线性范围试验操作步骤20111028.doc

线性范围试验（葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖）目的：1.掌握线性试验的原理、用途 2.掌握可报告范围、分析测量范围的概念。 3熟悉线性试验的具体操作过程原理 使用不同浓度的葡萄糖标准溶液，用GOD-POD法试剂测定各自的吸光度，以标准浓度为横坐标，以其对应的测定浓度为纵坐标，在方格纸上作图，即可绘制计量反应曲线。在实际工作中并不存在理想的反应曲线。实际中，随着溶液浓度的增加，会出现正偏差或负偏差的反应曲线。因此求出符合理想曲线的线性范围在实际工作中就显得比较重要。 试剂1. 葡萄糖标准液40 mmol/L 称取分析用的一水葡萄糖（C6H12O6 H2O）0.2970g，溶于蒸馏水中并定容至100ml2. 中生北控生物科技股份有限公司的葡萄糖氧化酶法试剂盒。3. 蒸馏水。实验器皿和仪器1.大试管 /小试管（配制系列浓度待测样品用） 11支/15支2.100ul加样器 1000ul加样器 各 1 把3.试管架 1个4.10ml移液管 1 支5.水浴箱 秒表 6.分光光度 操作步骤1、将40mnol/L的标准液按照 0.75 的比例进行配制 15 管不同浓度的待测液，如表1所示。表1. 加入物ML管号123456789101112131415蒸馏水00.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.251mL40mmol/L标准 0.75mL 1号液0.75mL 2号液0.75mL 3号液0.75mL 4号液0.75mL 5号液0.75mL6号液0.75mL 7号液0.75mL 8号液0.75mL 9号液0.75mL 10号液0.75mL 11号液0.75mL 12号液0.75mL 13号液0.75mL 14号液理论浓度mmol/L40.00 30.00 22.50 16.88 12.66 9.50 7.12 5.34 4.00 3.00 2.25 1.69 1.26 0.95 0.71 2、选取上述系列浓度中的其中1、2、3、4、5、7、9、11、13、15管按照下表加入相应内容进行反应表2 加入物(ml)空白QC标准管测定管12345791113155.55mmol/L标准液-0.00 0.040 -质控品-0.040 -待测标本-0.040 0.040 0.040 0.040 0.040 0.040 0.040 0.040 0.040 0.040 蒸馏水0.040 -葡萄糖试剂 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 3、将配置好溶液混匀，置37水浴15min，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度，将结果填入下表表3各管检测吸光度空白标准管QC待测标本管号1234579111315吸光度ABS第一组0第二组04. 根据 表3 数据,计算各管葡萄糖的理论浓度并将数据填入下表,然后以其为横坐标,以对应得葡萄糖浓度的均值为纵坐标,绘制剂量反应曲线图。表4 各管中葡萄糖浓度空白