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实验四酶的特异性 生物化学实验之 山东师范大学生命科学学院 实验目的 学习酵母蔗糖酶 粗提液 和唾液淀粉酶的制备 了解酶的特异性及检测方法 实验原理 酶是生物催化剂 酶对所作用的底物有严格的选择性 即酶的特异性 淀粉和蔗糖都是非还原性糖 分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物 淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖 蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖 Benedict试剂 含有Cu2 常用于检验还原糖的存在 其被还原后生成砖红色的Cu2O沉淀 器材及试剂 一 器材 1 恒温水浴锅2 试管及试管架3 离心机4 吸量管5 烧杯 量筒 漏斗等 二 试剂 1 2 蔗糖2 1 淀粉 内含0 3 的NaCl 3 唾液淀粉酶溶液4 蔗糖酶溶液5 Benedict试剂 实验步骤 一 淀粉酶的特异性 1 唾液淀粉酶溶液的制备 先用蒸馏水漱口 然后用洁净试管1支 取唾液 无泡沫 约2ml 蒸馏水20倍稀释 备用 2 取试管5支 标号 按下表所列的次序操作 3 摇匀 置37 恒温水浴保温10min 然后每管加入Benedict试剂2ml 再放沸水浴5min 观察各管颜色变化 并解释实验结果 二 蔗糖酶的特异性 1 蔗糖酶溶液的制备 取活性干酵母1 0g 置于研钵中 加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约10min 再加蒸馏水至总体积约为20ml 过滤或离心 滤液或上清液备用 2 取试管5支 标号 按下表所列的次序操作 3 摇匀 置37 恒温水浴保温10min 然后每管加入Benedict试剂2ml 再放沸水浴5min 观察各管颜色变化 并解释实验结果 注意事项 唾液的稀释倍数因人而异 有时差别很大 稀释倍数可以是50 300倍 思考题 1 若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸1min 实验结果会发生什么样的变化 2 酶作用的专一性有哪几种 移液枪的使用部分用具与试剂 量程的调节1 按照从大体积调为小体积的方法调节 2 用拇指和食指旋转取液器上的旋钮 使数字窗口出现所需容量体积的数字 注意 千万不要将旋钮旋出最大量程 否则会卡住内部机械装置或者弹簧弹出而损坏了移液枪 微量移液器的使用方法 枪头 吸液嘴 的装配在将枪头 pipettetips 套上移液枪时 正确的方法是将移液枪 器 垂直插入枪头中 稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合 移液的方法1 吸取液体时 用大拇指将按钮按下至第一停点 移液器保持竖直状态 将枪头插入液面下2 3毫米 2 然后慢慢松开按钮回原点 3 接着将按钮按至第一停点排出液体 稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体 最后松开按钮 移液器的正确放置使用完毕 可以将其竖直挂在移液枪架上 但要小心别掉下来 当移液器枪头里有液体时 切勿将移液器水平放置或倒置
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