导学案(微生物的实验室培养).doc

课题1 微生物的实验室培养【学习目标】1 说出培养基的类型、用途和基本成分。2 举例说明常用的消毒与灭菌方法。3 阐明培养基配制的方法和接种的方法。重难:培养基的营养成分、无菌操作的基本方法、配制培养基的基本步骤、常用的微生物的接种方法。【自主学习】一 基础知识（一）培养基1.概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的 营养物质。2.分类方式分类标准类型备注培养基的 培养基、 培养基和半固体培养基培养基中加入凝固剂（有琼脂、明胶、硅胶等）即为 培养基。 培养基是实验室中最常用的培养基之一。微生物的种类细菌 培养基、放线菌 培养基、酵母菌 培养基和霉菌 培养培养基的特殊用途基础培养基、加富培养基、选择 培养基和鉴别 培养基选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。鉴别培养基：是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。如鉴别大肠杆菌的 培养基，鉴别纤维素分解菌的 培养基。3.培养基的化学成分包括 四类营养成分。除此之外， 培养基还要满足微生物生长对 、特殊营养物质以及 的要求。4.E.coli指 。（二）无菌技术1.关键 防止 的入侵。围绕如何避免杂菌的污染展开。2. 无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 ；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 ；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与 相接触。3.比较消毒和灭菌消毒灭菌概念用较 的物理或化学方法杀死物体 的部分微生物（不包括芽孢和孢子）用较 的理化因素杀死物体 微生物（包括芽孢和孢子）常用方法 消毒法（ 消毒法） 消毒法、紫外线消毒法灼烧灭菌、 灭菌、 灭菌适用对象操作空间、液体、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等二 实验操作（大肠杆菌的纯化培养）（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：根据 比例，计算100mL培养基各成分用量。2.称量：牛肉膏较黏稠，可用玻棒挑取，同 一同称量。称取牛肉膏和蛋白 胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。3. 溶化：加水加热熔化牛肉膏与称量纸取出称量纸加入蛋白胨和氯化钠继续加热 加入 用蒸馏水定容到100mL（整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）。4.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用 灭菌锅灭菌； 所用培养皿用报纸包扎后用 箱灭菌。5.倒平板：待培养基冷却至 左右时在 附近操作进行。其过程是：在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。（二）纯化大肠杆菌1.方法：微生物接种的最常用方法是 和 （1）平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐 步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是：将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰达到 的目的。将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划35条平行线，盖上皿盖，不要划破 培养基。 接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复 上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。将平板倒置放在培养箱中培养。（2） 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼 脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。取盛有9mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次，使之混匀。从101倍液中吸取1mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依 此类推。2. 培养：将接种后的培养基和一个 的培养基都放入 恒温箱中，培养12h和24h 后喷喷别观察并记录结果。（三）菌种保藏：频繁使用的菌种利用 法保存，长期保存菌种的方法是 法。【合作探究与展示】1倒平板的过程中，平板冷凝后为什么要将平板倒置？2平板划线过程中，为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？3判断实验操作过程中是否成功的标准？例1. 下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（ ）A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前变式训练1.将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37恒温箱的目的是( ) A对比观察培养基有没有被微生物利用 B对比分析培养基是否被杂菌污染C没必要放人未接种的培养基 D为了下次接种时再使例2. 关微生物营养物质的叙述中，正确的是（ ）A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量变式训练2. 下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（ ）A含碳有机物 B蛋白胨 C含碳无机物 D花生粉饼等天然物质【限时训练】1. 有关稀释涂布平板法，叙述错误的是( ) A首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面来源:Zxxk.Com C再放在适宜条件下培养 D结果都可在培养基表面形成单个的菌落2. 平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（ ）A利于大肠杆菌的接种 B防止杂菌污染 C利于培养的冷却 D 防止皿盖冷却水倒流入培养基3不可能作为异养微生物碳源的是( )A牛肉膏 B含碳有机物 C石油 D含碳无机物4根瘤菌能利用的营养物质的组别是( )ANH3，（CH2O），NaCl BN2，（CH2O），CaCl2C铵盐，CO2，NaCl DNO2，CO2，CaCl25配制培养基的叙述中正确的是( )A制作固体培养基必须加入琼脂 B加入青霉素可得到放线菌C培养自生固氮菌不需氮源 D发酵工程一般用半固体培养基6下表是有关4种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的概述。其中正确的是( )生 物硝化细菌根瘤菌酵母菌谷氨酸棒状杆菌能 源氧化NH3N2的固定分解糖类等有机物光能碳 源C02糖类糖类糖类氮 源NH3N2NH4+、NO3-尿素代谢类型自养需氧型异养需氧型异养兼性厌氧型自养需氧型 A根瘤菌、谷氨酸棒状杆菌 B硝化细菌、酵母菌 C酵母菌、谷氨酸棒状杆菌 D硝化细菌、根瘤菌7 甲、乙、丙是三种微生物，下表、是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、 丙都能在种正常生长繁殖；甲能在中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在中 正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是（ ）粉状硫10gK2HPO44gFeSO40.5g蔗糖10g（NH4）2SO40.4gH2O100mlMgSO49.25gCaCl20.5g+-+-+A、甲、乙、丙都是异养微生物B、甲、乙都是自养微生物、丙是异养微生物C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物8 微生物（除病毒外）需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下 列有关微生物营养的说法正确的是( )A乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B微生物生长中不可缺少的一些微量的无机物称为生长因子 C培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利 D生长因子一般是酶或核酸的组成成分，微生物本身合成这些生长因子的能力往往不足。9要将从土壤中提取的自生固氮菌与其他的细菌分离出来，应将它们接种在( )A加入氮源和杀菌剂的培养基上 B不加入氮源和不加杀菌剂的培养基上C加入氮源，不加杀菌剂的培养基上 D不含氮源和杀菌剂的培养基上10 酵母菌培养液中常含有一定浓度的葡萄糖，但当葡萄糖浓度过高时，反而抑制微生物的 生长，原因是( )A 碳源供应太充足 B细胞会发生质壁分离C改变了酵母菌的pH值 D葡萄糖不是酵母菌的原料11. 右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型 是 。编号成分含量粉状硫10g（NH4）2SO40.4gK2HPO44.0gMgSO49.25gFeSO40.5gCa