种子生活力的测定.doc

_种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法 【原理】 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲 （TTF），胚便染成红色。当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。TTC还原反应如下：TTC（无色） TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子把；单面刀片片；垫板（切种子用）块；烧杯个；棕色试剂瓶；解剖针把；搪瓷盘个；pH试纸。【试剂】TTC溶液的配制：取1g TTC溶于L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1的TTC溶液。药液p应在6.57.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。 【方法】 1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30）浸泡26h，使种子充分吸胀。 2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。 3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。 4.放入3035的恒温箱内保温30min.也可在20左右的室温下放置4060min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗23次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。 表32-1 染色法测定种子生活力记载表方法种子名称供试粒数有生活力种子粒数无生活力种子粒数有生活力种子占供式粒数的% 【注意事项】 1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 2.染色温度一般以2535为宜。 3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。 4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。 5.不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。现将主要作物种子生活力测定所需条件列入表32-2。表32-2 TTC法测定主要作物种子生活力要点作 物种子准备TTC浓度(%)在35下染色时间(h)水 稻去壳纵切0.123高粱、玉米及麦类作物纵切0.10.51棉花、荞麦、蓖麻剥去种皮1.023花生 甜菜 大麻 向日葵剥去种皮0.134大豆 菜豆 亚麻 二叶草无须准备1.034二、红墨水（酸性大红）染色法 【原理】 有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性，有选择吸收外界物质能力，某些染料如红墨水中的酸性大红不能进入细胞内，胚部不染色。而丧失活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料进入细胞内使胚部染色，所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。【仪器与用具】与TTC法相同。【试剂】红墨水溶液的配制：取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）作为染色剂。 【方法】 1.先将待测种子用水浸泡34h，待充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸35min，作为死种子。 2.取浸好的新种子、陈种子和死种子各50粒，如为小麦和玉米，则用单面刀片沿胚部中线纵切成两半，其中一半用于测定。 3.将备好的种子分别放在培养皿内，加入红墨水溶液，以浸没种子为度。 4.染色1020min后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子， 直到所染颜色不再洗出为止。5.对比观察冲洗后的新种子、陈种子和死种子胚部着色情况。凡胚部不着色或略带浅红色者，即具有生活力的