试剂盒实验问题总结.doc

技术咨询问题灵 敏 度试剂盒能检测到待测抗原的最低浓度。（最小检出量）检 测 下 限试剂盒使用该样本的处理方法，能检测到样本中待测药物的最低含量 （检测下限=灵敏度*稀释倍数）交 叉 率指在同一测定方法中有两种以上的不同抗原对一种抗体同样特异性结合回 收 率（添加管浓度-空白管浓度）/添加量*100%添加范围：检测下限以上曲线最大浓度最佳添加浓度：第三标准第四标准浓度之间单位换算：高标准100ppb添加10ul等于添加1ppb样 本 处 理采取样本：去除脂肪的匀浆样本样本解冻：严禁直接放入水中解冻（由于多个样本和水的原因，可能造成假阳性），可室温放置或密封后放入水中解冻试剂的配制，加入有机溶液的量，震荡时间严格按照说明书操作离心：最终分离效果好，需要相层清澈透明取相：靠壁轻吸所需相层，严禁吸到其它相层（其它相层可造成假阳性）净化：加入正己烷净化，复溶液提取，充分混匀酶 免 步 骤加样点板洗板酶标仪的使用（450nm）试剂盒注意事项详见说明书参见网址： 常见问题处理出现问题出现问题的原因解决办法 曲 线OD值不正常试剂盒未回温试剂盒回温到25温度控制不好控制正确温度孵育时间不准确控制孵育时间洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干阳光直射，对着风直接吹避风避光酶标仪的波长错误酶标仪的波长450nm抗体的稀释错误正确的稀释抗体水质问题用娃哈哈矿泉水代替白 板洗涤液配制错误正确的配制洗涤液少加液体（抗体、酶标记物、A液、B液）正确的步骤加液体错加液体 无 梯 度标准品也污染换标准品点板OD值不正常控制温度时间在做一次人为点板/线 性 不 好OD值不正常控制温度时间在做一次人为点板/ 回 收 率空白管阳性高样本本身就是阳性样本换阴性样本做回收率空白管在实验中被污染实验中防止交叉污染水质原因用娃哈哈矿泉水代替偏 高添加量不准确精准的添加量添加浓度不适合添加合适的浓度取液吹干量多准确的取液吹干取到其它相层液体取需用相吹干复溶液未稀释或加入量少正确的稀释复溶液偏 低添加量不准确精准的添加量添加浓度不适合添加合适的浓度取液吹干量少准确的取液吹干复溶液稀释错误或加入量多正确的稀释复溶液出现问题出现问题的原因解决办法假阴、阳性水质原因点复溶液验证用娃哈哈矿泉水代替实验操作原因吸取到其它相吹干准确的取液吹干离心不彻底延长离心时间样本的污染更换样本乳化未处理完全温浴（70）处理乳化现象仪器试剂原因离心管未清洗干净正确的洗涤器具有机溶剂的影响做试剂空白看影响结果衍生化试剂原因（长时间衍生化试剂变质）更换衍生化试剂与曲线好坏相关保证曲线的正常金标检测（T）线颜色较浅尿液pH偏碱性 用0.01M HCl调节尿液pH值到7.0左右。 尿样滴加过多 重新测定，尿样按照说明书，控制在2滴 尿液过于混浊 将尿液离心后，取上清液重新测定 金标质控（C）线不出现检测卡由于高温、受潮等原因失效 尿样需要重新检测。 过了有效期失效。 该批号的金标应丢弃处理，尿液需要重新检测 操作过程中检测卡没有平放，导致液体样品直接冲过检测区 尿样需要重新检测，且检测卡平放于桌面上再加样。 尿液样品中含有较高的抑制或者干扰抗原抗体反应的物质（比如明矾、小苏打、氧化剂、肌酐等） 该尿液的检测结果无效 金标卡上在除了T和C线之外的其他地方出线 金标卡上的划痕；胶体金在跑板过程中没有完全跑干净而遗留在卡上的痕迹； 该检测卡结果不可信，尿液需要重新检测。 实验重复性不好操作人员的不一致，取样的不一致，样本数量的多少，加样时间的