实验七 蔬菜中硝酸盐含量的测定(紫外分光光度法).doc

实验七 蔬菜中硝酸盐含量的测定（紫外分光光度法）1、实验目的掌握蔬菜中硝酸盐的测定原理，熟悉取样方法、样品的处理、测定和仪器的使用方法，了解各种试剂的配制方法。2、实验原理用pH9.69.7的氨缓冲液提取样品中硝酸根离子，同时加活性炭去除色素类，加沉淀剂去除蛋白质及其他干扰物质，利用硝酸根离子和亚硝酸根离子在紫外区219nm处具有等吸收波长的特性，测定提取液的吸光度，其测得结果为硝酸盐和亚硝酸盐吸光度的总体，鉴于新鲜蔬菜、水果中亚硝酸盐含量甚微，可忽略不计。测定结果为硝酸盐的吸光度，可从标准曲线上查得相应的质量浓度，计算样品中硝酸盐的含量。3、 仪器与试剂 3.1 仪器（1） 紫外分光光度计（2） 分析天平：感量0.01g，0.0001g。（3） 研钵（4） 可调式往返震荡机（5） pH计3.2 试剂（1） 盐酸。（2） 氢氧化铵。（3） 氨缓冲溶液（pH9.69.7）：量取20ml盐酸，加到500nl水中，混合后加入50ml氢氧化铵，用水定容至1000ml。用精密pH计调pH到9.69.7。（4） 活性炭（粉末）。（5） 正辛醇。（6） 亚铁氰化钾溶液K4Fe(CN)6 .3H2O=15%：称取150g亚铁氰化钾溶于水，定容至1000ml。（7） 硫酸锌溶液(ZnSO4)=30%：称取300g硫酸锌溶于水，定容至1000ml。（8） 硝酸盐标准溶液：称取0.2039g经1105烘干至恒重的硝酸钾（优级纯），用水溶解，定容至250ml。此溶液硝酸根质量浓度为500mg/L，于冰箱内保存。4、实验步骤4.1 取样 选取一定数量的生菜，先用自来水冲洗，再用蒸馏水清洗干净，用吸水纸吸干表面水分，剪碎后充分混匀，称取5.0g于研钵中充分捣碎。4.2 提取 将匀成浆后的样品少量多次共20ml水洗净研钵，将样品全部转移到50ml容量瓶中，加1滴正辛醇消除泡沫，再加入3ml氨缓冲溶液，0.5g粉末状活性炭。放置于可调式往返振荡机上（200次/min）振荡30min，加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液各1ml，充分混合，加水定容至100ml，充分摇匀，放置5min，用定量滤纸过滤。同时做空白实验。4.3 测定 根据试样中硝酸盐含量的高低，吸取上述滤液10ml于50ml容量瓶内，用水定容。用1cm石英比色皿，于219nm处测定吸光度。4.4工作曲线的配制 分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2ml硝酸盐标准溶液于50mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，此标准系列溶液硝酸根质量浓度分别为0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0和12.0mg/L。用1cm石英比色皿，于219nm处测定吸光度，以标准溶液质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。5、结果计算 样品中硝酸盐含量以质量分数表示，数值以毫克每千克（mg/kg）计，按公式（1）计算：=pV1V3/ mV2 （1）式中： 样品中硝酸盐含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； p从工作曲线中查得测试液中硝酸盐质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V1提取液定容体积，单位为毫升（ml）； V2吸取滤液体积，单位为毫升（ml）； V3待测液定容体积，单位为毫升（ml）； m样品质量，单位为克（g）。计算结果保留到整数位。6、注意事项 本标准适用于新鲜蔬菜及水果中硝酸盐含量的测定。本方法检出限为1.2mg/kg。本方法的线性范围为2.00mg/kg12.00m