血浆蛋白质检查.doc

第四章血浆蛋白质检查本章考点1.主要血浆蛋白质的理化性质、功能和临床意义2.血浆蛋白质测定、参考值及其临床意义3.急性时相反应蛋白（1）概念、种类（2）急性时相反应蛋白在急性时相反应进程中的变化特点及临床意义第一节主要血浆蛋白质的理化性质、功能和临床意义一、蛋白质的一般理化性质（一）两性电离和等电点蛋白质是两性电解质，其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。1.等电点（pI）：使蛋白质解离成阴、阳离子趋势相等时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点。2.电泳带电粒子在电场中向电性相反的电极移动的现象称为电泳。 因不同蛋白质等电点不同，放在同一pH溶液中带电不同，电泳时速度不同，所以电泳是分离蛋白质常用的方法。体内血浆蛋白pI多在4-6之间，在pH7.4的血液中带负电荷电泳时从负极向正极移动。血清蛋白电泳不属于沉淀反应。（二）蛋白质的胶体性质 1.蛋白质是亲水胶体2.蛋白质不能透过半透膜3.扩散与沉降（三）蛋白质的变性1.概念：在某些理化因素作用下，蛋白质特定的空间构象被破坏，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失的现象。2.造成变性的因素如加热、乙醇尿素等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等。 3.变性特点 （1）生物学活性丧失；（2）容易消化；（3）溶解度下降（容易沉淀，但并非所有都沉淀，沉淀并非都变性，如盐析不变性）4.紫外吸收由于蛋白质分子中含有酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。二、血浆蛋白质的组成血浆蛋白质是血浆中含量最多、成分极为复杂、功能广泛的一类化合物。目前仅已分离出近于纯品者就有200多种。近年来有许多新技术用于研究蛋白质，这些资料提供了有价值的病理生理信息。有助于疾病的诊断、治疗。现将血浆中主要蛋白质的性质及功能列于下表3-4-1。表3-4-1 血浆中主要蛋白质的性质和功能蛋白质参考值（mg/L）半寿期（天）分子量（万） 等电点含糖量（%）功能前白蛋白200-4000.5 5.4 4.70营养指标白蛋白35000-5000015-196.644-5.8有较广泛的载体功能营养指标1抗胰蛋白酶780-20004 5.54.812 APR,抗胰蛋白水解酶先天性缺陷时易导致肺气肿、肝硬化1-酸性蛋白酶500-1500 54.02.7-445APR结合珠蛋白300-21502 8.5-404.112APR,结合Hb,溶血时减少2巨球蛋白1250-41005805.48抗蛋白水解酶, 肾病期增加铜蓝蛋白200-5004.5164.4APR,含铜转铁蛋白2000-350077.75.76负负性APR,运转Fe在低色素贫血时增加血红素结合蛋白500-1150 5.7 结合血红素2微球蛋白1-21.18C反应蛋白8126.20APR,防御蛋白参考值可随所用测定方法、年龄、性别而有所不同三、功能和临床意义（一）前白蛋白（PA） 1.概况分子量为5.4万，电泳时位于清蛋白前面，由肝细胞合成，不含糖。等电点pI=4.7 半寿期为12小时。2.功能（1）参与组织修补（2）运载蛋白：运输激素和维生素：如运输甲状腺激素和维生素A。 3.临床意义（1）营养不良指标；（2）肝功不全指标：在肝炎发病早期血清前白蛋白浓度下降往往早于其他血清蛋白成分的改变；（3）急性炎症、恶性肿瘤、肾炎、创伤时其血清浓度降低。（二）白蛋白（Alb）1.概况 Alb由肝实质细胞合成，是不含糖的单链多肽。白蛋白是血浆中含量最多的蛋白质，占血浆蛋白质总量的40%60%。分子量为66.4KD，由585个氨基酸残基构成的。半寿期约15 -19天。2.功能（1）营养作用；（2）维持血浆的胶体渗透压；（3）维持血浆的正常pH；（4）运输和储存作用：是血浆中主要的非特异性载体。可运输许多水溶性差的物质如胆红素、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇激素、金属离子、多种药物等等因分子量较小，它在血管外体液中的浓度可作为各种膜屏障完整性的良好指标。3.临床意义（1）浓度降低摄入不足 （营养不良）合成障碍 （慢性肝病）消耗增大 （恶性肿瘤、甲亢、重症结核等）丢失增多（肾病综合症、严重烧伤、急性失血、组织炎症等）各种原因导致的血液稀释及分布异常先天性白蛋白缺乏症（罕见）（2）浓度升高 一般为假性升高：血液浓缩如严重脱水、休克、饮水不足等。（3）个体营养状态的评价指标： Alb35g/L正常；2834g/L轻度缺乏；2127g/L中度缺乏；21g/L严重缺乏。当清蛋白浓度低于28g/L时，会出现水肿。在血浆蛋白质浓度明显下降的情况下，可以影响许多配体在血循环中的存在形式，包括内源性的代谢物、激素和外源性的药物。已发现有20种以上白蛋白的遗传性变异。习题1.血浆白蛋白不具有的功能是A.维持胶体渗透压B.参与维持血浆的正常pH C.运输某些物质D.营养作用E.免疫功能答疑编号111040101正确答案E（三）1-酸性糖蛋白（AAG） 1-酸性糖蛋白包括等分子的己糖、己糖胺和唾液酸是主要的急性时相反应蛋白，与抗体的免疫防御功能有关。临床意义：1-酸性糖蛋白的测定目前主要作为急性时相反应的指标。增高：在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死患者亦常；降低：在营养不良、严重肝损害等情况下。在急性时相反应或用类固醇皮质激素治疗时，由于1-酸性糖蛋白含量升高，结合以上药物的能力增强而干扰药物的有效作用。（四）1-抗胰蛋白酶（AAT）1.概况肝脏合成，含糖12%。1-抗胰蛋白酶是1-区带显色的主要成份，占90%左右。2.功能是血液中最主要的蛋白酶抑制剂，可抑制多种蛋白酶的活性.，占血清中抑制蛋白酶活力的90%左右。 一般认为1-抗胰蛋白酶的主要功能是对抗由多形核白细胞吞噬作用时释放的溶酶体蛋白水解酶。3.临床意义（1）浓度升高：见于急性炎症、外科手术（急性时相反应蛋白）。长期服用可的松、雌激素等药物也可升高。（2）降低：可见于胎儿呼吸窘迫症。1-抗胰蛋白酶缺陷可引起肝细胞的损害而致肝硬化，严重的遗传性缺陷常伴有早年（2040岁）肺气肿。 （五）血红素结合蛋白（Hp）1.概况：血红素结合蛋白也称结合珠蛋白、触珠蛋白。为一种含糖量12%的糖蛋白。是肝脏合成的一种急性时相反应蛋白。半寿期为5天。2. 功能：在血浆中结合游离的血红蛋白，防止其由肾脏丢失，有效的保留铁。一分子Hp结合两分子Hb,结合不可逆。Hb-Hp复合物半寿期90分钟，Hp是5天，肝细胞能迅速将复合物从血浆中清除。3.临床意义：（1）急性时相反应时浓度增加。（2）烧伤、肾病综合症引起大量Alb丢失，可使其含量升高。 （3）溶血性疾病如溶血性贫血、输血反应、疟疾时，Hp含量明显下降。正常参考范围宽，连续观察用于监测急性时相反应，如溶血是否处于进行状态。（4）严重肝病患者Hp合成降低。（六）2-巨球蛋白（2-MG或AMG） 1.概况：分子量为62.580万，是血浆中分子量最大的蛋白质。由肝细胞与单核吞噬细胞系统合成。含糖量为8%。半寿期为5天。2.功能：与不少蛋白水解酶结合影响这些酶的活性，选择性保护某些蛋白酶的活性，可能与免疫反应有关，与淋巴网状系统细胞的发育和功能有关。3. 临床意义：升高：见于低白蛋白血症（代偿，保持血浆渗透压）；妊娠、口服避孕药也可使其升高。 降低：胰腺炎及前列腺癌时含量降低。婴幼儿及儿童血浆2-巨球蛋白含量约为成人的2倍3倍，这可能是一种保护机制。 （七）铜蓝蛋白（CER/Cp） 1.概况：肝合成的含铜2-糖蛋白，有基因多型性。半寿期为4.5天。2.功能：（1）具有氧化酶的功能（也叫亚铁氧化酶，属血浆功能酶）参与铁代谢，使Fe2+ Fe3+。 利于Fe3+和运铁蛋白结合,参与体内铁的运输和动员。也可催化多酚及多胺类物质氧化。（2）作为铜的载体和代谢库血清中的铜95%存在于CER中,5%以扩散态存在。细胞可利用血中CER中的铜合成多种含铜的酶。3. 临床意义：（1）协助诊断Wilson病（肝豆状核变性）Wilson病患者血清总铜浓度不变，铜蓝蛋白含量降低（10mldl以下），而伴有血浆可透析的铜（游离铜）含量增加，这是本病的特征。此病为常染色体隐性遗传，主要由于体内铜代谢障碍所致。CER也是一种急性时相反应蛋白。（2）感染、创伤、肿瘤时升高。（3）肝癌（转移性）、胆石症、肿瘤引起的胆道阻塞、妊娠、口服避孕药时含量升高。（4）减低见于肾病综合征、严重肝病。（八）转铁蛋白（TRF）1.概况：转铁蛋白是血浆中主要的含铁蛋白质。分子量：7.7万。含糖量：6%。肝脏合成，半寿期7天。2.功能：以TRFFe3+的形式运输内源性与外源性铁，与成熟红细胞的生成有关。一分子TRF可以结合2个Fe3+（1mg运铁蛋白可结合1.3g铁）。TRF的浓度受Fe供应的调节，缺铁时TRF升高。自由铁对机体有害，与TRF结合，还可防止Fe从肾丢失。3. 临床意义：（1）TRF用于贫血的诊断和治疗监测100ml血清具有结合338gFe的能力，但通常结合铁仅100g即铁饱和度为30-38%。缺铁性低血色素贫血：TRF升高，但铁饱和度降低；再生障碍性贫血：RBC对Fe利用低，TRF下降或正常，但铁饱和度高。 （2）急性时相反应TRF下降，炎症、恶性病变随Alb、PA同时下降。（3）肾病综合症、营养不良、慢性肝病下降，可作为营养状态指标。（4）妊娠、口服避孕药或注射雌激素可使TRF升高。（九）2-微球蛋白（BMG）1.概况：由淋巴细胞合成的单链多肽，是分子量较低的蛋白质（分子量1.1万） 。不含糖，半寿期为107分钟。2. 功能：是淋巴细胞表面抗原链部分，存在于所有有核细胞表面，特别是淋巴细胞和肿瘤细胞表面并由此释放入血。2-微球蛋白可透过肾小球,在肾小管几乎全部被重吸收并被完全降解。3.临床意义：（1）血中浓度升高,见于肾衰、炎症、肿瘤。（2）临床用于监测肾小管功能：如肾移植后如有排斥反应影响肾小管功能时, 尿中BMG排出量增多。（3）脑脊液中浓度升高，见于急性白血病和淋巴瘤有神经系统浸润。（十）C-反应蛋白（CRP）1.概况：C-反应蛋白是一种能与肺炎链球菌细胞壁C多糖体反应的急性时相反应蛋白。由肝细胞合成，电泳分布区带。广泛分布于人体体液中，如胸腹水、心包液、关节液、血液等处。2.功能:能激活补体,促进吞噬和其他免疫调控。可抑制血小板凝集和血块收缩。3.临床意义：是第一个被发现的急性时相反应蛋白。是急性时相反应的一个极灵敏的指标。浓度升高： 急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿瘤浸润、风湿病时血浆C-反应蛋白浓度在迅速地显著升高可达正常浓度的数千倍。由于CRP升高是非特异性的，结合临床症状有助于某些疾病病程随访。特别在炎症过程中，随访风湿病、系统性红斑狼疮、白血病等。习题2下列不属于运载体类的血浆蛋白质是A.转鉄蛋白B.铜蓝蛋白 C.清蛋白D.免疫球蛋白E.前清蛋白答疑编号111040201正确答案D第二节血浆蛋白质的测定、参考值、方法评价及其临床意义许多疾病可引起血浆蛋白变化，分析这些变化在临床上有重要价值。 蛋白质测定方式大体可分为：1.用化学法定量测定血清（浆）总蛋白、白蛋白和球蛋白的含量及白蛋白与球蛋白的比例；2.电泳方法将血浆蛋白初步分离，半定量检测主要组分及图谱，并用相对百分比表示；3.用免疫化学法特异测定个别蛋白，如用免疫比浊法测前清蛋白。通过制备特异的抗血清，测定Ag-Ab复合物，多用试剂盒。一、血清总蛋白测定方法及临床意义（一）测定方法测定方法较多有：凯氏定氮法：是血浆总蛋白测定的参考方法；双缩脲反应：是推荐方法；紫外吸收法：需要纯度较高；染料结合法、比浊法等。临床一般采用双缩脲比色法，是蛋白质定量的推荐方法，用于常规检测。1.原理：蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与Cu2+作用生成蓝紫色络合物，颜色深浅在一定范围内与蛋白含量成正比。经与同样处理的蛋白标准液比较，即可求得蛋白质含量。2.评价：（1）简便、准确、重复性好精密度、准确度较高；（2）只对蛋白作用，氨基酸无反应 （体液中小分子肽较少）各种蛋白呈色相近；（3）干扰少，大多可避免 ，温度影响不大，乳糜血可干扰其测定；（4）缺点是灵敏度稍差。（二）临床意义血清总蛋白有生理性波动：直立体位由于体液分布原因，血液相对浓缩，而长久卧床者血液较直立体位稀，因此长久卧床者血清总蛋白比直立活动时约低35gL。新生儿血清总蛋白可比成人低58gL。60岁以上的老年人约比成人低2gL。1.血清总蛋白增高：（1） 各种原因引起的机体明显失水时出现假性蛋白增多症（血液浓缩，总蛋白含量相对增高，但A/G变化不大）。严重腹泻、呕吐、高热时急剧失水，血清总蛋白浓度可明显升高。休克时，由于毛细血管通透性增加，血液中水分渗出血管，血液可发生浓缩。慢性肾上腺皮质功能减退的患者，由于丢失钠的同时伴随水的丢失，血浆也可出现浓缩。（2）血浆蛋白质合成增加：主要是球蛋白合成增加。见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、免疫球蛋白病等。2.血清总蛋白降低：（1）蛋白质丢失 如肾病综合症、胃肠道疾病致吸收不良、严重烧伤、大出血等，使蛋白质大量丢失；（2）长期摄入不足及消耗增加如食物中长期缺乏蛋白质或慢性胃肠道疾病所引起的消化吸收不良、肿瘤、结核、甲亢等；（3）各种慢性肝病时蛋白质（尤其是白蛋白）合成减少；（4）各种原因引起的血液稀释。导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过多低渗溶液或因各种原因引起的钠、水潴留。二、血清清蛋白测定方法及其临床意义（一）测定方法溴甲酚绿法（BCG法）：溴甲酚绿是一种阴离子染料，Alb的pI=4.7，在pH4.2的缓冲液中，与白蛋白结合成复合物，溶液由未结合前的黄色变成蓝绿色，在628nm波长的吸光度与白蛋白浓度成正比，经与同样处理的白蛋白标准液比较，即可求得白蛋白的含量。 （二）临床意义（1）清蛋白浓度增高：除严重脱水，血浆浓缩而使清蛋白增高外，尚未发现单纯清蛋白浓度增高的疾病。（2）清蛋白浓度降低：同总蛋白浓度降低。三、球蛋白的含量及白蛋白与球蛋白的比例1.球蛋白的含量是通过血清总蛋白测定值减去血清清蛋白测值计算出的。2.临床意义（1）球蛋白浓度增高：临床上球蛋白增高多见于炎症、免疫系统疾病和肿瘤。1）细菌、病毒、寄生虫引起的急慢性感染：结核病、麻风病、疟疾、黑热病、血吸虫病、病毒性肝炎。2）自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、硬皮病、风湿热、类风湿性关节炎等。3）多发性骨髓瘤和淋巴瘤：多发性骨髓瘤是一种单克隆疾病，它是由浆细胞恶性增殖造成的异常高的单一Ig（多见于IgA或IgG0）血症。淋巴瘤也属单克隆疾病。（2）球蛋白浓度降低：见于血液稀释、严重的营养不良、胃肠道疾病等。3.清蛋白与球蛋白比值（AG比值） AG比值反映了清蛋白与球蛋白浓度变化的关系。正常AG比值为121。临床上常用AG比值来衡量肝脏疾病的严重程度，当AG比值小于1时，称比值倒置，为慢性肝炎或肝硬化的特征之一。习题3.下列对血清蛋白叙述错误的是A.白蛋白/球蛋白比值为12/1B.白蛋白参考范围为3550g/L C.总蛋白参考范围为6080g/LD.白蛋白和球蛋白均由肝实质细胞合成E.血浆蛋白在维持血液渗透压和酸碱平衡上均起重要作用答疑编号111040301正确答案D习题4溴甲酚绿法测定血清白蛋白显色原理是A.溴甲酚绿在pH7.6环境中与白蛋白形成蓝绿色化合物B.溴甲酚绿在pH9.2环境中与白蛋白形成蓝绿色化合物C.溴甲酚绿在pH4.2环境中与白蛋白形成蓝绿色化合物D.溴甲酚绿在pH8.6环境中与白蛋白形成蓝绿色化合物E.溴甲酚绿在pH4.7环境中与白蛋白形成蓝绿色化合物答疑编号111040302正确答案C四、血清蛋白电泳分析1.原理血清中各种蛋白质的等电点不同，在同一pH电场中所带电荷量也不同，加之蛋白质的分子量亦不相同，所以在同一电场中电泳迁移率就有差异。用醋酸纤维素薄膜做载体，用pH8.6的缓冲溶液电泳，血浆蛋白带负电荷，按其泳动速度可将血清（浆）蛋白质分成分为五条区带，从正极到负极依次为白蛋白和1、2、-球蛋白，白蛋白跑得最快，含量高，染色颜色最深，-球蛋白跑得最慢，1区带染色最浅。通过染色和光密度扫描可计算出各区带蛋白质占总蛋白的百分含量，是了解血清（浆）蛋白质全貌的有价值的方法。利用血清电泳测定各组分的含量，通常采用各区带百分浓度与血清总蛋白浓度相乘以g/L表示。清蛋白： 57-68% 35-52g/L1-球蛋白： 1.0-5.7% 1.0-4.0g/L2-球蛋白： 4.9-11.2% 4.0-8.0g/L -球蛋白： 7-13% 5.0-10.0g/L -球蛋白： 9.8-18.2% 6.0-13.0g/L在琼脂糖凝胶电泳中常可分出13个区带，采用特殊染色方法可区别出脂蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳在适当条件下可以分出30分多个区带。2.临床意义血清蛋白电泳图谱的分型分为临床疾病诊断提供依据（表3-4-2）。肾病型：可见于急慢性肾炎、肾病综合征、肾功能衰竭等，图形表现为Alb降低，2和升高；肝硬化型：可见于慢性活动性肝炎、肝硬化等，图形表现为Alb降低，和增高，可出现和难以分离而连接在一起的“-”桥，此现象是由于肝脏纤维增生导致IgA增高所致；急性反应时相型：常以1、2增高为特征；慢性炎症型：则以Alb降低，2、增高较为常见；M蛋白血症主要见于多发性骨髓瘤，患者有大量单克隆蛋白质 （主要是IgG或IgA），电泳时可在和之间出现一条狭窄的区带，称M区带。表3-4-2异常血清蛋白质电泳图谱的分型及特征表3-4-2异常血清蛋白质电泳图谱的分型及特征血清蛋白质电泳图谱子总蛋白质Alb121.低蛋白血症NN2.肾病型不定-3.肝硬化型NNN-（融合）4.急性炎症或急性时相反应症NNN5.慢性炎症型 6.弥漫性肝损害型N7.弥漫宽球蛋白血症型N8.M蛋白血症型 在-区带中出现M蛋白峰-M区带峰9.高2 （）球蛋白血症10.妊娠型（高型）NN11.蛋白质缺陷型个别区带出现特征性缺乏正常、异常血清蛋白电泳图比较习题5.血清蛋白电泳出现-桥，最常见于下列哪种疾病A.急性肝炎B.肾病综合征 C.急性肾小球肾炎D.肝硬化E.胆囊炎答疑编号111040303正确答案D 第三节急性时相反应蛋白 一、概念在急性心梗、外伤、炎症、手术、肿瘤时血浆某些蛋白质水平可有明显的升高或降低，这一现象被称为急性时相反应（APR），这些蛋白质被称为急性时相反应蛋白。它们可能是机体防御机制的一部分，具体机制尚不十分清楚。二、急性时相反应蛋白的种类正性急性时相反应蛋白：（浓度升高）1-抗胰蛋白酶1-酸性糖蛋白结合珠蛋白铜蓝蛋白 C-反应蛋白纤维蛋白原C4、C3负性急性时相反应蛋白：（浓度下降）前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白三、急性时相反应蛋白在急性时相反应进程中的变化特点及临床意义 当机体处于急性时相反应时，血浆蛋白相继出现一系列特征性变化，这些变化与疾病进程相关，因此可以此鉴别急性、亚急性、慢性病理状态。在一定程度上急性时相反应蛋白与病理损伤的程度和范围也有一定的相关性。 如急性心梗时，早期C-反应蛋白、1抗胰蛋白酶、1酸性糖蛋白、触珠蛋白上升很快，然后相继在3周内逐步降低至正常。组织损伤后24小时血中触珠蛋白和1抗胰蛋白酶开始升高，同时可有血中纤维蛋白原水平的上升，可使血栓形成的可能性升高。C反应蛋白是一种主要的急性反应期的指示蛋白，其在组织损伤后68h就可上升，上升幅度可达正常值的20500倍，在致病因素消除后C反应蛋白可很快恢复正常。因为C反应蛋白在血中的半寿期1日，因此其在抗生素治疗时有一定的参考价值。急性反应期一般同时有免疫球蛋白水平升高是因为急性感染或其他组织损伤刺激了淋巴细胞（B细胞）的免疫球蛋白合成。在生理情况下，如女性怀孕、放节育环、口服避孕药时也可出现急性时相反应蛋白水平的升高。练习题习题6.关于急性时相反应蛋白叙述不正确的是A.在炎症、创伤、心梗、感染、肿瘤等情况下，血浆急性时相反应蛋白浓度发生显著变化B.急性时相反应时，血清AAT、AAG、Hp、CER、CRP等蛋白浓度升高 C.前清蛋白、白蛋白、转鉄蛋白属于负性急性时相反应蛋白D.急性时相反应是机体防御机制的一部分E.急性时相反应是机体对炎症的特异性反应答疑编号111040304正确答案E习题7.可使蛋白质变性的方法不包括A.高温B.极端pHC. 尿素D. 十二烷基磺酸钠E. 盐析答疑编号111040305正确答案E习题8.血清蛋白电泳时通常用pH8.6的缓冲液，此时各种蛋白质带有的电荷为A.白蛋白带正电荷，其他蛋白带负电荷B. 白蛋白带负电荷，其他蛋白带正电荷C. 白蛋白和其他蛋白均带负电荷D. 白蛋白和其他蛋白均带正电荷E. 白蛋白和其他蛋白均不带负电荷答疑编号111040306正确答案C习题9.关于白蛋白下列叙述不正确的是A.参与激素和药物的代谢B.维持血液胶体渗透压，具有缓冲酸与碱的能力 C.血液中游离脂肪酸多和白蛋白结合运输D.占血浆蛋白的40%-60%E.维持血浆晶体渗透压答疑编号111040307正确答案E习题10.Wilson病时不可能出现以下哪种变化A.血清总铜浓度升高B.血清游离铜浓度升高 C.尿铜排出增加D.血清CER浓度降低E.血清ALT浓度升高答疑编号111040308正确答案A习题11.引起血浆白蛋白减少的原因不包括A.外科手术B.系统性红斑狼疮C.慢性肾小球肾炎D.严重腹泻、脱水E.大面积烧伤答疑编号111040309正确答案D习题12.血浆哪一种蛋白的测定对营养不良和肝功能不全比较敏感A.白蛋白B.前白蛋白 C.转鉄蛋白D.2微球蛋白E.1糖蛋白答疑编号111040310正确答案B习题13.C反应蛋白在下列哪种情况下不升高A.细菌感染B.病毒感染 C.急性心肌梗死D.高血压E.大面积烧伤答疑编号111040311正确答案D习题14.下列可能导致血清总蛋白增高的是A.营养不良B.消耗增加 C.水分丢失过多D.肝功能障碍E.消耗性疾病答疑编号111040312正确答案C1516题共用题干患者，男性，55岁患严重的背部疼痛及不适，3个月内体重下降3公斤，实验室检查血清总蛋白110g/L,清蛋白39g/L，血清蛋白电泳见球蛋白区间中间部分显著深染，其扫描峰高于清蛋白峰习题15.可初步诊断为A.多发性骨髓瘤B.肾结石 C.肝硬化D.肝癌E.背部劳损答疑编号111040313正确答案A习题16.其血清蛋白电泳中所见的典型蛋白峰称为A.本-周蛋白B.IgM C.蛋白D.免疫球蛋白轻链E.免疫球蛋白重链答疑编号111040314正确答案C1719共用备选答案A.清蛋白,1,2, 不定- B. 清蛋白,1 N,2 N,融合-C. 清蛋白,1,2, 、ND. 在-区带间出现M蛋白区带E. 清蛋白，1，2、习题17.肾病综合征患者的特征性血清蛋白电泳图谱为答疑编号111040315正确答案A习题18.肝硬化患者的特征性血清蛋白电泳图谱为答疑编号111040316正确答案B习题19.多发性骨髓瘤患者的特征性血清蛋白电泳图谱为答疑编号111040317正确答案D2023共用备选答案A.白蛋白B.1球蛋白 C.2球蛋白D.球蛋白E.球蛋白习题20.在正常人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳图谱中泳动最快的是答疑编号111040318正确答案A习题21.在正常人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳图谱中泳动最慢的是答疑编号111040319正确答案E习题22.在正常人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳图谱中区带颜色最深的是答疑编号111040320正确答案A习题23.在正常人血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳图谱中区带颜色最浅的是答疑编号111040321正确答案B第五章诊断酶学本章考点：1.血清酶（1）分类、生理变异与病理生理机制（2）酶活性与酶质量测定方法及其评价（3）同工酶及其亚型测定的临床意义2.血清酶活性检测技术（1）酶活性概念和表示方法（2）酶活性测定方法分类、原理、优缺点及应用（3）影响酶作用的因素（4）工具酶的概念、代谢物测定中常用的指示反应3.常用血清酶及同工酶测定的参考值及临床意义（1）肌酸激酶及同工酶和其亚型（2）乳酸脱氢酶及同工酶（3）氨基转移酶及同工酶（4）碱性磷酸酶及同工酶（5）谷氨酰基转移酶及同工酶（6）淀粉酶及同工酶（7）酸性磷酸酶及同工酶4.代谢物酶法测定 第一节血清酶 一、血清酶的分类根据酶的来源及其在血清中发挥催化功能的情况，可将血清酶分为两大类。（一）血浆特异酶在血浆中发挥特定催化作用的酶。如凝血酶、胆碱酯酶（CHE）、脂蛋白脂肪酶、铜氧化酶等。它们大多数在肝内合成，在血浆中的浓度甚至超过器官细胞内浓度。有的可以作为肝功能试验的一部分。血浆特异酶活性的改变，除了反映血液功能外，还反映来源器官的功能。 （有少部分酶在细胞合成后分泌到血液中行使其功能，如凝血因子及有关的纤溶因子。它们以酶原状态分泌人血，在一定的条件下被激活，引起相应的生理或病理变化。）（二）非血浆特异酶在血浆中浓度很低，且无功能，分为两种。1.分泌酶：来源于消化腺或其他外分泌腺的酶。如-淀粉酶（AMY）、前列腺酸性磷酸酶（ACP）、脂肪酶（LPS）、胃蛋白酶原、胰蛋白酶原 、ALP等。正常体液中外分泌酶活性低而稳定，不发生催化作用。在血液中的浓度和其分泌腺体的功能活动和疾病有关，来源增加或排泄受阻时，血浆中此类酶活性增高。例如，急性胰腺炎时，血淀粉酶就会升高。2.代谢酶：（细胞酶）在细胞内发挥催化功能的酶。正常时这些酶存在于组织细胞中，血浆中酶活性很低。细胞内、外浓度差异悬殊。当酶来源的组织细胞发生病变，细胞膜通透性增加或细胞坏死时，细胞内酶大量进入血浆，导致血浆酶活性显著增高。其下降的临床意义很少。 这一类酶临床应用较多，如转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶等，它们在肝病、心脏疾病时都可能出现变化。二、血清酶生理变异及其病理生理机制（一）血清酶生理变异除病理因素外，有不少生理因素可以影响血清酶测定数值，这些变化无临床病理意义。1.性别：大多数酶无性别差异，只有少数酶如CK和GGT存在明显差异，CK和GGT都是男性高于女性，因此不能以一个参考值作为判断标准。2.年龄：不少酶在儿童期和成人时活性不同，例如新生儿的CK和LD活性常为成人的23倍，以后逐渐降低，到一定年龄和成人一样。变化最明显的酶是和骨的生长发育有密切关系的碱性磷酸酶。有些酶在进入老年期也可能有变化，如ALP和GGT到老年时可能有轻度升高。3.进食：多数酶不受进食影响，但酗酒可引起GGT明显升高。4.运动：剧烈运动可引起血清中多种酶升高，升高程度和运动量、运动时间以及是否经常运动有关。升高的酶多为肌肉中含量丰富的酶，如CK、LD、AST等。5.妊娠与分娩：妊娠时有许多生理变化，也可出现一些酶升高，如妊娠时ALP（因有胎盘ALP同工酶）升高，分娩时可能有CK、CK-BB、LD升高。（二）血清酶病理改变机制疾病时，影响血清酶的因素很多，主要机制如下：1.酶合成异常：血浆特异酶大多数是在肝合成，当肝功能障碍时酶浓度常下降。如血清胆碱酯酶活性在有肝功能障碍时可下降。由于酶基因变异也可引起特定酶减少或消失，如肝-豆状核综合征患者血中铜氧化酶活性可明显下降。如有骨细胞增生时，血中ALP可上升。此外恶性肿瘤，应用某些药物，也可引起相应的血清酶变化。2.细胞酶的释放：是疾病时大多数血清酶增高的主要机制，影响细胞酶释放的主要原因有：（1）细胞内、外酶浓度的差异：非血浆特异酶在细胞内、外浓度可差千倍以上，只要有少量细胞受损伤，酶从细胞中释出，就可使血液中酶明显升高；（2）酶在细胞内的定位和存在的形式：胞质中游离的酶如ALT、LD最容易释放人血，而在亚细胞结构中的酶则较难释放出来，特别是线粒体酶，如肝细胞中的AST常需细胞出现坏死病变时才能释放人血；（3）酶蛋白分子量的大小：酶释放的速度大约和分子量成反比，此因素对酶在血液出现时间的影响大于对酶浓度高低的影响，例如LD分子量大于CK，而当有心肌梗死时，LD在血液中升高的时间就晚于CK。3.酶在细胞外间隙的分布和运送：细胞中酶有三种途径进入血液：血管内皮细胞和血细胞的酶直接进入血液；酶可同时进入血液和组织间隙，后者再入血；酶大部分进入组织间隙后再入血。这些因素都会影响酶进入血液的时间和升高的程度。4.血液中酶的清除：不同疾病和不同的酶从血液中清除的时间和机制不同，同一疾病不同酶恢复正常的时间也不一样，这和酶的半寿期以及一些其他因素有关。习题1.下列哪种酶是血浆特异酶A.胆碱酯酶B.脂肪酶C.转氨酶D.乳酸脱氢酶E.淀粉酶答疑编号111050101正确答案A习题2.细胞酶的释放量不受下列哪个因素的影响A.各种酶的测定波长及反应速率B.细胞内外酶浓度的差异 C.酶的相对分子量D.酶的组织分布E.酶在细胞内的定位和存在形式答疑编号111050102正确答案A 第二节血清酶活性检测技术 一、酶活性测定的基本知识酶测定包括酶量测定和酶活性测定。酶在体液中含量极微，仅为ng/L水平，测定酶量十分困难。因此临床上大都采用酶活性测定，以酶活性间接表示酶量。（一）酶活性的概念与表示法1.概念：酶活性指酶催化反应的能力即酶促反应速度。反应速度是指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量。 2.表示方法：酶活性的大小通常以酶单位数表示。（1）酶的国际单位在实验规定的条件下（温度、最适pH、最适底物浓度时），在1分钟内催化1mol底物发生反应所需的酶量为1个酶活力国际单位（U）。（2）Katal（催量）：即每秒钟转化1个摩尔底物（mol /s）的酶量。国际单位和katal间换算关系如下： 1U1mol / min 110-6 / 60s 16.67nkatal（二）酶活性单位的计算计算酶活性单位之前，按照酶单位定义确定物质量、体积和时间的单位，然后进行计算：酶单位/升=如果采用分光光度法，并知产物或底物的摩尔吸光系数，可变换为：为摩尔（线性）吸光体系（Lmol-1cm-1）A为吸光度变化v为标本体积（ml）V为反应体系体积（ml）L为管径（cm）在实际测定中后面几项皆为常数，用K表示，叫做酶活力浓度测定转化因子： 常数K值设置：在测酶时，常数K值的选择是很重要的。比值过高虽然测定的线性范围较宽，但重复性差，反之，虽然精密度好，但线性窄。K值设置的出发点应是测定酶的判断值或参考值上限，应保证这些值测定的可靠，所以转氨酶的常数K一般在3000左右。（三）酶促反应进程能够真正代表酶活性大小的是线性期的酶促反应速度，即酶促反应初速度。 酶活性测定时首先要确定线性期，在此期测定反应速度才能准确代表酶活性。习题3.酶单位Katal的含义是A.每秒钟能催化1mol底物的酶量为1KatalB.每分钟能催化1mol底物的酶量为1KatalC.每秒钟能催化1个单位的底物的酶量为1KatalD.每分钟能催化1个单位的底物的酶量为1KatalE.每秒钟能催化1 mol底物的酶量为1Katal答疑编号111050103正确答案E二、标本采集要点在实验室测定酶之前，标本要经过采集、分离血清和储存等一系列处理过程，而酶在血中是处于一个动态变化过程，血液离开体内后，会有一定变化。因此在其中任何一个阶段处理不当，都有可能引起测定值变化。1.不能溶血：因大多数酶在血细胞中的含量比在血浆中高得多。如LDH高150倍，ALT高7倍。2.及时分离血细胞：防止血细胞内酶大量进入血浆； 3.及时测定：防止酶蛋白变性；4.尽量用血清标本：防止某些抗凝剂对酶的抑制作用；（除非测定与凝血或纤溶有关的酶）5.有些标本不能冷冻：有的酶在低温下不稳定。常用酶如ALT、AST、ALP、CK、GGT、和AMY，冷冻保存在10个月活性变化不大。但有些酶如LD在融冻时被破坏，LD在低温反而不如室温稳定，即所谓的“冷变性”。采血后如不及时将血清和血凝块分离，血细胞中酶同样可以透过细胞膜进入血清，所以采血后12小时实验室必须及时离心，分离血清。一般都不采用血浆而采用血清作为测定标本。大多数抗凝剂都在一定程度上影响酶活性。酶蛋白不稳定，易失活。大部分酶在低温中比较稳定，分离血清如不能及时测定，应放冰箱保存。三、酶的测定（一）酶活性测定方法1.按反应时间分类法：20世纪50年代以前大都使用固定时间法。这种方法是以酶催化反应的平均速度来计算酶的活性，现多已不用。50年代中期开始采用连续监测法。这种方法用自动生化分析仪上完成，可以测酶反应的初速度，其结果远比固定时间法准确，在高浓度标本尤为明显，但本法也受到反应时间，反应温度，试剂等的影响，应加以注意。（1）定时法：（两点法）通过测定酶反应开始后某一时间段内（t1到t2）产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。酶与底物在一定温度下作用一段固定的时间，通过加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等，使反应完全停止（也叫中止反应法）。加入试剂进入化学反应呈色测出底物和产物的变化。该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或物的变化。优点：简单易行，对试剂要求不高。缺点：难保证测定结果的真实性。难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期。随着保温时间的延续，酶变性失活加速。 （2）连续监测法：又称为动力学法或速率法、连续反应法。在酶反应过程中，用仪器监测某一反应产物或底物浓度随时间的变化所发生的改变，通过计算求出酶反应初速度。连续监测法根据连续测得的数据，可选择线性期的底物或产物变化速率用于计算酶活力。 因此连续监测法测定酶活性比定时法更准确。实际工作中，采用工具酶的酶耦联法已经成为应用最广、最频繁测酶活性浓度的方法。（3）平衡法：通过测定酶反应开始至反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量来求出酶活力的方法，又叫终点法。2.按检测方法分类法：分光光度法；旋光法；荧光法；电化学方法；化学反应法；核素测定法；量热法。（二）酶质量测定法利用酶的抗原性，通过抗原、抗体反应来直接测定酶的质量，直接用质量单位ngml、gL来表示酶含量的高低。免疫学方法与测定活性方法相比，其优点是灵敏度和特异性高，不受体液中其他物质的影响，特别是抑制剂和激活剂的影响，当血液中有酶抑制剂存在，或因基因缺陷，合成了无活性的酶蛋白时，可以测出灭活的酶蛋白量，有利于疾病诊断和科学研究。如肌酸激酶同工酶MB（CKMB）质量测定较活性测定对疾病的诊断价值高。四、酶活力测定的影响因素（酶反应动力学）大多数酶促反应是可逆反应，酶反应动力学中所指速度是反应的初速度。影响酶活性的因素包括底物的浓度、酶反应的最适pH、最适温度、酶的抑制作用，另外还包括试剂中表面活性剂的作用等因素。 （一）底物浓度的影响：在检测试剂中底物浓度、辅因子、活化剂、变构剂的种类和浓度均对酶的测定至关重要。其中以底物的种类和浓度最为重要。底物浓度的影响不是简单的直线关系，米氏方程描述了底物浓度对酶促反应速度的影响。1.米氏方程： 当S m当底物浓度足够大，反应