骨髓片组化染色.doc

PAS（糖原）1. 固定 PAS髓片用甲醇固定10min(或糖原固定液5min)，水洗2. PAS加血膜覆盖，置10min,水洗干燥3. 加PAS液（雪夫试剂）10ml于试管，玻片插入置37水浴箱暗处，30-45min后水洗（水下冲10min，干燥）4. 复染：苏木素复染3min，水洗，干燥结果判读（-）胞质无红色（+/-）少量红色颗粒1-3个（+）少量红色颗粒4-10个（+）红色颗粒10个（+）暗红色粗大颗粒（+）紫红色粗大颗粒附：原单：胞浆边缘或伪足呈颗粒状原粒：胞质内均匀弥散细小颗粒原淋：粗大颗粒（核周）阳性程度：粒单2% M1M4（+）=2% M5,ALLAE：非特异性酯酶. 固定 玻片先用甲醛固定10min,水洗，干燥2. A 0.005gAE 萘酚 0.5ml丙酮（先加） 0.5ml丙二酮（再加） B 取锥形瓶，加入PH7.0AE缓冲液20ml. 用吸管吸取A液慢慢滴加入B瓶内，边加边摇晃锥形瓶. 加入坚固兰0.02g充分混匀后再分为a,b两管。A管10ml插入AE玻片，b管加入0.015gNAF，插入+NAF玻片，37水浴1h,放在流水下冲洗10min，待干. 复染 苏木素复染5min,水洗，干燥附：AE缓冲液配制（PH7.0）61mlNa2HPO4+39mlKH2PO4 混匀待用结果判读：（-）无蓝色颗粒（+/-）少量稀疏蓝色颗粒（+）胞质1/2区域出现颗粒沉淀（+）胞质3/4区域出现颗粒沉淀（+）胞质全部颗粒沉淀（+）胞质全部浓集颗粒沉淀抑制率趋势：030%70%100%M1-M3 M4 M5不抑制 部分抑制 受抑制组化染色步骤 PAS（糖原）：、固定 PAS髓片用甲醇固定10min(或糖原固定液5min)，水洗、干燥、PAS加膜覆盖，置10min,水洗干燥、加PAS液（雪夫试剂）10ml于试管，玻片插入置37水浴箱暗处，30-45min后水洗（水下冲10min，干燥）、复染：苏木素复染5min，水洗，干燥 （过氧化物酶）：、POX液铺满玻片，小玻片滴，大玻片滴、滴H2H2O（蒸馏水），混匀后直接加于上步玻片上（：比例），混匀，后水洗、干燥、乙醇脱色，水洗，干燥 、复染：瑞氏染色，水洗，干燥 CE（特异性酯酶）：、固定用AKP固定液固定S，水洗，干燥、液 0.萘酚 0.-二甲酰胺 混匀使溶解B液 先加付品红滴 NO滴 .缓冲液A液与B液倾倒混匀次、玻片插入试管后放水浴，放在流水下冲洗，待干、复染苏木素复染，水洗，干燥附：CE缓冲液配制（PH7.6 ） Na2HPO4 87ml+KH2PO4 13ml 混匀AE（非特异性酯酶）：、固定 玻片先用甲醛固定10min,水洗，干燥、液 0.005gAE 萘酚 0.5ml丙酮（先加） 0.5ml丙二酮（再加）B液 取锥形瓶，加入PH7.0AE缓冲液20ml、用吸管吸取A液慢慢滴加入B瓶内，边加边摇晃锥形瓶、加入坚固兰0.02g充分混匀后再分为a,b两管。a管10ml插入AE玻片，b管加入0.015gNAF，插入+NAF玻片，37水浴1h,放在流水下冲洗10min