毛细血管特意性抗体.doc

我想做猪心肌毛细血管密度测定,用VIII因子作为评价指标，请各位高手指点找不到猪的VIII因子抗体情况下,用哪种动物的抗体代替比较好APP(氨基肽酶P),FLT1(血管内皮生长因子受体1)cd31、cd34 、还有因子八，但文献中cd34较多，比较起来，特异性较高，背景低。你可以看看文献1 使用CD31、CD34以及八因子来代表毛细血管密度，在前些年的国外实验和目前部分国内实验中，经常看到。在找不到八因子时，不推荐CD31、CD34；因为，国外实验已经证实，在淋巴管内皮细胞发现了它们的表达；所以，再用来代表毛细血管的特异性标志物，难免会受到专家以及同行们的质疑。2 我推荐JG12，这是个目前国内做的比较少的指标，经常可以在国外权威杂志上看到用它来代表血管内皮细胞。因为它仅由血管内皮细胞合成，可以作为毛细血管的特异性标志物。很多公司有的卖，很容易买到。3. 我用的JG12，反应组织间质的毛细血管密度。效果还不错。热修复，后面的用的即用型试剂盒。DAB显色。抗猪的VIII因子抗体有卖的，abcam公司有，号：ab6349CD31 通过免疫组化染色显示毛细血管内皮细胞,进一步完成微血管计数,方法简单,实用性强,作为判估肿瘤转移预后的一项新指标有着重要的实际意义。FRAg是最常用的内皮细胞标志物。CD31又称血小板内皮细胞粘附分子,是一种新的内皮细胞标志物,对新生毛细血管内皮细胞标记率比FRAg高,更适合研究肿瘤血管生成。VEGF (血管内皮生长因子). 是 血管就 必然有内皮,尤其有利于新生小血管的检测.推荐一用.课题需要检查大鼠心肌新生毛细血管密度，查了查文献，发现免疫组化VIII因子对毛细血管的检查方法有两种：1 把染色阳性的内皮细胞作为毛细血管计数；2 把管腔一个红细胞直径的条件 。问题： 这两种计数方法到底哪个更好一些？为什么？谢谢请问你的八因子在哪个公司定得。可以标记大鼠的微血管吗？我也准备做微血管密度方面的研究，但苦于找不到合适的抗体，烦心呀！以前用的是CD34，但效果不好，做人的还可以，但做大鼠的就不行。楼上的如果做出来了，请告知我一声，用的什么方法，在下感激不尽！我用的博士德的，兔抗人VIII,抗大鼠的不好找，抗人的也可以做微血管计数在肿瘤研究中非常常见，一般用组化的方法对于组织切片的毛细血管进行特异性染色。之后，选择你要观察的区域进行血管计数。流行的抗体有RECA，CD34，CD31，8因子，LN等。祝你顺利。肿瘤组织血管内皮细胞有许多相对特异的抗原，如CD34,CD31等。我是做肝癌血管生成方面的研究，用CD34作为肿瘤血管的标志（免疫组化），在正常肝血窦内皮细胞是不表达的。然后再显微镜下计算肿瘤内微血管密度(MVD, microvessels density).你可以用angiogenesis, endothelium cells, tumor 等关键词查阅一些文献。人准备培养大鼠的血管内皮细胞，血管内皮细胞检测除了第八因子抗体外，可不可以用VEGF或者VEGFR？谢谢！VEGFR有好几种，其中VEGFR3是标记淋巴管，其他的像CD34,CD105也可以用。我的课题是有关血管生成方面的，有一个关键问题解决不了，就是：血管内皮细胞的特异性标记物，用以鉴别上皮性肿瘤细胞和血管内皮细胞，请大家帮忙，谢谢！你可以检测以下两者：1.第因子关连抗原（von willebrand factor,VWF），可以由全身所有血管内皮细胞产生，检测这一因子主要用相应抗体。VWF有其特异性，人的VWF抗体对牛的内皮细胞没有交叉反应。免疫荧光间接法测定该因子，阳性细胞出现细长的荧光颗粒，在核周围的颗粒较密，细胞边缘颗粒较少。2.Weibel-Palade小体，该小体是血管内皮细胞又一特异性的标志。电子显微镜下，呈现0.10.3m,长0.55m的椭圆形棒状结构。上述的VWF就是该小体产生的。PECAM-1 血小板内皮黏附分子 又称CD31，可以鉴定血管内皮 效果好我要在免疫组化片子上鉴别血管内皮细胞和卵巢癌细胞，是有关血管生成的，但我看过一些文献，大家所说的CD31、VWF， 不仅仅在血管内皮细胞上表达，在肿瘤细胞上也有表达，本来开题报告中我选用的是这两个因子，但被导师给否了，让我在查新的因子，要不然就的重新选题了。CD34，我们这标记血管内皮细胞最好的标记。此外CD31、因子、vWF等也是常用的标记。CD34、CD31、vWF、FLK-1、FLT-1、Weibel-Palade小体，以及放免功能分析！试剂公司有以下几个：中山/杉、博士德、罗氏、santru、chemokon等公司。应该有吧，我们这作人的免疫比较多。国内常用的是中杉和迈新公司的，这两家公司是分装国外抗体，做过实验后销售的。搏士德公司是用相关因子直接免疫人、鼠或其他动物，抗体比较全，但稳定性一般。如果有条件可以买国外抗体，价格比较贵，一般在3000元左右，中杉代理santa cruz公司，迈新代理labvision（neomarker）公司产品，产品抵运速度较快，此外，国外还有R&D，chemicon，novus，等试剂大公司。推荐一个查试剂的好网站兔的抗体较少，自己打电话问一下吧。血管内皮细胞八因子相关抗原鉴定的过程本人实验急需解决血管内皮细胞八因子相关抗原鉴定的过程.我培养的是人血管内皮细胞.用兔抗人八因子相关抗原抗体鉴定.一抗是兔抗人,二抗是羊抗兔.具体过程不是很清楚.请各位高手指点!(具休步骤)谢谢!将细胞接种到明胶包被的盖玻片上,24小时后取出，用PBS洗涤后，放入4%丙酮固定10min，室温干燥后，于3%过氧化氢中室温孵育10min（除内源性过氧化物酶），蒸馏水冲洗，PBS浸泡5min，以正常山羊血清工作液封闭，室温孵育15min，倾去血清（勿洗），滴加1：50八因子兔抗人（对照加PBS），37度孵育1hr，后用PBS洗，滴加生物素标记二抗（羊抗兔），室温孵育15min，用PBS洗，滴加辣根素标记的链霉素卵白素工作液，室温孵育15min，用PBS洗，加DAB，室温显色10min。自来水充分冲洗后，乙醇梯度脱水封片。显微镜观察并照相如果二抗用荧光标记的，会更简单一些，图片会更漂亮，并且假阳性少一些，有时Webel-Palade body都可以显示出来野原 你好 我看到你在 2005-05-06 贴子说 “关于血管内皮细胞的检测抗体，目前有许多更新的取代了以往的CD34、CD31、VIII因子。多查查文献有好处。” 我想做移植胰岛周围新生血管的观察，您能给一些指点吗 ，有哪些新因子，及检测方法？ 谢谢！1 标记内皮细胞常用的有CD31、CD34、八因子相关抗原等，CD31、CD34的敏感性较好，CD31主要表达于血小板、单核细胞、粒细胞、B淋巴细胞和内皮细胞；CD34表达于早期的淋巴造血干细胞、祖细胞、血管内皮细胞、胎纤维母细胞和某些神经组织的细胞。八因子相关抗原存在于人的血管内皮细胞、巨细胞和血小板，因此特异相对较好。建议还是选择八因子相关抗原做肿瘤微血管密度的计数较好；2 试剂公司国内的大部分都是分装和销售公司，试剂都是由国外公司生产的，而国外公司的产品一般来说质量还是很好的，所以，无论从哪家公司购买抗体，建议最好买原装试剂，但是价格较高，所以可以买国内分装的浓缩试剂，最好不要买所谓的工作液，很不稳定且价格高。SD乳鼠培养肺微血管内皮细胞,培养已经成功,请问该如何鉴定我养的细胞是微血管内皮细胞?谢谢您的解答.形态鉴定同上电镜找vW小体免疫组化：CD31第八因子抗体我想标记心脏上血管内皮细胞，因为此类血管内皮薄，血管平滑肌层也薄，不知何种抗体用来做免疫组化标记效果会比较好。查到文献有用von Willebrand Factor Ab，不知各位前辈有无此方面经验。Von Wihebrand Factor和CD31均被用来标记内皮细胞，CD31在正常组织血管中明显表达。CD34是I型膜贯通性糖蛋白,临床上常用于鉴定造血前驱细胞，亦广泛用于标记血管内皮细胞。CD34定位于胞膜/胞浆。平滑肌抗体 (smooth muscle actin，SMA) 为肌动蛋白的三种异构体之一，主要表达于平滑肌细胞，构成血管壁的收缩系统成分。SMA在内皮层、内皮下层有较明显的表达。血管内皮生长因子（vascular endothelial growths factor，VEGF）又称为血管通透因子，是与血管生成关系最密切的血管生成因子，具有对内皮细胞高效特异的靶向特性，在血管的形成中起关键的启动作用：参与血管内皮细胞和其他血管壁成分的增生、迁移、粘着和通透，既可在生理过程中，又可在炎症、肿瘤、外伤等各种疾病中促进血管形成。Flt-1（VEGF-R1）和Flk-1（VEGF-R2），参与介导内皮细胞的增殖、迁移、粘附和管腔形成。Factor VIII(F8)第八因子相关抗原检测内皮细胞起源的肿瘤及骨髓标本中巨核细胞的增殖，定位于胞浆。请教，MSC体外诱导分化为上皮细胞或血管内皮细胞有没有什么免疫组化可以对其进行鉴定啊，多谢！血管内皮细胞一般用vWF抗体，CD31抗体免疫组化或荧光鉴定.我准备用CD31免疫组化鉴定内皮细胞,我从来没有接触过这方面的知识,听说一抗和二抗的浓度要好好摸摸,请问哪位前辈作过这方面内容,能否帮帮我,给我讲讲具体步骤、注意的问题和浓度等，非常感谢！为什么不用八因子抗体检测呢？这样的protocol大家都很熟悉谢谢!由于我们实验室没有荧光显微镜,所以不能用八因子抗体检测.我最近要做的试验需要用到特异性的只能把血管内皮细胞进行荧光染色的活体染料分子，请问大家有知道相关信息的么？染料好像比较困难单染内皮，建议用荧光抗体，有CD105/CD106贡选择 各位，我想做肿瘤新生血管的免疫组化，我查文献有用CD31,CD34,CD105的，这3种都有人要，我不知道哪种更加好啊。 谢谢CD105仅在处于增殖状态的肿瘤组织血管内皮细胞(即新生的血管内皮细胞)上强表达，而在正常组织的血管上无表达;CD34不仅表达在新生的微小血管内皮细胞上，而且也表达于非新生血管包括大血管的内皮细胞上;CD31作为血管内皮细胞特异的标记物，正常或肿瘤组织内的血管内皮细胞均可表达.不同的肿瘤这三种的相对表达水平及敏感性也有差异，可以在查一下文献，根据自己的肿瘤的特点选择合适的指标新生微血管标记物用什么抗体比较好?做免疫组化,石蜡切片!请各位不吝指教!可以用血管内皮生长因子VEGF，也可以用第VIII 因子、CD34或CD31来标记血管内皮细胞。我的硕士课题用的是VEGF，很不错，有些没有形成血管形态的内皮细胞团都着色了。因子相关抗原是一种复合抗原，vwF是其中的一部分。因子是肝脏合成的，而因子相关抗原是内皮细胞合成的。鉴定内皮细胞可以用因子相关抗原，也可用vwF抗体。1）CD31、CD34等都是标记血管内皮细胞的抗体，CD105是近期流行起来的，标记内皮细胞及内皮祖细胞，是新生脉管的标志物，除了新生血管之外新生淋巴管呈阳性。如果，想要测定肿瘤新生血管，CD105是一个不错的选择。2）测MVD做免疫组化时的一抗应该是抗人的还是抗小鼠的？应该选用抗鼠的一抗，因为移植瘤中的血管都是由宿主（小鼠）组织的血管长入的，所以血管内皮细胞是鼠源性的，选用抗鼠的单抗比较好。但是，中山的抗体是抗人，抗鼠都可以，我们试过染小鼠的组织背景很高，条件不太好摸。哪位战友知道如何鉴定兔内皮细胞，八因子抗体和CD31等都没有抗兔的，抗人的能用来做抗兔的吗？谢谢为什么非要用免疫组化哪？透射电镜看W-P小体特异性更高。而且内皮细胞只看形态就基本可以确认啦。VEGF是不能鉴定内皮细胞的. 上皮细胞和成纤维细胞都表达VEGF.我以前作过猪血管内皮细胞的原代培养及建系. 用的八因子的抗体也是抗人的 可以用的. 因为八因子在哺乳动物间比较保守. 现在公司生产的抗八因子的抗体都是可以抗多种动物的八因子的,你可以查一下公司的产品目录.应该没有问题的.对了你最好买多抗为好.(武汉博士德,福州迈新,洛阳华美,北京中杉)我想观察大鼠脑组织的血管新生，采用的是石蜡切片，不知道该用哪一种抗体。目前查阅到的标记血管内皮的指标有：CD34、CD31、CD105、vWF，还看到国外有用lectin标记的。关于这几种抗体的应用都是在肿瘤方面，这几种抗体选哪种最适合我的观察目的呢？vWF常表达在成熟的血管内皮上。国内有人用八因子来标记新生血管，岂能合适？CD34为造血干细胞及内皮细胞表面标记物，是所有血管内皮细胞的标记物，既然也可以标记造血干细胞，是否适合于大鼠脑组织？如果存在骨髓动员呢？CD31我见的不多，不太了解。CD105是区别于CD34的新的内皮细胞标记物，它特异性的标记新生血管内皮，在成熟的内皮上低表达或不表达，对判断肿瘤的预后很有价值。那它所标记的是否都是一些无功能的，渗漏的血管呢？国外一文献采用的lectin染色标记微血管，同时结合有PCNA。很少听说过用lectin的。怎么回事?该文献：Angiopoietin-Facilitates Vascular Endothelial Growth Factor-Induced Angiogenesis in the Mature Mouse Brain . Stroke. 2005 Jul;36(7):1533-7. Epub 2005 Jun 9. Zhu Y, Lee C, Shen F, Du R, Young WL, Yang GY.我同学做的新生血管是用CD31和Ki-67进行双染，PCNA也是和Ki-67相似的标记，应该也可以的。我自己做的是BrdU掺入，但是我是做的培养的细胞的，如果你条件允许的话也可以采用BrdU掺入活体实验，和CD31/34联合应用应该也可以的。我要测有关肾脏,肠道黏膜的血管内皮生长因子(VEGF),微血管密度(MVD),请问用鼠(兔)抗人VEGF单克隆抗体好还是多克隆抗体好,测MVD用一抗CD34还是用第八因子相关抗原抗体好另外我想请教一下,这些抗体,S-P试剂盒,DAB显示剂买哪个公司的好?1 血管内皮生长因子(VEGF)一抗当然用单克隆抗体好，多克隆抗体敏感性好，但特异性较差，而且你要测有关肾脏,肠道黏膜的血管内皮生长因子(VEGF)，由于这些部位的内源性生物素较多，非特异性着色很明显，要注意；2 测MVD用第八因子相关抗原抗体好，因为特异性较好，CD34的敏感性好但特异性较差，但国内大部分用CD34；3 抗体,S-P试剂盒,DAB显示剂买哪个公司的一般来说没有明显的区别，不过最好不用分装试剂或即用形试剂关于血管内皮细胞的检测抗体，目前有许多更新的取代了以往的CD34、CD31、VIII因子。多查查文献有好处。-这是有争论的，可以思考的语言：vWF常表达在成熟的血管内皮上。国内有人用八因子来标记新生血管，岂能合适？1 使用CD31、CD34以及八因子来代表毛细血管密度，在前些年的国外实验和目前部分国内实验中，经常看到。在找不到八因子时，不推荐CD31、CD34；因为，国外实验已经证实，在淋巴管内皮细胞发现了它们的表达；所以，再用来代表毛细血管的特异性标志物，难免会受到专家以及同行们的质疑。2 我推荐JG12，这是个目前国内做的比较少的指标，经常可以在国外权威杂志上看到用它来代表血管内皮细胞。因为它仅由血管内皮细胞合成，可以作为毛细血管的特异性标志物。很多公司有的卖，很容易买到。1.第因子关连抗原（von willebrand factor,VWF），可以由全身所有血管内皮细胞产生，检测这一因子主要用相应抗体。VWF有其特异性，人的VWF抗体对牛的内皮细胞没有交叉反应。兔疫荧光间接法测定该因子，阳性细胞出现细长的荧光颗粒，在核周围的颗粒较密，细胞边缘颗粒较少。2.Weibel-Palade小体，该小体是血管内皮细胞又一特异