小花玄参中总皂苷的定性定量分析.doc

小花玄参中总皂苷的定性定量分析摘要：采用化学试剂法和分光光度法对小花玄参（ ）中总皂苷成分进行定性、定量分析。以菝葜皂苷元为对照品，于 处比色测定，测得小花玄参中总皂苷含量为 ，平均回收率为，为（），该测定方法简便、准确，稳定性、重现性好。关键词：小花玄参（ ）；总皂苷；定性分析；定量分析： . was conducted . according to a311 nm of sample tested using . t ； （） ， ： ； ； ； 小花玄参（ ）属玄参科（）玄参属细弱小草本，为我国特有种，产于四川西部、青海东部和甘肃东南部。玄参科植物中含有皂苷类成分，主要为甾体皂苷，由此推测小花玄参中含有甾体皂苷。皂苷具有多种药理学功能，如抗炎、抗肿瘤等。因此，有必要对小花玄参中的皂苷进行研究。本研究通过化学试剂法和分光光度法对小花玄参中总皂苷成分进行定性和定量测定，为总皂苷的快速定性定量分析提供参考。 材料与方法 材料数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）， 旋转蒸发器（上海亚荣生华仪器厂），型紫外分光光度计（北京普析通用有限公司），索氏提取装置。对照品：菝葜皂苷元（中国药品生物制品检定所）；供试样品：小花玄参茎叶（年月采于青海省玉树州代格村农作物地，中科院西北高原生物研究所鉴定）；所用试剂均为分析纯。 方法 供试品溶液的制备 称取 小花玄参茎叶粉末（目），精确到 ，置于索氏提取器中，加适量石油醚脱脂 ，冷却后，倾出石油醚提取液，残渣蒸干后加入甲醇 ，提取至无色，回收减压至干，加蒸馏水 溶解，用饱和正丁醇萃取次（、和 ），合并正丁醇部分，减压回收至干，加 hcl，水浴回流 后冷至室温，用氯仿萃取次， 次，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转至 容量瓶中，定容，制得供试品溶液。 定性检识 醋酐浓硫酸（）检测：取供试液 ，沸水浴上蒸干，加入浓硫酸醋酐（，v/v）数滴，观察颜色变化情况；三氯醋酸检测：将供试液滴在滤纸上，喷洒（）三氯醋酸乙醇溶液，加热并观察 和 时颜色变化情况；氯仿浓硫酸（）检测：将供试液水浴蒸发所得样品溶于氯仿后加入浓硫酸，观察氯仿层和硫酸层颜色和荧光。 对照品溶液的制备 称取 菝葜皂苷元对照品以甲醇定容于 容量瓶中，配制成 的对照品溶液。 测定波长选择 分别精密吸取对照品溶液 、供试品溶液 置 具塞试管中，挥尽溶剂，加入 高氯酸， 水浴 ，冰水冷却后，在 范围内扫描，取最大吸收波长为检测波长。 标准曲线制备 精密吸取不同体积的对照品溶液于 具塞试管中，挥干后加入 高氯酸， 于 水浴 ，冰水冷却，最大吸收波长处测定吸光度，以浓度为横坐标（），吸光度为纵坐标（），绘制标准曲线。 精密度试验 取对照品溶液 ，以甲醇调零，在最大吸收波长处测定吸光度，重复测定次。 稳定性试验 取供试品溶液 ，定容至 ，间隔 测定吸光度，重复测定次。 重复性试验 精密称取份同一供试样品，同上方法处理，测定吸光度。 加标回收试验 称取 已知含量的供试样品粉末份，分别准确加入对照品溶液，测定吸光度，计算含量。 样品测定 称取 小花玄参茎叶粉末，精确到 ，制得供试品溶液，测定吸光度，根据回归方程计算总皂苷含量。 结果与分析 定性结果通过定性试验可判断小花玄参茎叶中主要含有甾体皂苷类成分，可能含有三萜类化合物。 定量检识结果 选择测定波长并绘制标准曲线 在 进行扫描，选择测定波长，发现对照品和供试品溶液均在 处有最大吸收，选择 作为测定波长。在此波长下测吸光度绘制标准曲线，得回归方程： ， 。结果表明，菝葜皂苷元在 范围内线性关系良好。 方法评价 精密度试验中，次测定吸光度的为，表明仪器精密度良好；稳定性试验中，每隔 测定吸光度的为，表明在 内样品溶液的稳定性良好。重复试验的为，表明本方法重现性较好。加样回收试验结果见表。由表可知，该方法的平均回收率为，符合回收率要求（），为。 样品测定结果 样品的总皂苷平均含量为，为，结果见表。 讨论预试验分别对提取溶剂（不同浓度乙醇和甲醇）、提取方法（超声和回流）及提取时间进行了单因素和正交试验分析，最后确定了文中供试液的制备方法。小花玄参茎叶中主要含有甾体皂苷，菝葜皂苷元为各类甾体皂苷的母核皂苷元，故可采用该化合物作为对照品；本试验采用分光光度法测定小花玄参中总皂苷含量，线性关系好，方便快速。本结果表明，小花玄参茎叶中总皂苷含量较高，为开发小花玄参中的皂苷提供了依据。参考文献： 孙耀军，邹 建皂苷不同测定方法的比较江西食品工业，（）： 宋晓凯天然药物化学北京：化学工业出版社， 郭秋平，吴湖坤，关红晖，等不同产地的知母中