理机能和组织结构的影响 院 系：农业与生物技术学院 作者姓名： 吴潇潇 指导老师： 崔 玮 完成日期： 2011 年 2 月 1 日唐古特虎耳草黄酮对小鼠几种脏器抗氧化机能的影响姓名：吴潇潇 学号：0812134 指导老师：崔玮河西学院 08级班 农业与生物技术学院摘要：本实验以小鼠为实验材料，通过给小鼠灌服唐古特虎耳草黄酮粗提取物的片法，研究了黄酮提取物对小鼠不同组织超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的影响，测定了唐古特虎耳草黄酮粗提物对小鼠肝脏和脾脏组织中的超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)的含量影响的变化，并制作了各组织石蜡切片，实验结果表明：在肝脏中低浓度的黄酮类物能提高MDA的含量和SOD的活性，在脾脏高中浓度的黄酮也能提高MDA的含量和SOD的活性。关键词：唐古特虎耳草黄酮 小鼠 小鼠肝脏 变化 MDA SOD引言：唐古特虎耳草，虎耳草科虎耳草属。它含有较高的黄酮、多糖等药用成分，具有多种生物活性。黄酮类化合物对抑制血小板凝集有一定功效，对凝血因子具有较强的抑制作用，故表现出较好的抗凝血作用。同时黄酮类化合物能够促使胰岛细胞的恢复，降低血糖和血清胆固醇，改善糖耐量，对抗肾上腺素的升血糖作用。1材料与方法1.1材料实验小鼠、唐古特虎耳草黄酮粗提取物、切片机、生理盐水、分光光度计1.2.材料处理1.2.1选择生长状况良好的20只雌雄小鼠，称重，随机分组，一组为对照，其余三组为实验组。1.2.2灌胃处理：对照组灌胃生理盐水，实验组灌胃不同剂量黄酮粗提物，灌胃量0.5ml/只，黄酮含量50mg/Kg体重、 100mg/Kg体重、 200mg/Kg体重，正常方法饲养15天。1.2.3称重，摘除眼球采血，取肾、心，均洗血污后吸干称重，并取部分肾、心固定，部分标记后冻存，1.2.4测各组小鼠心脏和肾脏中MDA含量、SOD活性，制作肾、心组织石蜡切片，观察比较显微组织结构。1.3方法1.3.1超氧化物歧化酶(SOD)活力测定：采用黄嘌呤氧化酶法测定1.3.2丙二醛（MDA）含量测定：采用硫代巴比妥酸(TBA)法1.3.3石蜡切片的制作2结果与分析2.1实验结果表1小鼠心脏和肾脏中的MDA含量MDA含量吸光值对照值心脏照组对0.6430.0301.167高浓度1.4140.0661.167中浓度0.6640.0311.167低浓度0.6430.0301.167肾脏对照组0.9640.0431.167高浓度0.7710.0361.167中浓度1.0930.0511.167低浓度1.1140.0521.167表2小鼠心脏和肾脏中的SOD活性SOD活性吸光值稀释倍数最大值心脏对照组1.7050.723101.097高浓度1.7460.714101.097中浓度1.6860.727101.097低浓度1.4360.782101.097肾脏对照组2.3790.575101.097高浓度2.1920.616101.097中浓度1.5720.752101.097低浓度1.3900.792101.0972.2不同浓度处理过的小鼠心脏和肾脏的石蜡切片 图1 肾脏中40倍 图2 肾脏中10倍 图3 肾脏对照40倍 图4 肾脏对照10倍 图5 肾脏低40倍 图6 肾脏低10倍 图7 心脏中40倍 图8 心脏中10倍 图9 心脏对照40倍 图10 心脏对照10倍 图11 心脏低40倍 图12 心脏低10倍结果分析：通过观察石蜡切片可知，随着注射唐虎耳草黄酮浓度升高，小鼠各器官细胞形态（细胞膜、细胞间隙及染色情况）更加清晰，细胞界限更为明显。2.3不同浓度黄酮处理过的小鼠心脏和肾脏中的MDA含量的对比图1黄酮对小鼠心脏和肾脏中MDA含量的影响通过图1可以看出，用不同浓度的黄酮粗提取物处理过的小鼠心脏中的MDA含量均有增加，其中高浓度处理过的一组增长最多。而经高浓度处理过的肾脏中的MDA含量减少，说明黄酮提取物能增加肾脏的抗炎作用、抗损伤能力。图2黄酮对小鼠心脏和肾脏中SOD活性的影响通过图2可以看出，经不同浓度的黄酮提取物处理过的小鼠的肾脏中的SOD活性降低，经中浓度和低浓度的黄酮提取物处理过的小鼠心脏中的SOD活性也降低，但经高浓度处理过的小鼠心脏中的SOD活性增强，着说明高浓度的黄酮可增强小鼠心脏的抗氧化能力和抗衰老能力。3讨论唐古特虎耳草中提取出的黄酮能提高小鼠机体过氧化氢酶的含量，降低机体丙二醛的含量；提高机体的总抗氧化能力。近年来，黄酮类化合物的抗自由基、抗氧化作用越来越受到人们的重视。它是黄酮类化合物许多生理活性的基础。但过量的氧自由基可引起膜脂质、蛋白质、核酸等的过（超）氧化反应而受到损。许多病理生理现象，如衰老、突变、肿瘤、炎症、变态反应、缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化等，都与氧自由基有关。SOD是体内催化歧化反应的一种抗氧化保护酶，此酶广泛的存在于各种生物中。SOD对机体的氧化和抗氧化平衡起着重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基（O2-）保护细胞免受损伤。而超氧阴离子自由基（O2-）是机体细胞在受到刺激作用后产生的含氧的自由基，由于其外层电子不配对，故其化学性质十分活泼，极易对生物大分子发生氧化反应，改变或破坏生物大分子结构的完整性而引起多种疾病。因而SOD活力的高低与衰老、肿瘤、炎症、自身免疫病、血液病、心血管病、肾脏病、消化系统病、辐射药物作用有密切关系。丙二醛（MDA）是机体通过酶系统和非酶系统产生氧自由基，而氧自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此生成的脂质过氧化物。生物膜是生命系统中最容易发生脂质过氧化的场所，生物膜主要是由磷脂组成的，而多不饱和脂肪酸又是磷脂的主要组分。当生物膜的脂质发生过氧化作用后，其流动性必然发生改变，严重时，其生物活性丧失，如能量转换，物质运送，信息传递，细胞分裂和融合等都不能正常发挥。脂质过氧化作用的最后产物主要是丙二醛（MDA），因此丙二醛的量常被用作做脂质过氧化的量度。并且丙二醛还可以与蛋白质分子的氨基发生作用导致多肽链的链内交联和链间交联，还能与蛋白质的巯基反应，修饰了的蛋白质和酶将失去他们的生物活性，导致代谢异常，甚至死亡。从以上试验结果看出，唐古特虎耳草黄酮能提高小鼠心脏总超氧化物歧化酶的含量，降低小鼠肾脏内丙二醛的含量；提高机体的抗氧化能力。虎耳草活性部位为乙酸乙酯部分,其中含有虎耳草中大多数化学成分。虎耳草乙酸乙酯部分具有较好的抗菌活性,可进一步研究开发为中药抗菌药。这可为以后开发利用虎耳草提供一定的理论依据。鉴于其对药理学作用之大，又广泛分布于植物界中，而且生理活性多种多样，引起了国内外的广泛重视，研究进展很快。虽然证明了唐古特虎耳草中提取出的黄酮能提高小鼠机体过氧化氢酶的含量，降低机体丙二醛的含量；提高机体的总抗氧化能力，但是其不同浓度的粗提取物对器官的作用或不明显，或不显著，效果不稳定，或许是粗提取物中还有其他的药理成分的原因，研究这些成分对机体是否有毒害作用对药品资源和材料的开发有很大价值。参考