高效液相色谱常见的故障的断定及解决.doc

(一)保留时间变化柱温变化-柱恒温,必要时需配置恒温箱等度与梯度见未能充分平衡-至少用10倍柱体积的流动相平衡柱子缓冲液容量不够-用25mmol/L的缓冲液柱子被污染-每天实验完充分冲洗柱子,并以甲醇饱和柱内条件变化-稳定进样条件,调节流动相柱子快达寿命-采用保护柱(二)保留时间缩短流速增加-检查泵,重新设定流速样品超载-降低样品量键合相流失-流动相PH值保持在37.5并检查柱子的方向流动相组成变化-防止流动相蒸发或沉淀柱子温度增加-柱子恒温,可采用恒温箱(三)保留时间延长流速下降-管路泄露,更换泵密封圈,排除泵内气泡硅胶柱上活性点变化-用流动相该性剂,如加三乙胺或采用碱至钝化柱键合相流失-流动相PH值保持在37.5并检查柱子的方向流动相组成变化-防止流动相蒸发或沉淀柱子温度增加-柱子恒温,可采用恒温箱(此之上三条同保留时间缩短相同)缓冲盐在进样阀等处出现析出-实验完毕将柱子冲洗干净并用甲醇饱和(四)出现肩峰或分叉样品体积过大-用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%样品溶剂过强-采用较弱的样品溶剂柱塌陷或形成短路通道-更换(或修补)色谱柱,采用较弱腐蚀性条件修补方法以前在园子里说过,方便大家看再说一次:把柱子顶端的填料仔细挖出一节,从以前报废的柱子里挖出足量的填料放入小烧杯中加入适量的甲醇超声,等甲醇挥发完将填料仔细的填入柱子,尽量的紧密均匀,装填的好坏直接影响使用效果,这样可以达到延长柱子的使用寿命,也可以节约成本.很不错的!柱内烧结不锈钢失效-更换烧结的不锈钢,加在线过滤器,过滤样品,用注射器式过滤器过滤样品要干净进样器损坏-更换进样器转子(五)鬼峰进样阀残余峰-每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗样品中的未知物-处理样品柱未平衡-重新平衡柱子,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)-每天新配,用抗氧剂水污染(反相)-通过变化平衡水质量,用HPLC级水(我们将买的蒸馏水进行二次蒸馏,作制备流动相,样品,洗柱子等用水)(六)基线噪声气泡(尖锐峰)-流动相脱气,泵排气或加柱后背压柱子污染(随机噪声)-清洗柱子,净化样品,用HPLC级试剂电干扰(偶然噪声)-采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)检测器灯连续噪声-更换氘灯检测器中有气泡-流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾柱子超载-降低样品量,增加柱内径,采用较高容量的固定相峰干扰-清洁样品,调整流动相硅羟基作用-加三乙胺,用碱致钝化柱,增加缓冲液或盐的浓度,降低流动相PH值,钝化样品柱塌陷或形成短路通道-更换(或修补)色谱柱,采用较弱腐蚀性条件柱内烧结不锈钢失效-更换烧结的不锈钢,加在线过滤器,过滤样品,用注射器式过滤器过滤样品要干净死体积或柱外体积过大-连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管柱效下降-采用较低腐蚀条件,更换(或者修补)柱子,采用保护柱前面的峰没有出来-基线平衡后再进样硅胶基质的色谱柱在高PH值的流动相下降解-选用特殊的色谱柱或高分子基质的色谱柱(八)峰展宽样品体积过大-用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%在进样阀中造成峰扩展-进样前排出气泡以降低扩散数据系统采样速率太慢-设定速率检测器时间常数过大-设定时间常数为第一峰半宽的10%流动相粘度过高-增加柱温,采用低粘度流动相检测池体积过大-用小体积池,卸下热交换器保留时间过长-调整流动相缩短保留时间,等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱柱外体积过大-将连接管径和连接管长度降至最小样品过载-进小浓度小体积样品(九)灵敏度不够样品量不足-增加样品量样品未从柱子流出-可根据样品的化学性质改变流动相或柱子样品与检测器不匹配-根据样品的化学性质调整波长或更换检测器检测器衰减太多-调整衰减即可检测器时间常数太大-降低时间参数检测器池窗污染-清洗池窗检测池中有气泡-排气记录仪测压范围不当-调整电压范围流动相流量不合适-调整流速即可检测器与记录仪超出校正曲线-检查记录仪与检测器,重作校正曲线(十)柱压不稳泵内有空气-排除泵内空气比例阀失效-更换比例阀溶剂中的气泡-对溶剂进行脱气处理(一般超声即可),必要时改变脱气方法系统漏气-找出漏点,密封即可泵密封垫损坏-更换密封垫即可梯度洗脱-这时压力波动是正常的(十一)HPLC柱验收测试时柱压过高常常不是柱子本身的问题(1)拆去保护柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高再检查(2)将色谱柱取下,看压力是否下降,若不下降是管路堵塞,需清洗,若压力下降再检查(3)将柱子的进口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动相)如柱压仍不下降,再检查-请注意:新的柱子不要轻易倒过来冲洗和使用,会降低柱子使用寿命的,这一方法建议在不能退换柱子的时候试用(4)更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明溶剂或样品中含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升.若柱压还高,请于厂家联系,一般情况下在进样器与保护柱之间